陕西核桃黑斑病病原菌鉴定及药剂防治研究

核桃黑斑病是危害核桃生产的重要细菌性病害,近年来在陕西严重发生。为探究陕西省核桃黑斑病的病原菌种类,制定核桃黑斑病的田间防治策略。采用组织分离法对陕西省内核桃黑斑病的病原菌进行分离纯化,获得纯培养物,通过形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,获得2种病原株系HTX和HTP,分别鉴定为野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)。通过对21种药剂进行室内抑菌试验,筛选出7种药剂对2种病原菌株系均有明显抑制作用。通过室内毒力测定和田间防治试验,结果表明中生菌素、春雷霉素、噻霉酮、琥胶肥酸铜和噻唑锌对核桃黑斑病危害的叶片、果实的防治效果均在67.67%、61.53%以上,防治效果好,可用于核桃黑斑病的田间防治。

和田地区核桃叶枯病病原菌的鉴定

2010年10月,采集新疆和田地区墨玉县托乎乡核桃叶上的一种新病害标本的病叶进行菌种分离、纯化、鉴定,并经健康核桃叶人工接种致病性测定试验,发现了引起核桃叶枯病的病原菌。根据其形态特征、培养特性和rDNA-ITS的PCR扩增及序列分析比较,鉴定核桃叶枯病的病原菌为链格孢菌。

北京地区核桃黑斑病病原菌的分离、致病性测定和16S rDNA序列分析

核桃黑斑病是危害核桃生产的重要细菌病害,造成树势衰弱,减产严重,甚至树体死亡。2008年在北京郊区栽植的幼树上发现疑似病害,且呈爆发之势。为确定其病原菌分类地位,用组织分离法分离核桃黑斑病菌,纯化培养后用针刺接种法回接到健康核桃树枝条和叶片上,14 d后叶片和枝条分别出现典型病斑,接种发病组织再分离所得病菌性状、16S rDNA与初分离的一致,完成柯赫氏法则验证;以分离的核桃黑斑病菌总DNA为模板,采用细菌16SrDNA的通用引物,通过PCR扩增到约1.5 kb的片段,克隆到pMD-18T载体。测序结果表明克隆的16S rDNA片段长为1 453个核苷酸,通过GenBank上BLAST分析,表明该病原细菌为Xanthomonas campestris。

基于16S-rDNA序列的核桃细菌性疫病病原菌遗传多态性分析

核桃细菌性疫病(Xanthomonas arboricola pv.juglandis)是世界范围内核桃产区最主要的细菌病害,对其病原菌16S-rDNA的序列进行分析,为阐明其遗传多样性提供参考。本研究从湖北省保康县和丹江口市多个核桃园采集病样,对不同核桃病组织样进行分离纯化,得到77个病原菌类似菌株,对部分菌株进行了接种和分子鉴定。用通用引物27F和1492R对其中有代表性的22株进行16S-rDNA的PCR扩增和测序。用软件MEGA7.0对所有测序结果进行遗传发育树分析,菌株之间平均遗传距离为0.244。用3种限制性内切酶MspI、AfeI和HinfI对16S-rDNA的PCR产物进行酶切,酶切结果用软件NTSYSpc2.1进行聚类分析。所有菌株之间相似系数大于52%,在76%的相似水平,可以将22个菌株划分为6个类群。用软件ApE对所有序列进行同样的3个酶切,RFLP分析结果与试验酶切结果相似。不同方法构建的聚类和发育树分析结果表明,湖北省不同地理来源和病组织的菌株存在一定的遗传多态性。

石硫合剂对核桃黑斑病伴生病原菌成团泛菌的抑菌活性研究

采用抑菌圈法和平板菌落计数法,分别测定了农药石硫合剂对核桃黑斑病伴生病原菌成团泛菌在不同时间和剂量下的抑菌活性.结果表明,石硫合剂对该病原菌具有较好的抑菌作用,且表现出较强的时间与剂量效应.

辽宁新病害核桃枝枯病病原鉴定

【目的】为了对辽宁省近年发生的新病害—核桃枝枯病的病原进行鉴定,【方法】采集辽宁省葫芦岛市建昌县核桃枝枯病样品,通过对病原菌形态观察、致病性测定,以及rDNA-ITS序列分析。【结果】经分离纯化获得病原菌,通过柯赫氏法则证病,接种后出现的病害症状与直接采集到的病害标样症状一致,确定其为致病菌;对病原菌进行传统的形态学观察,病原菌分生孢子器和分生孢子的形态与胡桃楸拟茎点霉较相似;将待测菌株rD-NA-ITS序列与GenBank中相关菌株的ITS序列进行同源性比较,与Phomopsis sp.(GenBank收录号:HM595508.1)的同源性达到99%。【结论】确定辽宁地区新病害核桃枝枯病的病原菌为胡桃楸拟茎点霉Phomopsis juglandina。

甲基硫菌灵对核桃黑斑病伴生病原菌成团泛菌的抑菌活性研究

核桃黑斑病严重危害核桃生产.用抑菌圈法和平板菌落计数法分别测定了农药甲基硫菌灵对核桃黑斑病伴生病原菌成团泛菌(Pantoea agglomerans)的抑菌作用.结果表明,该农药对该病原菌具有较好的抑菌作用,且具有时间与剂量效应.

农用链霉素对核桃黑斑病伴生病原菌成团泛菌的抑菌活性

为了初步探索常见抗菌农药对核桃黑斑病伴生病原菌的抑菌作用,以核桃黑斑病伴生病原菌成团泛菌(Pantoea agglomerans)为供试菌株,以农用链霉素为抗菌素,分别用抑菌圈法和平板菌落计数法测定了对该病原菌的抑菌作用.结果表明,农用链霉素对核桃黑斑病伴生病原菌成团泛菌具有较好的抑菌作用,且随着药物浓度的增加,其抑菌效果愈加明显,在较高浓度条件下(50 mg/m L)处理96 h,其抑菌率可达49.5%.由此表明,农用链霉素对该病原菌具有较好的抗性,可作为防治核桃相关病害的首选农药.

核桃细菌性黑斑病研究进展

该文综述了核桃细菌性黑斑病的研究进展,包括核桃细菌性黑斑病的危害症状、病原、侵染循环、发病条件、检测技术、预测预报技术和防治方法等方面的成就和发展趋势。并介绍了核桃细菌性黑斑病在中国的发生情况和研究进展。

几种植物浸提物对5株细菌的体外抑制作用研究（英文）

[目的]为了寻找对核桃细菌性疫病及其他细菌有潜在防治作用的天然植物产物。[方法]用滤纸片扩散法,对15种植物的3种溶剂浸提物的抑菌作用进行了室内平板筛选。[结果]除了广玉兰和香蒲之外,其他13种植物叶片浸提物对供试的5个菌株都表现出一定程度的抑菌作用。其中七叶树叶水浸提物对枯草芽孢杆菌XHE8的抑制作用最强,抑菌圈直径达(31.3±3.9)mm,与对照直径之比达5.0以上。接骨草对5个菌株中的4个都表现出明显的抑制作用,麦冬和吉祥草对其中的3个菌株表现出明显抑制作用,它们与对照直径之比都大于1.5。七叶树叶浸提物对细菌有十分显著的抑制作用,有进一步研究和开发的潜力。[结论]研究结果为进一步筛选有效成分及抑菌机理研究奠定了基础。

成县核桃区试品种(系)黑斑病抗性评价

为了鉴定成县选育获得的4个核桃新品种(系)对黑斑病的抗病性,以当地2个主栽品种为对照进行区试,于核桃黑斑病盛发期,分别对参试的6个核桃品种(系)叶片黑斑病病叶率及病情指数进行了调查分析,并采用标准差法对各品种(系)的抗病性进行评价。结果表明:所有参试核桃品种(系)均感染黑斑病,但不同品种(系)感染程度不同,病叶率和病情指数存在显著差异(p<0.05)。抗病性强弱顺序为:Y1101>清香>B0803-5>Y1001>Y1102>香玲。感病最严重的为香玲,为高感品种(系);其次是Y1102,为抗病品种(系),其余均为高抗品种(系)。

云南核桃叶枯病病原鉴定及其生物学特性

为明确引起云南核桃叶枯病的病原及其生物学特性,本文对分离自叶枯病病斑上的一株拟盘多毛孢进行了形态学和分子生物学鉴定,并通过柯赫氏法则验证其致病性;采用生长速率法、悬滴法和载玻片法研究其菌丝生长和孢子萌发的生物学特性。结果表明,该菌株为小孢拟盘多毛孢Pestalotiopsis microspora,是引起云南核桃叶枯病的新病原。该病原菌的最适生长温度为20~25℃,最适光周期L//D=12 h//12 h,最适生长pH为4~8。病原菌的分生孢子萌发受pH和湿度的影响较大,在中性及碱性环境下不萌发,最适萌发pH为4~5;在高于90%的相对湿度下才能萌发。分生孢子在20~25℃下萌发率最高,全光照最适于孢子萌发;核桃叶汁液对分生孢子萌发有显著的促进作用。

防治核桃黑斑病药剂筛选及田间药效试验

核桃细菌性黑斑病是一种危害核桃的重要病害。为明确不同杀菌剂对核桃细菌性黑斑病菌的抑制作用以及田间防效。通过室内抑菌试验及田间喷雾防治试验,研究了中生菌素等14种杀菌剂对核桃细菌性黑斑病的抑制作用。结果表明,中生菌素等7种供试杀菌剂对核桃细菌性黑斑病原菌成团泛菌具有一定的抑制作用,其EC 50在40.27~252.41 mg·L^-1,其中中生菌素的抑制作用最强,EC 50为40.27 mg·L^-1,噻霉酮、硫酸链霉素和春雷霉素的抑制作用相当,EC 50分别为50.62、53.25、54.88 mg·L^-1,氟啶胺的EC 50为176.96 mg·L^-1。中生菌素、噻霉酮、氟啶胺和春雷霉素4种药剂田间药效试验结果表明,4种药剂对核桃黑斑病均有良好的防治效果,田间防效依次顺序为:中生菌素>噻霉酮>氟啶胺>春雷霉素。中生菌素对核桃果实黑斑病防效为81.35%,对核桃叶部黑斑病防效为82.65%。春雷霉素对核桃果实黑斑病防效为71.58%,对核桃叶部黑斑病防效为74.87%。中生菌素、噻霉酮、氟啶胺和春雷霉素等药剂可作为防治核桃细菌性黑斑病的理想药剂。

四川盆地核桃黑斑病病原菌的分离、鉴定与核桃抗病性评价

为鉴定引起四川盆地地区核桃黑斑病的病原菌,采用组织分离法对病原菌进行分离,利用柯赫氏法则验证其致病性,依据菌株形态学和基于16S rDNA基因序列分析对病原菌进行鉴定;同时,利用分离的菌株对18个栽培品种(无性系)进行抗病性评价。结果表明,分离菌株的菌落形态与黄单胞杆菌属(Xanthomonas)相似,其16S rDNA序列与树生黄单胞杆菌(X.arboricola)的(登录号为KP340804.1)同源性高达99%,因此,将引起四川盆地地区核桃黑斑病的病原菌鉴定为树生黄单胞杆菌。18个核桃栽培品种(无性系)的田间侵染发病率和病情指数分别为35.07%~78.57%和17.71%~51.96%,变异系数分别为17.62%和28.78%,并以此为基础评价出5个高抗病品种(无性系)。这为核桃黑斑病致病机理研究和抗病新品种的选育奠定基础。

云南主栽核桃品种对Alternaria alternata叶枯病的抗病性评价

为了解云南地区不同核桃品种对叶枯病的抗性,从而为核桃抗病品种选育和叶枯病的防治提供依据,试验采用田间调查和离体叶片接种法获得病斑面积和病情指数,采用聚类分析的方法对田间调查和离体接种的病斑面积进行聚类分析,并结合病害分级标准,综合评价云南主栽37个核桃品种对Alternaria alternata的抗病性。结果表明:‘大泡核桃1’叶片上未出现病斑,‘小圆果’病斑面积最小,为5.05 mm^2,而‘圆菠萝2’病斑面积最大,达到887.68 mm^2;采用Ward最小偏差平方和法和欧式距离进行聚类分析,其聚类效果与接种结果和田间调查结果的吻合度最好。通过田间调查和离体接种综合评价,将37个核桃品种分为13个抗病品种、15个中抗品种、7个中感品种和2个感病品种。

云南主栽核桃品种对叶枯病菌的抗性评价

为评价云南核桃主栽品种对叶枯病病原菌Pestalotiopsis disseminata的抗性,采用离体接种的方法,将病原菌P.disseminata接种到栽培的31个核桃品种嫩叶上,5d后对病斑面积均值进行聚类分析。结果表明:接种P.disseminata后,不同品种的核桃抗病能力存在差异,31个核桃品种中,抗病品种20个,分别为夹棉大麻、大包壳、大泡核桃、三台核桃、新新2号、漾杂一号、云新90306、漾杂二号、夹棉小麻、云新90301、云新云林、漾杂三号、纸皮核桃、小胖若核桃、云新高原、青皮大泡、小圆果、新翠丰、桐子果、大木瓜核桃;中抗品种8个,分别为新早丰、云新90303、大尖嘴、方壳核桃、娘青核桃、四方果、漾江一号、细皮核桃;中感品种1个,为扎343;感病品种2个,为小泡核桃和圆菠萝。

核桃枝枯病小新壳梭孢巢式PCR检测方法的建立

近年来,小新壳梭孢Neofusicoccum parvum导致的核桃枝枯病屡有报道,该病防治困难,发病率高,是核桃的一种灾难性病害。为建立N.parvum的快速、灵敏的分子检测体系,根据N.parvum的几丁质合酶1基因(CHS1)及其前后100bp序列,分别设计了两对特异性引物CT-WK3-S/CT-WK3-A和CT-N-S/CT-N-A,建立了N.parvum的巢式PCR检测方法。结果表明,建立的体系可以从不同来源的5个N.parvum菌株中特异性地扩增出97bp的目的条带,灵敏度达30fg/μL,是常规PCR的10倍,而从其近缘种葡萄座腔菌属Botryosphaeriasp.的病原菌及其他供试菌株均未扩增出任何条带。以感染N.parvum的核桃组织总DNA为模板进行检测,可以在发病早期检测出N.parvum的存在。本研究建立的巢式PCR体系可以为核桃枝枯病的田间检测提供思路。

核桃细菌性黑斑病病原分子鉴定及室内药剂筛选

为确定云南地区核桃细菌性黑斑病的病原菌并筛选防治核桃细菌性黑斑病的有效药剂,采用分子生物学方法鉴定病原菌,牛津杯法测试8种药剂对黑斑病病原菌的抗菌活性,测定8种药剂对黄单胞杆菌和成团泛菌,2种病原菌的室内毒力。结果表明:对2种病原菌均有抑菌活性的是3%噻霉酮、72%农用链霉素和16%苯甲·中生,其中3%噻霉酮和72%农用链霉素对成团泛菌和黄单胞杆菌的EC50分别为3.89、9.97 mg/mL和4.93、14.94 mg/mL,有着较强的抑制作用。

核桃品种对黑斑病抗性的研究

作者用标准差法研究了20个核桃品种(系)对黑斑病的抗性,结果表明,供试品种(系)均可感病,但品种(系)间的抗性存在显著差异,其中‘陇32’和‘西林2’等2个品种(系)为高抗品种,‘陇11’‘陇15’‘维纳’‘扎343’‘辽3’等5个品种(系)为中抗品种,‘中林1’、A02、‘元丰’‘丰辉’‘西洛3’等5个品种为抗病品种,‘中林5’‘阿7’‘鲁光’‘辽1’‘辽4’‘西扶2’等6个品种为感病品种,‘香玲’和‘中林3’等2个品种为高感品种。

由核桃疫病果实上分离的一株栖稻假单胞菌YKW14

【目的】对一株来自云南昆明核桃疫病幼果上的细菌YKW14进行生理生化特性和分子鉴定。【方法】通过传统的细菌显微形态观察,不同培养基生长状况比较,生理生化特性测定,抗药性及冰核活性测试,结合16S-rDNA和gyrB基因序列比对分析,用MEGA7.0构建进化发育树对菌株进行鉴定。【结果】菌株YKW14在LB培养基平板生长良好,在含2%氯化钠的培养基上不能生长,致死温度为55℃。该菌株对石硫合剂、稻瘟灵和戊唑醇有抗性,对壮观霉素、卡那霉素和氨苄青霉素钠也表现出抗性,而对头孢无抗性。菌株的16S-rDNA和gyrB基因序列与NCBI中的栖稻假单胞菌同源性和相似性为100%。结合形态、生理生化特性和基因序列,将菌株YKW14鉴定为栖稻假单胞菌Pseudomonas oryzihabitans。【结论】栖稻假单胞菌为首次在核桃疫病幼果上分离报道。该菌可能为核桃果实疫病的复合侵染病原菌之一,其致病性或在疫病发生中的作用有待进一步验证。