滇中地区核桃枝枯病病原菌与主栽品种抗病性的鉴定

【目的】探明滇中地区核桃枝枯病的病原菌种类,为抗性主栽核桃品种选育及核桃枝枯病防治提供依据。【方法】采用组织分离、柯赫氏试验与形态学鉴定、分子生物学鉴定相结合的方法,对采自滇中核桃产区的核桃枝枯病病原进行分离培养与鉴定,并通过菌饼刺伤接种活体枝条的方法研究滇中地区7个核桃主栽品种(漾濞核桃、三台核桃及云新高原等)对致病菌株的抗性。【结果】成功分离得到致病菌株DZHT113,其在PDA培养基上培养7 d后菌落平均直径为5.6~6.1 cm;分生孢子器圆球形,具孔口,器外壁光滑或有菌丝附着;分生孢子橄榄球形,无隔,多数具2个油球,大小为(4.8~6.7)μm×(2.3~2.9)μm;NaOH颜色反应呈黄绿色。目标病原菌接种健康核桃枝条可引起枝条枯死,发病初期,枝条出现红褐色或紫褐色病斑,后期病部密生红褐色或黑色点状物,为病原菌的分生孢子器。果实受害后亦产生红褐色至黑褐色点状物。结合该病菌形态特征、分子鉴定及柯赫氏试验结果确定菌株DZHT113为菜豆拟茎点霉(Phomopsis phaseoli),将其分别接种漾濞核桃、漾江1号及云新云林等7个云南核桃主栽品种的健康枝条,7 d后不同品种对菌株的敏感性表现存在显著差异,漾濞核桃、漾江1号、云新云林和云新高原等核桃品种相对抗病,而三台核桃、昌宁细香核桃及新疆核桃相对感病。【结论】滇中地区核桃枝枯病由菜豆拟茎点霉(P.phaseoli)引起;当地核桃主栽品种漾濞核桃、漾江1号、云新云林和云新高原相对抗病,而三台核桃、昌宁细香核桃及新疆核桃相对感病。

核桃枝枯病菌生物学特性研究及药剂毒力测定

核桃枝枯病矩圆黑盘孢菌分生孢子萌发的最适温度为２７～３０℃，最高为３６℃，菌丝生长的最适温度为２５～２７℃，最高为３７℃，１５℃时生长迟缓。核挑树皮浸液对分生孢子萌发和产泡具有明显刺激作用，该菌在ＰＤＡ＋１０％核桃树皮浸液（简称ＰＤＡＢ）培养基上生长良好。菌落初期近白色，渐变为黄白色，后呈暗灰色，在２７℃恒温培养下１０天左右菌丝开始集结成团，１５天左右在菌丝团上形成露珠状物，并从中长出黑色分生孢子盘。用纸碟抑菌圈法对６种杀菌剂进行了毒力测定，以１２．５％速保利可湿性粉剂和５０％甲基托布津可湿性粉剂抑菌效果最好，４０％多菌灵胶悬剂和４０％福美砷可湿性粉剂次之，５０％速克灵可湿性粉剂、２０％粉锈宁乳油抑菌效果较差。

核桃枝枯病病原菌生物学特性及药剂防治

对核桃枝枯病的新病菌新壳梭孢（Neofusicoccum parvum）研究发现,菌落生长初期颜色为白色,逐渐成灰黑色,培养3周后变成黑色。最佳培养条件为：PDA培养基、温度25~30℃、p H=7~8、全光照、100%湿度、碳源为葡萄糖,氮源为谷氨酸。选取9种化学药剂对病菌进行了室内药剂的筛选,通过菌丝生长抑制试验,筛选出70%甲基托布津可湿性粉剂、50%多菌灵可湿性粉剂和75%百菌清可湿性粉剂3种高效药剂,其抑制率依次为66.67%、64.44%、44.44%。

野核桃枝枯病菌拮抗细菌的筛选及鉴定

为得到对野核桃(Juglans regia L.)枝枯病有效的生防菌株,本研究采用平板对峙培养法筛选出对野核桃枝枯病菌(Juglanconis juglandina)具有拮抗作用的细菌菌株,对其进行形态学观察和16S rDNA序列同源性分析;观察拮抗细菌对菌丝生长的影响,分析该拮抗菌株的抑菌机制。结果表明,菌株QB002对野核桃枝枯病菌(J.juglandina)的生长抑制率为88.6%,同时对苹果腐烂病菌(Cytospora mali,C.salicicola)、枣果黑斑病菌(Alternaria alternata)、李褐腐病菌(Monilinia fructicola)都有一定抑制作用。该菌为革兰氏阳性细菌,在NA培养基上单菌落呈淡黄色,形状不规则,中间有褶皱,不透明,表面不光滑。结合形态特征及16S rDNA序列,明确菌株QB002为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌能使供试病原菌菌丝畸形,从而抑制其生长。