‘西林3号’核桃体细胞胚胎诱导与增殖的影响因素

【目的】筛选最佳的‘西林3号’核桃体细胞胚胎诱导和增殖培养条件。【方法】通过进行不同消毒方法、不同外植体、不同采样时期、不同激素浓度配比、不同蔗糖与谷氨酰胺浓度处理,对核桃胚性愈伤组织的诱导情况进行研究,筛选最佳诱导条件;同时对比不同激素浓度对核桃体细胞胚胎增殖率的影响,筛选最佳增殖培养基。【结果】雄花(花药)、种子、幼胚的最佳消毒方法分别为70%乙醇15 s+10%NaClO浸泡4 min、70%乙醇30 s、70%乙醇5 min,培养4 d后的存活率高,污染率低。幼胚是诱导胚性愈伤组织的最佳材料,5月31日是最佳的采样时间,诱导率分别为(65.00±7.07)%和(85.83±1.17)%。以愈伤组织为材料时,诱导胚性愈伤组织的最佳激素浓度配比为改良DKW培养基添加1.0 mg/L 6-BA、2.0 mg/L KT、0.01 mg/L IBA,诱导率为(37.94±1.33)%。以愈伤组织为材料时,诱导胚性愈伤组织的最佳蔗糖质量浓度为30 g/L,诱导率为(82.67±0.94)%,谷氨酰胺不是诱导胚性愈伤组织的影响因素。体胚增殖的最佳激素浓度配比为改良DKW培养基添加0.5 mg/L 6-BA、1.0 mg/L KT、0.005 mg/L IBA,增殖率为98%。【结论】外植体和采样时间的选择直接影响体胚诱导的结果,对于幼胚这类果实内部材料来说,仅进行简便快捷消毒即可。激素和碳源是胚性愈伤组织诱导与发生的关键因素,谷氨酰胺不是胚性愈伤组织诱导的影响因素。在进行体胚继代增殖培养时,适当添加激素可以抑制体胚成熟,提高增殖率。

核桃种子油体发育及不同品种种子子叶油体特征差异分析

【目的】通过观察不同核桃品种种子油体发育过程,分析其成熟期子叶油体特征,旨在寻找核桃种子油体合成的起始时间及发生位置,了解不同品种种子在子叶油体特征上的差异及其与含油率间的关系,加深对新疆早实核桃品种种子细胞超微结构的认识。【方法】以新疆早实核桃品种‘温185’和‘新新2号’为试验材料,采用索式脂肪测定仪检测核桃种子脂肪含量,并运用透射电子显微镜技术观察种子发育进程中细胞器的发育消解及油体发育过程。【结果】花后30 d,核桃种子胚中开始存在单独的细胞,各细胞壁之间界限清晰;单独细胞中开始形成各种细胞器。花后50 d,细胞内的细胞器更为丰富,同时内质网数量不断增多,且以条状为主。花后60d,内质网两端开始膨胀增厚,零星出现油体,随后种子胚中的油体数量不断增加直至成熟。细胞中的内质网数量于花后90 d开始减少,其余各种细胞器于花后110 d开始消解。花后120 d,细胞被油体和蛋白体填满。子叶细胞中的油体积累滞后于胚中的油体积累,花后60 d才开始形成单独细胞且细胞内已出现各种细胞器,同时子叶细胞中的内质网已开始膨胀增厚。至花后80 d,内质网才开始分泌小泡,形成油体,晚于胚20 d。成熟期核桃种子子叶细胞完全被油体和少量蛋白体充实,油体呈椭球体或不规则多面体,较少为球体,且油体个体间的形态与大小特征存在较大差异。种子含油率相对较高的‘温185’子叶贮藏细胞内油体数量较种子含油率相对较低的‘新新2号’少,但其直径和截面积之和却较大,且在两个品种间分别存在极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)差异。【结论】核桃种子胚和子叶中的油体主要发生于内质网,在花后60 d开始积累,且子叶中油体的积累滞后于胚,二者不具有同步性。成熟后种子子叶贮藏细胞内油体直径大小和截面积之和是导致‘温185’与‘新新2号’种仁含油率产生差异的内在主要因素。

‘新新2’和‘温185’核桃无融合生殖的解剖学研究

【目的】摸清新疆核桃品种无融合生殖的发育特点及类型,为缩短核桃遗传纯化周期、加快核桃优良品种选育提供理论依据。【方法】采用石蜡切片法对‘新新2’和‘温185’2个新疆核桃品种无融合生殖胚乳和胚发育过程中组织结构变化进行观察。【结果】核桃胚囊历经10 d左右发育成熟,具7细胞8核结构;2极核融合后经多次分裂形成胚乳细胞,历经8 d左右。供试的2个品种无融合生殖胚均由卵细胞分裂发育而来,卵细胞经分裂形成2细胞原胚、4细胞原胚、8细胞原胚到多细胞原胚,后期胚胎经球形期、心形期、鱼雷形期、成熟期发育完成,历经10 d左右。【结论】供试的2个核桃品种胚囊属蓼型,无融合生殖胚乳细胞由2极核融合发育而来,属核型胚乳,无融合生殖胚由卵细胞直接发育而来,属孤雌生殖类型。

核桃离体胚的植株再生

在选育核桃优良单株时一般利用实生苗繁殖,由于自然杂交,常易丧失优良品种的性状。核桃扦插不易生根,嫁接繁殖因接口处易发生氧化褐变,因而成活率较低。为了利用组织培养技术进行核桃的快速无性繁殖,我们(1984)

核桃胚营养代谢盛期总RNA提取方法研究

核桃是21世纪的超级食品。对核桃胚总RNA的提取是开展核桃胚发育和代谢分子生物学研究的基础环节。本试验针对核桃营养代谢盛期胚的特点,通过对改进的CTAB法、常规的CTAB法、TRIZOL法和通用植物总RNA提取试剂盒(Bioteke)四种不同总RNA提取方法的比较与分析,表明采用改良CTAB法提取的总RNA完整性较其他方法好,28 S、18 S、5 S条带清晰无明显降解,OD260/OD280值为1.875,无蛋白质污染,易于进行RT-PCR和cDNA的合成,是核桃胚营养代谢盛期的总RNA提取的有效方法。

核桃胚培养快速成苗技术初探

以核桃品种‘香玲'的成熟种胚为试材,分别以带2片子叶、带1片子叶和不带子叶的胚接入MS培养基上的成苗情况和比较HgCl_2消毒2 min、5 min、NaClO消毒10 min 3种消毒的灭菌效果表明:HgCl_2消毒5 min的效果最佳,1周后的材料污染率仅为7%;采用MS为基本培养基,不附加任何生长调节物质,以不带子叶的胚培养4周后即可成苗,未经过煅炼的苗直接移栽到装有蛭石的营养钵中,其最终成活率可达84.6%。

德国核桃‘No.120’幼胚胚轴与子叶体细胞胚胎发生及其植株再生

核桃 (Juglansregia)‘No . 12 0’品系授粉 7～ 8周的幼胚胚轴与子叶在含不同植物生长调节剂组合的诱导培养基上培养 4周后转移至无植物生长调节剂的继代培养基上培养 ,不同发育时期的体细胞胚直接形成于胚轴与子叶表面。子叶与胚轴分别在KT 2mg/L +BA1mg/L +IBA 0 .0 1mg/L与 2 ,4 D 2mg/L +KT 1mg/L的组合的诱导下体细胞胚胎发生频率最高。体细胞胚经 3～ 5℃低温处理 2个月 ,31.

通过农杆菌介导法将哈兹木霉几丁质酶ThEn-42基因导入核桃

通过根癌农杆菌C58C1ATHVRifR 介导法 ,利用烟草花叶病毒 35S双启动子和苜蓿花叶病毒引导序列控制下的含抗新霉素磷酸转移酶基因 (nptⅡ )和哈兹木霉几丁质酶基因(ThEn 4 2 )的质粒pBin19ESR为载体 ,对 3个核桃体细胞胚系进行遗传转化 ,结果获得 4 1个抗卡那霉素的体细胞胚系。经PCR和复式PCR检测 ,4 1个转化系均含有nptⅡ基因 ,其中 38个转化系含有ThEn 4 2基因。Southern杂交分析表明 ,ThEn 4 2基因已被整合到核桃体的基因组中。几丁质酶活性检测结果表明 ,转化的体细胞胚系的几丁质酶活性比对照高几十至几千倍。

影响胡桃体细胞胚萌发率若干因素的研究

在Mg(NO_3)_2饱和溶液保持的空气湿度以及4℃的黑暗条件下,进行胡桃成熟体细胞胚的低温脱水处理6、8、10、12天后,将胚移到DKW液体或固体培养基中,在光照条件下萌发,经10天处理的胚萌发率最高,分别有56％和14％的胚萌发成小苗。当液体培养基中加入BAP时,则萌发率可增加到68％,而加入GA_3,则产生抑制作用,其萌发率降至20～28％。