UPLC-MS/MS法结合化学计量学分析万氏牛黄清心丸中14种胆汁酸成分

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定万氏牛黄清心丸中14种胆汁酸成分(牛磺胆酸、7-酮脱氧胆酸、甘氨胆酸、3-氧代脱氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、甘氨石胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸)的含量,并结合化学计量学考察不同批次万氏牛黄清心丸胆汁酸成分的差异。方法采用Hypersil GOLD色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm);流动相为甲醇-0.1%甲酸水,梯度洗脱;流速:0.2 mL·min^(-1);柱温:40℃;进样量:2μL。采用加热电喷雾离子源(HESI)负离子模式,平行反应监测(PRM)模式。以聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)评价不同批次万氏牛黄清心丸的胆汁酸成分差异。结果万氏牛黄清心丸中14种胆汁酸成分在相应测定范围内线性关系良好(r>0.9993),平均加样回收率为95.6%~103.6%,RSD为0.52%~4.62%。牛磺胆酸、甘氨胆酸、去氧胆酸、胆酸可以作为差异性成分对不同批次万氏牛黄清心丸进行区分。结论该方法能够实现对万氏牛黄清心丸中14种胆汁酸成分的快速定量分析,并可客观反映不同批次万氏牛黄清心丸之间的胆汁酸类成分含量差异。

RP-HPLC法测定万氏牛黄清心丸(浓缩丸)中盐酸小檗碱的含量

目的:建立万氏牛黄清心丸(浓缩丸)的含量测定方法,有效控制该制剂的质量。方法:采用RP-HPLC法测定盐酸小檗碱的含量。以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(10%氢氧化钾调pH5.0)(28∶72)为流动相,PolarisC18-A(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱;265nm为检测波长。结果:测得线性范围0.0256～0.2304μg(r=0.9999),平均回收率为99.02%,RSD=1.61%(n=5)。结论:本方法可作为该制剂的质控指标。

含与不含朱砂的万氏牛黄清心丸对高热惊厥大鼠模型的影响

目的比较含与不含朱砂的万氏牛黄清心丸的抗惊厥作用。方法制备大鼠高热惊厥模型,记录模型大鼠给予万氏牛黄清心丸(1号方)、去除朱砂的万氏牛黄清心丸(2号方)、酸枣仁替代朱砂的万氏牛黄清心丸(3号方)后的惊厥潜伏期;取大鼠海马切片,HE染色和尼氏染色,观察海马CA1、CA2、CA3区神经元形态并海马神经元计数;以安宫牛黄丸作为阳性对照。结果随着惊厥诱导次数的增加,各组动物惊厥潜伏期均延长,与模型组比较,各给药组不同程度地延长惊厥潜伏期;与1号方比较,2号方及3号方各剂量组大鼠惊厥潜伏期均无明显差异;模型大鼠海马各区神经元形态发生明显的病理改变,1号方能明显增加模型大鼠海马神经元数目,与模型组比较差异非常显著;2号方和3号方对海马神经元的影响与1号方无明显差异。结论 1号方、2号方和3号方均有明显的抗惊厥作用,三者作用无明显差异。

朱砂与万氏牛黄清心丸致大鼠亚急性肝毒性的比较研究

目的比较朱砂和万氏牛黄清心丸(含朱砂的成方制剂)对大鼠的亚急性肝毒性。方法分别以溶剂(0.5%羧甲基纤维素钠水溶液)、1.0 g/(kg·d)朱砂、9.83 g/(kg·d)万氏牛黄清心丸[全方,含朱砂1.0 g/kg]、8.83 g/(kg·d)去朱砂的万氏牛黄清心丸(去朱砂方)对健康SD大鼠ig给药,每天1次,连续28 d。给药结束后次日取血液和肝脏,检测血汞、肝汞水平,检测血清肝功能指标,进行肝组织病理学观察。结果朱砂组血汞、肝汞和血清总蛋白(TP)水平高于对照(溶剂)组、全方组和去朱砂方组(P<0.05);光镜下,朱砂组可见轻度的肝细胞肿胀、空泡变性、炎症细胞浸润等病理改变,全方组和去朱砂方组可见色素沉积,病变轻微,偶见肝细胞肿胀、空泡变性。结论短期过量使用朱砂可引起肝汞蓄积和轻微肝损伤,万氏牛黄清心丸引起的肝汞蓄积量和亚急性肝损伤轻于单味朱砂,方中其他中药可能对朱砂起到减毒作用。