Optimization of extraction process of Amomum longiligulare T.L.Wu polysaccharides by response surface methodology

Objective:To optimize the technological conditions of ultrasonic-assisted extraction of Amomum longiligulare T.L.Wu polysaccharides and increase the yield of polysaccharides.Methods:The polysaccharide was prepared by water extraction and alcohol precipitation method,and the yield of polysaccharide was taken as an index.The effects of ultrasonic time,extraction times,ultrasonic temperature,and water-to-material ratio on polysaccharide yield were investigated through a single factor experiment.Combined experimental design and response surface analysis were used to optimize the extraction process of Amomum longiligulare T.L.Wu polysaccharides.Results:The optimum conditions of ultrasonic-assisted extraction were determined as follows:extraction time of 29 min,three extraction times,water bath extraction temperature of 68℃,water-to-material ratio of 15:1;under these conditions,the polysaccharide yield was 10.69%.Conclusion:The results are close to the predicted values of the model.This optimization test is effective and feasible,and provides a reference for the related research of Amomum longiligulare T.L.Wu.

空心莲子草多糖的提取研究

以干燥的空心莲子草粉末为原料,采用水提醇沉法提取空心莲子草水溶性多糖并进行纯化.研究了料水比、浸提温度、滤液浓缩比、醇沉乙醇用量和浸提的时间对多糖收率的影响.最佳条件为:料水比1∶20 g/mL,浸提温度60℃,滤液浓缩比1/5,醇沉乙醇用量2.5倍体积乙醇,浸提时间0.5 h,此条件下粗糖的收率为11.6%,粗糖的纯度为34.2%,多糖的收率为4.0%.对比了活性炭和AB-8大孔树脂吸附法纯化空心莲子草粗糖的效果,AB-8大孔树脂效果最佳.用红外光谱、核磁共振谱和凝胶色谱等对多糖进行了结构表征.

山香圆叶水提醇沉与颗粒制备工艺研究

为去除山香圆叶提取液的无效成分和杂质,对山香圆叶水提醇沉与颗粒制备工艺进行研究。基于正交实验L_(9)(3)^(4)优选山香圆叶提取液醇沉工艺,以浸膏女贞苷和野漆树苷的总量含量为考察指标。山香圆叶提取液最佳醇沉工艺为:提取液浓缩至料液比1∶1(g∶g),药液醇沉温度为20℃,药液含醇量60%,静置时间12h,醇沉效果好。山香圆叶提取液经醇沉后,去除了无效成分和杂质,制备的颗粒性状、外观、粒度、水分、溶化性、鉴别、女贞苷和野漆树苷的总量含量等各项指标均符合实验标准要求,优选的山香圆叶水提醇沉工艺重现性好,颗粒制备工艺操作简便,为山香圆颗粒的制备生产提供了参考依据。

正交试验优化黄芪多糖的提取工艺研究

以黄芪为试材,利用水提醇沉法提取多糖,采用正交试验考查乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比4个试验因素,以黄芪多糖提取率为试验指标进行工艺条件优化。结果表明:黄芪多糖提取工艺为提取时间1.5 h、提取温度100℃、料液比1∶6 g/mL、90%的乙醇隔夜沉淀。在此条件下,黄芪多糖提取率最高,为2.85%。通过正交试验设计优化黄芪多糖提取工艺稳定可行,为黄芪多糖提取方法的研究提供参考。

刺梨多糖提取工艺优化及抗氧化活性研究

以开封黄河故道产刺梨为原料,在单因素影响刺梨多糖提取率试验基础上,选择液料比、提取时间、提取温度,作三因素三水平响应面试验,对刺梨多糖提取工艺进行优化。修正最佳提取条件为:液料比(mL∶g)26∶1、提取时间2 h、提取温度60℃。以修正后的最优条件进行刺梨多糖提取验证试验,测得实际提取率为22.47%,基本与预测值相合,表明优化后的参数可靠,具有现实应用价值,对刺梨多糖资源的开发和利用有非常好的参考意义。通过刺梨多糖抗氧化活性试验分析,在试验测定浓度范围内,刺梨多糖表现出了较好的清除DPPH自由基和ABTS自由基能力,计算得到刺梨多糖对DPPH自由基和ABTS自由基的IC_(50)值分别为0.45 mg/mL和0.53 mg/mL。

Box-Behnken Design响应面法优化银杏叶提取物醇提水沉工艺

目的优化银杏叶提取物的醇提水沉工艺。方法在单因素试验基础上,以总黄酮醇苷转移率、萜类内酯转移率及干物质得率为综合评价指标,通过Box-Behnken Design(BBD)响应面法对液料比、提取时间、提取次数、提取液浓缩倍数、加水倍数、冷沉时间进行考察。结果醇提水沉最佳工艺为液料比8∶1(V/m),提取时间1.0 h,提取次数3次,浓缩倍数3倍,加水倍数3倍,冷沉时间28.0 h。结论BBD响应面法优化得到的银杏叶提取物醇提水沉工艺科学、合理、稳定、可行。

黄芪甘草汤中总多糖提取工艺优化

目的优化黄芪甘草汤中总多糖的提取工艺。方法采用水提醇沉法提取多糖,以多糖得率为指标,通过单因素与正交实验法优化黄芪甘草汤中总多糖提取工艺。结果黄芪甘草汤中总多糖最佳提取工艺条件为:提取温度为80℃,料液比为1∶20(g∶mL),脱脂时间为6h,提取时间为1h,提取次数3次。结论最佳提取条件下总多糖平均得率为9.71%,验证结果显示,优化后的提取工艺具有较高的稳定性和重复性。

烟草水提液醇沉技术制备烟草浸膏的研究

通过在烟草水提液中加入乙醇,选择性地去除烟草水提液中对再造烟叶感官品质产生不利影响的物质,提高烟草水提液中有效成分相对含量,实现从烟草水提液制备烟草浸膏。考查了乙醇终体积分数和烟草水提液初始密度这2个重要因素对烟草水提液醇沉效果的影响。结果表明,①烟草水提液醇沉过程中大分子物质(蛋白质、果胶和淀粉)去除率达到90%以上,烟碱和总糖保留率为70%以上,中性致香成分保留率达90%以上;②制备的浸膏中中性致香含量相对于烟草水提液为4~6倍。研究可为造纸法再造烟叶生产过程中过剩烟草水提液制备烟草浸膏提供参考依据。

轮叶党参多糖的分离纯化及结构研究

目的:确定轮叶党参多糖组分1(CLPS1)结构,为轮叶党参多糖活性研究和天然植物多糖的开发提供依据。方法:经提取、分离纯化后获得组分CLPS1,利用气相色谱、红外光谱、核磁共振、高碘酸氧化、Smith降解和甲基化分析方法等确定CLPS1结构。结果:CLPS1比旋光度为右旋44°,总糖含量为97.6%,糖醛酸为13.18%;相对分子质量为91.7,CLPS1单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸、甘露糖,摩尔比为2.7∶3.4∶2.3∶1.1∶0.5。CLPS1中存在葡萄糖醛酸,分子中含有吡喃糖并且存在α-和β-构型。主链主要由阿拉伯糖和半乳糖组成,半乳糖和葡萄糖构成支链和主链的末端残基;半乳糖分支点糖残基是葡萄糖(1→4,6)、半乳糖(1→3,6);半乳糖有1→6、1→3,6、1→、1→3、1→4键型;葡萄糖有1→、1→4、1→4,6键型;阿拉伯糖为1→5键型,半乳糖醛酸为1→3键型。结论:CLPS1为一种结构复杂的酸性多糖。

两种方法制备的蛹虫草多糖特性及体外生物活性对比分析

本研究以蛹虫草发酵液为材料,采用壳聚糖絮凝法和水提醇沉法分别制备了絮凝多糖(XDT)和醇沉多糖(CDT),并对两种方法制备所得多糖的得率、各组分含量、平均粒径和复溶性进行了对比分析,利用扫描电镜、傅里叶红外光谱和刚果红实验对其微观结构、官能团和空间构象进行表征,利用DPPH、超氧阴离子和羟自由基清除能力评价其抗氧化活性,以α-葡萄糖苷酶抑制率评价其降血糖活性,以HepG2细胞增殖抑制率评价其抗肿瘤活性。结果表明:壳聚糖絮凝法制备多糖得率为3.58%,是醇沉法的1.91倍;两种多糖在扫描电镜下的微观结构存在差异,在红外光谱下吸收图谱相似,但XDT比CDT具有更多的三螺旋结构;XDT的平均粒径更小,复溶速度更快;体外抗氧化实验表明,在相同浓度下,对DPPH、超氧阴离子和羟自由基的清除能力,均表现为XDT>CDT;体外抑制α-葡萄糖苷酶活性实验表明,低浓度时,两种多糖的抑制率没有显著性差异,但随着浓度增加,在相同条件下,XDT的抑制活性明显强于CDT;体外抑制肿瘤细胞增殖能力实验表明,在相同处理浓度下,XDT对HepG2细胞的增殖抑制作用优于CDT。综上,壳聚糖絮凝法制备的蛹虫草多糖得率更高、平均粒径更小、复溶性更佳,XDT具备较强的体外抗氧化、降血糖和抗肿瘤活性。

响应面法优化发酵猴头菇多糖提取工艺研究

为了考察益生菌发酵真菌产水溶性多糖的最佳提取工艺,以猴头菇为原料,格氏乳杆菌为发酵菌株,以发酵猴头菇多糖提取率为指标,研究了发酵时间、发酵温度以及接菌量对发酵猴头菇多糖提取率的影响。本研究利用水提醇沉提取法,在单因素实验的基础上,采用响应面法对发酵条件进行了优化。结果表明,提取发酵猴头菇多糖的最佳条件为发酵温度为35℃,发酵时间为45.5h,接菌量为4.2%,此条件下多糖提取率为(6.39±1.27)%。本研究为提取发酵猴头菇多糖提供了理论依据。

“香菇”“黑木耳”“玉木耳”多糖的提取工艺研究

食用菌具有丰富的营养价值以及食疗作用,在我国有几千年的食用历史。通过热水煮提,乙醇醇沉的方式,从香菇、黑木耳及玉木耳这3种食用菌中提取水溶性食用菌总多糖。通过对比香菇、黑木耳、玉木耳这3种食用菌在不同料液比、不同提取温度、不同提取时间、不同提取次数下的提取率,获取3种食用菌最佳提取条件,优化提取工艺。

三味板蓝根颗粒浸膏制备工艺改良研究

目的改良医院制剂三味板蓝根颗粒浸膏中间体的制备工艺。方法采用L_(9)(3^(4))正交试验优选浸膏提取工艺的关键参数,再以单因素和Box-Behnken设计-响应面法优化浸膏醇沉工艺。结果正交试验优选的浸膏最佳提取工艺为:以10倍量水(初次浸泡0.5 h),沸腾提取3次,每次提取1.5 h。经单因素和响应面法优化浸膏最佳醇沉工艺为:将药液浓缩至相对密度为1.15(80℃),以95%乙醇将药液的终点醇浓度调至65%,醇沉静置时间48 h。结论采用L_(9)(3^(4))正交试验联合Box-Behnken设计-响应面法优化医院制剂三味板蓝根颗粒的提取和醇沉工艺,达到预期效果,可为实际扩大化生产提供参考。

大蓟生品及炭品中多糖不同提取方法的比较分析

目的:分别对大蓟生品、炭品使用多种不同提取方法,探寻其应用效果具体差异性。方法:从本地择取市售大蓟饮片生品共计100个、炭品共计100个当做实验标本,所有标本均接受水提醇沉法、醇提除杂法、超声辅助法、碱提醇法进行多糖提取。以各方法之间的多糖提取含量测定值差异性展开探析。结果:探索各方法之间的多糖提取含量测定值差异性,大蓟生品中,含糖量最高的为超声辅助法(P<0.05),其次为醇提除杂法、水提醇沉法、碱提醇法。大蓟炭品中,含糖量最高的为醇提除杂法(P<0.05),其次为超声辅助法、水提醇沉法、碱提醇法。使用超声辅助法进行多糖提取时,大蓟生品、炭品得到的含糖量基本相近(P>0.05),使用碱提醇法进行多糖提取时,大蓟炭品得到的含糖量比生品显著更高(P<0.05)。结论:对于大蓟生品来说,使用超声辅助法进行多糖提取的效果最佳、含量最高。对于大蓟炭品来说,使用醇提除杂法进行多糖提取的效果最佳、含量最高。

不同梯度醇沉对红芪多糖提取含量的影响及其抗氧化活性和红外谱图的分析

目的研究不同梯度醇沉对红芪多糖提取含量的影响,及其抗氧化活性和红外谱图的分析。方法采用水提分级醇沉(20%、40%、60%、80%乙醇浓度)法提取红芪多糖,采用苯酚-浓硫酸法测定红芪多糖的含量,并利用方法学考察该含量测定方法。测定不同梯度醇沉所得红芪多糖对金属Cu2+螯合能力、DPPH自由基清除率及羟基自由基清除率。通过近红外光谱分析确定抗氧化活性最强多糖组分的特定官能团结构。结果当醇沉浓度为80%时,红芪多糖提取率为84.80%,含量为61.62%,抗氧化活性最强,红外光谱分析显示抗氧化活性最强的多糖组分中含有羟基(-OH),次甲基(C-H),羰基(C=O),碳氧单键(C-O-C或C-O)等多个还原性基团。结论红芪多糖的提取率和含量随着醇沉浓度增加明显增加,红芪多糖具有良好体外抗氧化活性,其抗氧化活性与富含羟基和次甲基等还原性官能团有关。

大别山产多花黄精提取物抗氧化活性的比较研究

目的:以大别山产多花黄精为研究对象,研究水溶物醇沉后所得醇沉物和上清干粉的抗氧化活性。方法:通过水提、醇沉、离心、洗涤得醇沉物和上清液,上清液浓缩得浓缩物,真空冷冻干燥得醇沉物和上清干粉;采用外标法测定醇沉物和上清干粉中多糖、黄酮和总酚含量;通过铁离子还原力测定以及ABTS^(+)·和DPPH·清除能力测定法比较醇沉物和上清干粉体外抗氧化活性。结果:大别山产多花黄精提取物中醇沉物得率为41.48%±4.15%,上清干粉得率为16.97%±0.64%,前者得率约为后者的2.5倍;上清干粉中多糖、总酚和黄酮含量分别约为67.35%、0.72%、0.34%,醇沉物中多糖、总酚、黄酮含量低于上清干粉;以Vc的抗氧化活性为对照,醇沉物和上清干粉都具有抗氧化活性,而上清干粉抗氧化性高于醇沉物。结论:大别山产多花黄精提取物中上清液固溶物得率较高,其多糖、黄酮和总酚含量也较高,并且具有较强的抗氧化活性。

补骨脂炮制品水提和醇沉物化学成分及肝毒性研究

目的研究补骨脂不同炮制品水提及醇沉物中5种化学成分的含量变化情况,并初步评价其肝毒性。方法制备补骨脂生品和雷公法、流水漂洗法、盐炙法炮制品的水提样品,以及雷公法、盐炙法炮制品的醇沉样品,采用高效液相色谱法测定其中补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量并进行比较;以不同质量浓度补骨脂生品、流水漂洗法、雷公法、盐炙法水提样品和雷公法、盐炙法醇沉样品作用72 h,计算各样品对野生型斑马鱼的半数致死浓度(LC50)和最大非致死浓度(MNLC);以对乙酰氨基酚为阳性对照,以上述样品(MNLC)作用72 h,观察野生型斑马鱼的基本形态和转基因斑马鱼的肝脏表型。采用Pearson相关性分析评价成分含量与肝毒性的相关性。结果与生品水提物比较,不同炮制品水提样品中补骨脂苷、异补骨脂苷的含量均显著降低(P<0.05),而雷公法、盐炙法醇沉样品中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量均显著升高(P<0.05)。生品、流水漂洗法、雷公法、盐炙法水提样品和雷公法、盐炙法醇沉样品的LC50分别为2.45、5.00、5.38、1.55、2.36、0.64 g/L(以生药量计),MNLC分别为2.21、4.53、5.02、1.37、2.13、0.53 g/L(以生药量计);与空白对照组比较,各样品处理组斑马鱼幼鱼均表现出不同程度的畸形,肝脏相对荧光强度均显著减弱(P<0.05或P<0.01)。补骨脂酚、异补骨脂素、补骨脂素等脂溶性成分与肝脏相对荧光强度的相关性较高(R2>0.7)。结论补骨脂炮制品经水提后以补骨脂苷、异补骨脂苷为主,经醇沉后补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量增加;醇沉样品的肝毒性更强,且肝毒性与补骨脂脂溶性成分的含量呈正相关。

九香虫多糖提取条件筛选及其对人乳腺癌HCC1937细胞的抑制作用

【目的】推进中药九香虫Aspongopus chinensis开发与利用,探究九香虫多糖对人乳腺癌HCC1937细胞的作用效果。【方法】采用单因素实验和正交试验探究水提醇沉法提取九香虫多糖的最优条件,基于九香虫多糖提取率来确定最佳液料比、提取温度、提取时间和提取次数;CCK-8法检测0,2,4,6,8和10 mg/mL九香虫多糖作用后24和48 h时对人乳腺癌HCC1937细胞增殖的影响;0,4和8 mg/mL九香虫多糖处理HCC1937细胞,0,24和48 h时倒置显微镜下观察HCC1937细胞形态并于24和48 h时利用Hoechst 33258染色检测HCC1937细胞凋亡,24 h时利用流式细胞术检测HCC1937细胞的细胞周期并利用Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。【结果】正交试验结果表明,九香虫多糖的最佳提取条件为:液料比40 mL/g、提取温度90℃、提取时间3 h和提取次数3次,在上述条件下九香虫多糖提取率最高,为5.067%±0.071%。4,6,8和10 mg/mL九香虫多糖能够显著抑制HCC1937细胞增殖;8 mg/mL九香虫多糖阻滞HCC1937细胞的细胞周期于S期;4和8 mg/mL九香虫多糖促进HCC1937细胞凋亡,上调促凋亡蛋白CASPASE-3,CASPASE-8和BAX表达,下调抑凋亡蛋白BCL-2表达。【结论】采用水提醇沉法在最优提取条件下提取九香虫多糖的最高提取率为5.067%±0.071%,最优提取条件为:液料比40 mL/g、提取温度90℃、提取时间3 h和提取次数3次;九香虫多糖具有体外抑制人乳腺癌HCC1937细胞的活性,且可能是通过死亡受体通路和线粒通路引发细胞凋亡。

大枣叶水提醇沉物的抗氧化活性研究

目的:对大枣叶水提醇沉物的抗氧化活性进行研究,筛选抗氧化活性良好的醇沉方式和醇沉浓度。方法:分别用不同浓度的乙醇直接醇沉、分级醇沉得到大枣叶醇沉物,以ABTS自由基清除率、DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率、还原力为考察指标,筛选抗氧化活性高的醇沉工艺。结果:大枣叶分级醇沉物总体上抗氧化活性强于直接醇沉,大枣叶水提物直接醇沉使含醇量达80%的醇沉物抗氧化活性较佳,分级醇沉物在4种不同抗氧化考察方法下呈现不同规律。结论:优选的醇沉方式和醇沉浓度,可为大枣叶健康产品的开发提供依据。

多指标综合评分法优化养阴生肌肠溶胶囊水提醇沉工艺

优化养阴生肌肠溶胶囊水提醇沉工艺。采用星点设计-效应面法,以浸泡时间、提取时间、加水量、提取次数为考察因素,以龙胆苦苷、芍药苷、甘草苷、盐酸小檗碱、6-姜酚、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含量及干膏得率为评价指标,利用熵权法进行多指标综合评分,优化水提工艺;采用L9(34)正交试验法,以浓缩比、醇沉浓度、静置时间为考察因素,以龙胆苦苷、芍药苷、甘草苷、盐酸小檗碱、6-姜酚、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含量及干膏得率为评价指标,利用熵权法进行多指标综合评分,优化醇沉工艺。结果表明,优化的水提工艺为加12倍量水,浸泡45min,提取2次,每次90min;优化的醇沉工艺为浓缩比1∶2,醇沉浓度50%,静置30h。本研究优选的水提醇沉工艺稳定性好、重复性高,可为养阴生肌肠溶胶囊后续的成型工艺研究提供参考。