熟地黄水提液对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响

为研究熟地黄水提液对Balb/C小鼠的抗肿瘤活性,用L929生物法研究熟地黄水提液刺激Balb/C小鼠单核细胞分泌TNF-α的作用。结果表明,熟地黄组单核细胞分泌TNF-α活性与对照组相比有显著性差异(P<0.05),提示熟地黄水提液具有抗肿瘤活性。

生地黄水提液中环烯醚萜苷类成分纯化工艺研究

目的优选生地黄水提液中环烯醚萜苷类成分的纯化工艺参数。方法以梓醇含量为评价指标,采用大孔树脂纯化方法,确定总环烯醚萜苷的纯化工艺条件。结果生地黄水提液中总环烯醚萜苷最佳分离纯化工艺为:选用H103型大孔树脂,以1 BV/h速度上样,用3 BV的去离子水水洗除杂,然后用5 BV的30%的乙醇以1.5 BV/h的速度洗脱,纯化后梓醇含量为8.31%,较纯化前提高4.7倍。结论该纯化工艺条件稳定、合理、可行,可作为生地黄水提液中环烯醚萜苷类成分的纯化方法。

熟地黄水提液通过外泌体miR-29a-3p调节OVX大鼠的脂代谢

目的:探讨熟地黄(Rehmanniae Radix Praeparata,RR)水提液对双侧卵巢切除(ovariectomy,OVX)大鼠脂代谢紊乱的影响及作用机制。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠随机分为5组,分别为假手术组、OVX组、RR水提液低剂量组、RR水提液中剂量组和RR水提液高剂量组,对大鼠分别行假手术或OVX,药物灌胃12周后取材,测定大鼠的体重、腹围、血清雌二醇(estradiol,E2)、子宫重量、胰岛素(insulin,INS)和血脂四项;行肝脏HE染色和油红O染色观察脂质积累;行腹部脂肪HE染色观察脂肪体积;Western blot和RT-qPCR检测腹部脂肪过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin,IL-1β)的表达;RT-qPCR检测肥胖相关因子糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,GPNMB)、血清外泌体miR-29a-3p、腹部脂肪miR-29a-3p及其靶基因核因子I A(nuclear factor I A,NFIA)的表达;Western blot检测腹部脂肪Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果:RR水提液显著降低OVX大鼠的腹围、INS、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、肝脏脂质积累、腹部脂肪细胞扩张、PPARγ、TNF-α、IL-1β、GPNMB和NFIA的表达,显著升高OVX大鼠的血清E2、血清外泌体miR-29a-3p和腹部脂肪miR-29a-3p水平,激活腹部脂肪Wnt信号通路。结论:RR水提液可降低OVX大鼠的血清E2、INS、LDL-C和肝脏脂质积累,抑制腹部脂肪细胞扩张和炎症反应,其作用机制可能是与血清外泌体中miR-29a-3p和腹部脂肪中miR-29a-3p的含量增加后致NFIA表达量下降,从而激活腹部脂肪组织中Wnt信号通路有关。

生地黄、熟地黄水提取物通过抑制铁死亡进程改善肝缺血再灌注损伤的药效对比研究

目的 对比熟地黄水提取物(RRPAE)与生地黄水提取物(DRRAE)治疗肝缺血再灌注损伤的药效和机制,以期为临床患者更优的治疗选择提供科学依据。方法 将48只C57雄性小鼠随机分为8组(每组6只):假手术组,模型组,RRPAE低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0 g·kg^(-1))组,DRRAE低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0 g·kg^(-1))组。ig给药,假手术组和模型组ig 0.9%氯化钠溶液,每天1次,连续1周;各组小鼠于末次给药2 h后行手术建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,假手术组仅开腹不缺血,再灌注后6 h取材。检测各组小鼠肝脏、脾脏系数;苏木素-伊红染色观察各组小鼠肝脏组织病理学改变;试剂盒法检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)水平;试剂盒法检测小鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、NO、丙二醛(MDA)水平;Western blotting法检测各组小鼠肝脏组织中铁死亡相关蛋白转铁蛋白(Transferrin)、溶质载体家族7成员11 (SLC7A11)、溶质载体家族39成员14 (SLC39A14)、poly结合蛋白2(PCBP2)的表达水平。培养BRL肝细胞,用50、100、150mg·mL^(-1)的RRPAE处理1h(对照组不加药)后,加野百合碱(500μmol·L^(-1))或埃拉斯汀(10μmol·L^(-1))处理24 h,试剂盒法分别检测细胞亚铁/总铁离子以及谷胱甘肽水平。结果 与模型组比较,经过RRPAE或DRRAE预给药后,给药组小鼠的肝脏、脾脏系数出现下降趋势,其中RRPAE低、高剂量组肝脏系数差异显著(P<0.05、0.001);病理染色结果显示模型组肝脏出现明显的缺血-充血区和肝细胞坏死,经过RRPAE与DRRAE给药后肝细胞状态均有所恢复,且前者的效果明显优于后者。生化结果显示,与模型组相比,RRPAE可显著降低血清中肝损伤指标AST、ALT、LDH水平,升高NO含量;显著降低肝脏MDA水平,升高SOD和NO水平(P<0.05、0.01);而DRRAE给药后对上述肝损伤及氧化应激相关指标的恢复作用整体并不显著。Western blotting实验结果显示,与模型组比较,RRPAE能够显著抑制促进铁死亡相关蛋白Transferrin、SLC39A14的表达,上调抑制铁死亡相关蛋白SLC7A11、PCBP2的表达(P<0.05、0.001),而DRRAE对铁死亡相关蛋白的调控并不明显。与模型组比较,RRPAE可上调野百合碱或铁死亡激动剂埃拉斯汀诱导的肝细胞培养基中亚铁/总铁离子以及谷胱甘肽水平(P<0.05、0.01、0.001)。结论 熟地黄缓解肝缺血再灌注损伤效果更好,其作用机制可能与调控Transferrin、SLC7A11、SLC39A14、PCBP2蛋白的表达,抑制小鼠铁死亡进程有关。

熟地超滤膜提取物对氯化镉诱导骨髓间充质干细胞增殖及遗传稳定性变化的影响

目的探讨熟地超滤膜提取物对氯化镉（CdCl2）诱导骨髓间充质干细胞（bonemarrowmes—enchymalstemcells，BMSCs）增殖及遗传稳定性变化的影响。方法采用微核实验、染色体分析、流式细胞术观察熟地超滤膜提取物对化学毒性物质CdCl2诱导BMSCs增殖、细胞微核率、染色体畸变率及凋亡率的影响。结果与CdCl2组比较，不同分子量段熟地超滤膜提取物在浓度为0．8g／L对CdCl2诱导的BMSCs有明显的促进增殖作用（P〈0．05）。与对照组比较，CdCl2组细胞微核率、染色体畸变率及凋亡率均明显增高（P〈0．05）；与CdCl2组比较，不同分子量段熟地超滤膜提取物对CdCl2诱导的BMSCs微核率、染色畸变率及凋亡率均明显降低（P〈0．05），其中BMSCs微核率及染色畸变率以10000分子量以下组降低最为明显（P〈0．05），凋亡率以10000-200000分子量组下降明显（P〈0．05）。结论熟地提取物可以减少CdCl2诱导BMSCs的凋亡率，降低BMSCs的微核率和染色体畸变率。

制何首乌多糖的超声提取工艺

目的:优选超声提取制何首乌中多糖的最佳工艺。方法:采用正交设计的方法,考察提取时间、提取温度、料液比、提取次数对制何首乌多糖得率的影响,优选出最佳的超声提取工艺,并与热水浸提法进行比较。结果:超声提取的最佳条件为用25倍的水,70℃超声提取,提取时间50 min,提取2次,多糖的得率20.04%,与热水浸提法相比提取时间明显减少。结论:该方法快速、高效、可行。

熟地黄提取物对心肌梗死模型大鼠血小板衍生生长因子及Bcl-2的影响

目的研究熟地黄提取物对心肌梗死模型大鼠心肌组织中血小板衍生生长因子(plateletderived growth factor, PDGF)和 Bcl-2 的影响。方法将 30 只健康 SD 大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组和熟地黄组,每组 10 只。模型组和熟地黄组大鼠制备心肌梗死模型。熟地黄组大鼠颈部皮下注射熟地黄提取物 4 g/kg,空白组和模型组大鼠均颈部皮下注射等体积生理盐水。 1 次/d,连续给药 15 d。采用超声心动图检测大鼠心功能指标,采用 HE 染色观察心肌组织病理组织学改变,采用 ELISA 法检测大鼠心肌组织 PDGF、 Bcl-2 水平,免疫透射比浊法检测 VEGF、碱性纤维母细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor, bFGF)和 CD34 蛋白水平。结果与模型组比较,熟地黄组大鼠左室舒张末内径、左室收缩末内径、舒张末期左室容积、收缩末期左室容积水平降低(P<0.05),左室射血分数、左室短轴缩短率水平升高(P<0.05);熟地黄组大鼠心肌组织中 PDGF[(0.53±0.02)g/ml 比(0.35±0.01)g/ml]、 Bcl-2[(1.04±0.20)g/ml 比(0.84±0.12)g/ml]、 VEGF[(85.24±12.45)pg/ml 比(65.26±10.06)pg/ml]、 bFGF[(86.27±6.56)pg/ml 比(62.26±4.37)pg/ml]和 CD34[(102.36±10.52)pg/ml 比(26.37±3.94)pg/ml]水平升高(P<0.05)。结论熟地黄提取物可改善心肌梗死模型大鼠心功能,促进心肌组织血管新生,改善病理损伤。

加速溶剂萃取-气相色谱-三重四极杆串联质谱法测定地黄中苯并芘

目的：建立中药材地黄中苯并芘的加速溶剂萃取-气相色谱-三重四极杆串联质谱（GC-QQQ-MS/MS）分析方法，并对10个地黄样品进行苯并芘残留测定。方法：以中性氧化铝为填料，乙腈为萃取剂，加速溶剂萃取法（ASE）对地黄样品进行提取和净化，提取液浓缩后，采用GC-QQQ-MS/MS技术在多反应监测模式（MRM）下测定，外标法定量。结果：苯并芘进样浓度在10~200 ng·mL-1范围内呈良好线性（相关系数0.991），苯并芘在3个添加水平下（2、5和10 μg·kg-1）回收率为82.0%~96.5%，重复性RSD（n=6）为7.4%~17.8%，方法精密度RSD（n=6）为5.7%，检出限（LOD）1 ng·kg-1，定量限（LOQ）2 ng·kg-1。结论：方法灵敏度满足国内外苯并芘限量要求，并可进行定性确证用于中药材致癌污染物苯并芘监测。

生地黄、山茱萸水提液及其含药血清对体外糖基化产物生成的影响

目的:观察生地黄,山茱萸水提液及其含药血清对体外糖基化产物生成的影响。方法:200 mmol.L-1的葡萄糖与牛血清白蛋白组成反应系统,37℃温孵,分别加入生地黄,山茱萸及其配伍水提液,含药血清,测早期糖化蛋白(果糖胺)及晚期糖基化产物(AGEs),计算抑制率(inhibitory rate,IR),及半数抑制率(IC50)。结果:山茱萸,生地黄,山茱萸,生地黄配伍分煎及合煎的早期糖化产物(果糖胺)IC50分别为0.104,0.159,0.146,0.077 g.L-1;晚期糖基化产物(AGEs)IC50分别为0.175,0.221,0.143,0.076 g.L-1。提示生地黄,山茱萸水提液对早期和晚期糖化产物均有一定抑制作用。此外生地黄,山茱萸含药血清对早期糖化蛋白IC50分别为:37.9%,49.1%,52.8%,31.6%;对晚期糖基化产物IC50分别为:78.5%,92.3%,82.9%,73.2%。表明生地黄-山茱萸含药血清对果糖胺与AGEs也都具有一定的抑制作用,且生地黄-山茱萸合煎组抑制果糖胺和AGEs的IC50优于其他组。结论:生地黄山茱萸配伍对抑制果糖胺和AGEs具有协同作用。

基于化学成分群加和性分子描述符的中药浸膏粉溶化性预测研究

目的基于化学成分群加和性分子描述符建立中药浸膏粉溶化性预测模型,并进行验证。方法采用原位浊度传感器评价中药浸膏粉溶化性,对测试方法条件进行优化并进行验证;以13种代表性中药(广藿香、当归、薄荷、瞿麦、银柴胡、乌梅、葛根、细辛、益母草、苦参、熟地黄、荆芥和川芎)浸膏粉为研究对象,检索每种中药所含化学成分,根据成分的分子描述符计算出每种中药化学成分群平均性质,进而采用偏最小二乘(partial least squares,PLS)法建立该平均性质与对应中药溶液浊度值的关联预测模型并验证。结果中药浸膏粉溶化性客观评价方法的重复性和耐用性良好;对从13种中药中检索得到的1840种成分分子描述符进行主成分分析后,由得分图和载荷图结果可知分子描述符可以区分出溶解度有差异的化学成分类别;随机划分校正集和验证集后,基于化学成分群加和性分子描述符预测溶液浊度值的PLS预测模型的RX_(cum)^(2)=0.873,RY_(cum)^(2)=0.998,Qcum~2=0.869;川芎、荆芥和益母草的浊度预测误差分别为3.4%、9.3%、23.8%。结论基于化学成分群加和性分子描述符的中药浸膏粉溶化性预测模型具有一定的预测能力,研究结果为从中药整体成分层面预测宏观物性提供参考。

生、制何首乌水提物改善MCD饲料诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎的研究

该研究观察生何首乌和制何首乌水提物对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的改善作用及其初步机制。采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine-choline-deficient diet,MCD)喂养小鼠6周进行造模,开始造模2周后小鼠灌胃50,100,200 mg·kg^-1的生何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix water extract,PMRWE)或制何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix Praeparata water extract,PMRPWE),连续给药4周。6周后结束实验,过程中持续监测小鼠体质量变化并记录;检测血清生化指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)与谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活力;进行肝脏病理切片染色观察以及NAFLD活动性评分(NAFLD activity score,NAS)的计算;检测肝组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)的含量,并进行肝组织油红O染色观察;应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测肝组织中β氧化相关分子mRNA的表达。结果显示,100,200 mg·kg^-1的PMRWE及50,100,200 mg·kg^-1的PMRPWE能够改善MCD诱导NASH病变中的肝损伤;100,200 mg·kg^-1的PMRWE及50,100,200 mg·kg^-1的PMRPWE能够减少MCD诱导NASH病变中肝脏的脂质堆积;不同剂量的PMRPWE均能够逆转MCD诱导NASH病变中肝组织中下降的β氧化相关分子mRNA的水平。以上研究表明,PMRPWE与PMRWE能够通过促进肝脏脂肪酸β氧化,减少肝脏脂质累积,减轻肝脏损伤,从而发挥改善NASH的作用,且PMRPWE的作用明显优于PMRWE。

地黄不同炮制品薄层色谱鉴别方法的建立

目的:建立地黄不同炮制品的薄层色谱鉴别方法。方法:以D-果糖、梓醇、蔗糖、棉子糖、水苏糖、蜜二糖及甘露三糖为对照品,考察提取溶剂(水,20%甲醇,50%甲醇,80%甲醇),展开剂(正丁醇-甲醇-三氯甲烷-冰乙酸-水,乙酸乙酯-吡啶-冰乙酸-水,正丁醇-冰乙酸-水),显色剂(苯胺-二苯胺-磷酸溶液,茚三酮溶液),点样量(2,4,6μL),检视条件(日光,日光底部灯,365 nm和254 nm)对薄层色谱分析的影响,确定生地黄及熟地黄饮片的供试品溶液制备方法和最佳薄层色谱条件。结果:采用薄层色谱高效硅胶G板,以正丁醇-甲醇-三氯甲烷-冰乙酸-水(13∶5∶5∶1∶2)为展开剂展开,喷以苯胺-二苯胺-磷酸溶液,110℃下加热显色,于日光底部灯下进行检视,所得地黄不同炮制品薄层色谱分离效果和显色效果较佳,斑点清晰且特征性好。结论:该薄层色谱鉴别方法操作简便易行,定性特征明显、结果直观,可有效鉴别地黄不同炮制品,并可为熟地黄的炮制终点确定提供实验依据。