卵巢肿瘤组织中Wee1蛋白激酶的表达及意义

目的:评估Wee1蛋白激酶在卵巢肿瘤组织中的表达水平及其临床意义。方法:采用免疫组化染色技术,对包含14例良性、9例交界性及36例恶性卵巢肿瘤组织的组织芯片中Wee1蛋白激酶表达水平进行检测。采用Kaplan-Meier法绘制Wee1蛋白激酶高、低表达卵巢恶性肿瘤患者的生存曲线,采用Cox回归分析Wee1蛋白激酶表达与卵巢恶性肿瘤预后的关联。结果:良性、交界性和恶性卵巢肿瘤组织中Wee1蛋白激酶表达水平分别为(1.29±0.47)、(2.22±0.83)和(2.03±1.00),3组比较,差异有统计学意义(P=0.017),恶性和交界性肿瘤组织中Wee1蛋白激酶表达水平高于良性肿瘤组织(P<0.05)。卵巢恶性肿瘤患者中15例Wee1蛋白激酶高表达,21例低表达;Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,高表达组生存状况差于低表达组(P<0.001);Cox回归分析结果显示,Wee1蛋白激酶高表达者预后差,HR(95%CI)为6.38(1.54~26.52)。结论:卵巢恶性肿瘤组织中Wee1蛋白激酶表达水平高于良性肿瘤组织,且与恶性肿瘤预后有关。

WEE1激酶及其抑制剂在抗肿瘤治疗中的应用进展

WEE1激酶是一种细胞周期调节蛋白,能调控细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)的磷酸化状态,从而调节CDK1与细胞周期蛋白B(cyclin B)复合物的活性从而实现对细胞周期的调控,且对DNA损伤检查点具有重要的调节作用。WEE1是G2/M期阻滞的关键基因,起着重要的监测作用,在一些癌症中过表达,抑制或下调WEE1激酶均能引发有丝分裂灾难,因此WEE1激酶抑制剂可能在抗癌治疗中有关键作用。在癌症的治疗过程中,WEE1抑制剂与DNA损伤剂、化学药物等联合使用会得到比单独使用更为有效,且在p53缺失的癌细胞中能发挥更好的效果。目前WEE1已成为许多癌症治疗的关键靶点之一,其抑制剂MK-1775已处于临床研究阶段,且能增强一些DNA损伤剂对p53缺失的癌细胞的杀伤能力。本文就WEE1激酶及其抑制剂在抗癌治疗中的应用作一综述。

miR-129-1-3p通过靶向抑制WEE1蛋白激酶表达逆转HNE1/CDDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药

目的探讨miR-129-1-3p对人鼻咽癌耐药细胞HNE1/顺铂(CDDP)敏感性的影响及相关作用机制。方法培养人鼻咽癌HNE1细胞及耐CDDP的HNE1/CDDP细胞,噻唑蓝(MTT)法检测HNE1/CDDP细胞对于CDDP的耐药指数;采用反转录PCR检测miR-129-1-3p和WEE1蛋白激酶在两种细胞的表达水平。采用脂质体法将miR-129-1-3p模拟物(miR-129-1-3p mimics)和阴性对照RNA(miR-NC)转染HNE1/CDDP细胞,并设立对照组。MTT法检测转染后HNE1/CDDP细胞对CDDP的半数抑制浓度(IC50)变化,Western blot法检测转染后各组细胞WEE1蛋白水平,双荧光素酶实验评价miR-129-1-3p对WEE1的靶向调控作用。结果HNE1/CDDP细胞对于CDDP的耐药指数为5.29。HNE1细胞中的miR-129-1-3p水平高于耐CDDP的HNE1/CDDP细胞,WEE1 mRNA水平低于耐CDDP的HNE1/CDDP细胞,miR-129-1-3p水平与WEE1 mRNA水平呈负相关(r=-0.9784)。与其余两组相比,miR-129-1-3p mimics转染后,HNE1/CDDP细胞对CDDP的IC50明显降低,WEE1的蛋白水平也明显降低。双荧光素酶实验结果显示miR-129-1-3p靶向调控WEE1的3'非翻译区(3'-UTR)。结论miR-129-1-3p通过靶向抑制WEE1表达逆转HNE1/CDDP鼻咽癌细胞CDDP耐药。

Wee1激酶抑制剂adavosertib

Wee1激酶是参与细胞周期G_2/M检查点和DNA损伤修复过程的关键激酶。超过50%的肿瘤存在p53基因缺失或突变,导致细胞周期G_1/S检查点的缺陷,使得肿瘤细胞DNA的复制及损伤修复过程更依赖于G_2/M检查点。抑制Wee1激酶活性后,肿瘤细胞的DNA损伤不能及时修复便进入M期,造成基因组不稳定性和染色体缺失,引发有丝分裂灾难,导致肿瘤细胞凋亡。adavosertib是阿斯利康公司研发的小分子选择性Wee1激酶抑制剂,通过选择性抑制Wee1激酶,阻滞p53基因缺陷型肿瘤在G_2/M期检查点的DNA损伤修复,导致肿瘤细胞死亡,最终达到治疗肿瘤的目的。目前adavosertib单用或与其他抗癌药物联合的研究正处于Ⅰ/Ⅱ期临床研究中,其有效性和安全性已经得到验证。

Wee1蛋白激酶的研究及进展

Wee1蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的一员,其主要通过抑制Cdc2的活性对细胞周期进行调控,进而抑制细胞进行有丝分裂。本文将对Wee1蛋白酶的作用机制、活性调节等内容进行阐述,并对研究前景进行展望。

一种靶向Wee1蛋白激酶的小分子抑制剂体外筛选模型的建立

目的建立靶向Wee1激酶的小分子抑制剂体外筛选模型,为Wee1抑制剂的筛选提供评价方法。方法使用ADP-Glo法检测Wee1的激酶活性;在p53突变型人结直肠癌细胞(WiDr)上优化了损伤剂的作用时间与浓度以及Wee1抑制剂的作用时间,建立了评价Wee1抑制剂MK-1775单用以及与化疗药物吉西他滨联用的细胞活性评价模型;使用Odyssey in-cell Western方法检测细胞内Wee1的下游蛋白Cdc2及HH3的磷酸化水平,在细胞水平验证Wee1抑制剂的作用机制。结果优化了DNA损伤剂吉西他滨的作用浓度(4.5 nmol/L)与作用时间(48 h)以及Wee1抑制剂MK-1775的作用时间(72h)。使用MK-1775对筛选模型进行验证,吉西他滨或MK-1775单用对细胞均表现出较弱的增殖抑制作用,而在联用实验中,MK-1775能明显增加吉西他滨对细胞的损伤作用,且3次重复实验结果稳定。结论成功建立了一种简单、新颖、有效的Wee1激酶小分子抑制剂体外筛选模型。

Wee1激酶及其抑制剂研究进展

有丝分裂是在细胞周期的精准调控下完成的。细胞周期依靠G_(1)/S期检查点、S期检查点和G_(2)/M期检查点及时阻滞分裂进程,确保遗传信息的完整性。由于多数人类肿瘤细胞存在由于p53突变、p53功能缺陷导致G_(1)/S期检查点失活,从而更依赖于G_(2)/M检查点的调控。细胞周期调节蛋白Wee1激酶是G_(2)/M检查点的关键调控因子,通过磷酸化周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的第15位酪氨酸实现G_(2)/M期阻滞,为DNA修复提供了时间。抑制Wee1可消除细胞周期阻滞,使肿瘤细胞过早进入有丝分裂,产生复制应激和有丝分裂灾难,且Wee1在许多肿瘤中高表达,因此是一个治疗肿瘤的理想靶点,目前其抑制剂已成为研究热门。通过对Wee1激酶的作用机制、与疾病的相关性和在研小分子抑制剂的临床应用进行详细介绍,为其进一步研究和应用提供参考。

Wee1蛋白激酶的研究进展

Wee1是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的一员,在多种肿瘤中过表达,抑制Wee1蛋白激酶活性可引起细胞死亡或永久性细胞生长停滞。研究证明Wee1可作为治疗肿瘤的靶点,其特异性小分子抑制剂AZD-1775(也称为MK1775)已进入临床Ⅱ期试验。本文就Wee1蛋白激酶的结构及其在细胞周期和恶性肿瘤中的作用作一综述。

蛋白激酶WEE1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨蛋白激酶WEE1在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床指标的相关性,并阐述其在胃癌发生发展中的作用。方法使用Oncomine数据库分析WEE1在胃腺癌和胃黏膜组织中的表达差异。选取100例胃腺癌和80例癌旁组织标本,通过免疫组织化学法和组织芯片技术检测WEE1蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达水平。对免疫组织化学结果中染色的比例以及染色程度进行半定量分析,对半定量分析结果与胃癌临床指标进行相关性分析。使用RT-PCR和Western blotting检测WEE1在胃癌和癌旁组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果WEE1在100例胃癌患者中的阳性率为86%,高表达86例,低表达14例。通过Oncomine数据库分析,蛋白激酶WEE1在胃腺癌中的表达明显高于胃黏膜组织中的表达(P<0.01)。免疫组化、RT-PCR和Western blotting均显示,WEE1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01);免疫组化还显示WEE1的表达量随着胃癌组织分期的增加而增加(P<0.01)。结论蛋白激酶WEE1在胃癌组织中高表达,提示其可作为胃癌治疗靶点之一。

蛋白激酶Pkmyt1对小鼠1-细胞期受精卵发育的抑制作用

目的:通过在小鼠1-细胞期受精卵内过表达Pkmyt1-wild type(WT)(野生型)mRNAs,研究蛋白激酶Pkmyt1对小鼠受精卵早期发育的影响,为进一步阐明Pkmyt1对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制奠定基础。方法:构建pcDNA3.1/myc-Pkmyt1-WT质粒。超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组和Pkmyt1-WT mRNAs注射组,收集各组卵细胞后采用Western blotting法检测Pkmyt1蛋白表达和Cdc2-pTyr15磷酸化状态;相差显微镜观察受精卵的形态变化并计数卵裂率。结果:pcDNA3.1/myc-Pkmyt1-WT质粒构建成功。与未注射组(0.414±0.016)和TE缓冲液注射组(0.441±0.013)比较,受精卵显微注射Pkmyt1-WT mRNAs 4h后,Pkmyt1蛋白表达水平(1.112±0.025)增高(P<0.01)。与未注射组(60.81%±3.27%)和TE缓冲液注射组(61.79%±4.08%)比较,Pkmyt1-WT-mRNA注射组卵裂率(34.2%±3.25%)显著降低(P<0.01)。Pkmyt1-WT mRNA注射组在注射hCG后29.0h检测到微弱的磷酸化信号,29.5h检测不到任何磷酸化信号。结论:Pkmyt1过表达后磷酸化Cdc2-pTyr15可抑制小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,提示Pkmyt1负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程。

华蟾素通过wee1蛋白调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖与凋亡

目的观察华蟾素(cinobufotalin, CINO)是否通过抑制wee1蛋白激酶的表达而影响卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡。方法将pcDNA-wee1转染卵巢癌细胞,构建wee1过表达SKOV3细胞并用Real-time PCR和Western blotting鉴定过表达情况,按10μg/mL CINO干预处理和分组。CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组作用48 h的细胞凋亡情况;Western blotting检测各组作用48 h时Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达情况。结果 Real-time PCR和Western blotting检测结果显示,pcDNA-wee1组wee1的表达明显高于空白对照组,而与pcDNA-wee1组比较,CINO+pcDNA-wee1组wee1的表达明显降低。与pcDNA-wee1组相比,CINO+pcDNA-wee1组卵巢癌细胞的增殖明显抑制(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05)。Western blotting结果显示,与pcDNA-wee1组比较,CINO+pcDNA-wee1组Bcl-2蛋白表达降低,而Bax和Caspase-3蛋白表达升高。结论 CINO可能通过降低wee1表达而抑制卵巢癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

WEE1 G2检查点激酶对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的研究WEE1 G2检查点激酶(WEE1)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、迁移以及侵袭的影响及失调机制。方法取RL95-2细胞系培养,并分别转染WEE1小干扰RNA(si-WEE1组)、NEAT1小干扰RNA(si-NEAT1组)、WEE1过表达质粒(pc-WEE1组)、NEAT1过表达质粒(pc-NEAT1组)、miR-139-5p模拟物(miR-139-5p mimic组)、miR-139-5p抑制剂(miR-139-5p inhibitor组),并设立相应对照组(si-NC、pc-NC以及NC mimic)。以实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测子宫内膜癌组织和细胞中WEE1 mRNA表达水平,以CCK-8实验检测细胞增殖,以Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,以Western blot检测WEE1表达。结果子宫内膜癌患者癌组织和对应癌旁组织中WEE1的表达量分别为1.19±0.21和1.01±0.20;EC细胞系(RL95-2)和人正常子宫内膜细胞(h EEC)中WEE1的表达量分别为1.95±0.15和1.00±0.10;si-NC组和si-WEE1组48 h时细胞光密度值分别为0.68±0.05和0.50±0.02;72 h时为1.12±0.09和0.75±0.05;细胞侵袭数目分别为109.33±8.06和67.67±5.25。癌组织与癌旁组织相比,EC细胞系与人正常子宫内膜细胞系相比,si-WEE1组与si-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在子宫内膜癌中,NEAT1通过miR-139-5p/WEE1促进EC恶性进展,这可能成为子宫内膜癌的诊断性生物标志物和治疗靶点。

槲皮素通过调控WEE1蛋白激酶增加宫颈癌细胞的辐射敏感性

目的探究槲皮素(QU)通过调控WEE1蛋白激酶(WEE1)在宫颈癌(CC)细胞生长中的作用。方法将Hela细胞实验分为4组:对照组,实验组、实验组+NC组和实验组+WEE1组。对照组正常培养,实验组用50μmol·L^(-1)的QU处理,实验组+NC组先转染空载质粒,再采用50μmol·L^(-1)的QU处理,实验组+WEE1组先转染WEE1过表达质粒,再采用50μmol·L^(-1)的QU处理。用实时荧光定量聚合酶链式反应检测WEE1 mRNA的表达;用细胞计数试剂盒8和克隆形成实验检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用免疫蛋白印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白的表达。结果对照组,实验组,实验组+NC组和实验组+WEE1组的WEE1 mRNA的表达分别为1.00±0.14,0.34±0.05,0.37±0.08和0.92±0.12;这4组的细胞活力分别为0.68±0.15,0.45±0.11,0.48±0.15和0.91±0.18;这4组细胞凋亡率分别为(7.82±0.91)%,(27.76±0.80)%,(27.42±1.29)%和(15.36±1.41)%;这4组PCNA蛋白表达分别为1.00±0.11,0.28±0.04,0.32±0.04和1.12±0.15;这4组Bcl-2蛋白表达分别为1.00±0.13,0.32±0.04,0.34±0.04和1.04±0.12。上述指标,对照组与实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组和实验组+WEE1组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 QU通过调控WEE1表达抑制CC细胞的生长。

萝卜素影响下化疗药物对胃癌细胞增殖的影响

目的:探讨萝卜硫素(sulforaphane,SFN)是否影响DNA损伤药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和顺铂(cisplatin)对胃癌细胞增殖的抑制效应及其机制。方法:体外培养胃癌SGC7901细胞,采用CCK8法检测细胞的活力,Western Blot分析SGC7901细胞中WEE1蛋白表达,采用pcDFNA-WEE1质粒过表达技术对SGC7901细胞中WEE1蛋白进行过表达。结果:萝卜硫素能明显增强5-氟尿嘧啶和顺铂对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制效应,萝卜硫素还呈浓度、时间依赖性的抑制SGC7901细胞中WEE1蛋白表达;pcDFNA-WEE1质粒转染能明显上调SGC7901细胞中WEE1蛋白表达,并且显著降低了萝卜硫素联合DNA损伤药物对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制效应。结论:萝卜硫素可通过抑制WEE1激酶表达增加胃癌细胞对DNA损伤药物的敏感性。