温肺降浊方通过Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤对PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬的影响

目的:探讨温肺降浊方通过Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤对线粒体自噬的影响。方法:通过重组大鼠β-NGF分化PC12细胞,Aβ_(25-35)干预其成为阿尔茨海默病细胞模型,确定Aβ_(25-35)造模的最佳浓度和时间点,设立温肺降浊方含药血清低(2%)、中(4%)、高(8%)浓度组。MDC染色和JC-1染色法观察自噬小体和线粒体膜电位,免疫荧光化学染色、qPCR和Western Blot检测各组细胞中PINK1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达。结果:β-NGF分化PC12细胞在第6天后成为海马神经元细胞形态结构,AD细胞造模条件以5μmol/L终浓度的Aβ_(25-35)干预48 h最佳。与正常对照组比较,模型组自噬小体显著增多,线粒体膜电位明显降低,PINK1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,温肺降浊方含药血清可使模型细胞自噬小体减少,线粒体膜电位明显升高,PINK1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:温肺降浊方可减轻Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬通路有关。

温肺降浊方对血管性痴呆大鼠认知功能及VEGF和iNOS表达的影响

目的观察温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠的认知功能的改变及其对脑内相关血氧动力改变诱导的血管内皮生长因子(VEGF)以及一氧化氮合酶(iNOS)基因表达,以评价温肺降浊方的脑保护作用。方法实验大鼠随机分为:空白对照组、假手术组、模型组、尼莫地平组、温肺降浊方组,采用双侧颈总动脉永久结扎法制备VD动物模型,以Morris水迷宫试验和穿梭箱实验检测来评价大鼠的认知功能,采用免疫组化法测定大鼠VEGF和iNOS的表达。结果模型组的潜伏期最短,错误次数最多(P<0.01)。温肺降浊方组的潜伏期大于尼莫地平组(P<0.01)。温肺降浊方组及尼莫地平组潜伏期大于模型组(P<0.01)。同时,假手术组与空白对照组大鼠跨越平台次数、目标象限次数无差异(P>0.01);模型组跨越平台次数、目标象限次数均低于假手术组(P<0.01);温肺降浊方组及尼莫地平组越平台次数、目标象限次数高于模型组(P<0.01);温肺降浊方组与尼莫地平组指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。温肺降浊组、尼莫地平组VEGF阳性细胞多于模型组(P<0.01),温肺降浊方组阳性细胞数多于尼莫地平组(P<0.05)。各组大鼠海马区iNOS阳性细胞数分布状况:假手术组及空白对照组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组和尼莫地平组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组iNOS阳性细胞数与尼莫地平组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论温肺降浊方能抑制血管性痴呆大鼠iNOS表达,上调VEGF的表达,改善认知功能。

温肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马Cytc、Bax蛋白表达的影响及其神经保护作用。方法:SD大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、温肺降浊方组(中药组)、盐酸多奈哌齐组(西药组),每组30只。采用2-VO法制作VD大鼠模型,Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力,流式细胞术检测海马细胞的凋亡情况,免疫组化法检测Cytc、Bax蛋白的含量。结果:(1)与假手术组比较,模型组大鼠学习、记忆成绩下降;与模型组比较,中药组与西药组大鼠的学习与记忆成绩均有显著提高(P<0.05);(2)与假手术组比较,模型组细胞凋亡发生率显著增加(P<0.05);与模型组比较,中药组及西药组细胞凋亡率均显著下降(P<0.05);(3)与模型组比较,中药组与西药组Cytc、Bax蛋白表达均显著下降(P<0.05),且中药组与西药组比较无统计学意义。结论:温肺降浊方能明显改善VD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与其通过抑制Cytc、Bax蛋白的表达,从而抑制海马神经元的凋亡有关。