温肾通督方对脊髓损伤模型小鼠脾脏B细胞影响的蛋白组学研究

目的探讨温肾通督方对脊髓损伤的影响及可能机制。方法36只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、温肾通督方组,每组12只。模型组、温肾通督方组小鼠采用改良Allen's法建立小鼠脊髓损伤模型,假手术组仅进行脊髓暴露。温肾通督方组从术后第1天按50 g/(kg·d)给予温肾通督方溶液灌胃,假手术组及模型组给予生理盐水20 ml/(kg·d)灌胃,各组均连续灌胃14天。在术前及术后第1、7、14天,利用斜板试验及后肢运动功能(BMS)评分对小鼠运动功能进行评估;术后第3天通过肌电图及运动诱发电位检测小鼠神经电生理,测量各组小鼠脾脏长度,利用磁珠分选脾脏中的B细胞,通过蛋白组学技术分析蛋白差异表达情况,采用Western blot法检测脾脏B细胞中线粒体外膜转运孔蛋白20(Tom20)及下游剪切化半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达;术后第14天采用核磁共振观察小鼠脊髓恢复情况。结果与假手术组同时间比较,模型组在术后1、7、14天BMS主评分、副评分及斜板试验角度均降低,术后3天小鼠肌电图和运动诱发电位峰峰值降低、脾脏长度减少,脾脏B细胞中Tom20和Cleaved Caspase-3表达量升高(P<0.05)。与模型组同时间比较,温肾通督方组小鼠术后14天时BMS副评分及术后7、14天时斜板试验角度升高,术后3天小鼠肌电图和运动诱发电位峰峰值升高、脾脏长度增加,Tom20和Cleaved Caspase-3表达量降低(P<0.05)。蛋白组学结果显示,温肾通督方组与模型组相比共有100个差异蛋白,其中37个上调,63个下调。GO富集显示差异蛋白主要在氧结合、外源性凋亡负反馈、锌离子相应、氧输送等方面发挥作用。KEGG富集显示差异蛋白主要集中在代谢途径、亨廷顿病、氧化磷酸化等通路。亚细胞定位显示差异蛋白与线粒体相关。术后14天磁共振成像显示,假手术组小鼠脊髓结构完整,节段清晰,脊髓信号无异常;模型组小鼠脊髓损伤区域低信号区域增加,脊髓明显变细;温肾通督方组损伤节段有明显凹陷,但较模型组结构要完整。结论温肾通督方可能通过调节免疫功能促进脊髓损伤修复,其机制可能与抑制脾脏B细胞焦亡等相关。