WD-3合剂联合肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌疗效评价及安全性分析

目的探讨WD-3合剂联合肝动脉化疗栓塞术(transarterial chemoembolization,TACE)治疗原发性肝癌(PHC)的临床疗效与安全性。方法选取2015年1月至2019年4月无锡市中医医院收治的50例PHC患者,采用“长短签自由抽取”的方法分为对照组和观察组,每组25例。对照组给予TACE治疗,观察组给予TACE+WD-3合剂治疗,对比两组患者的临床治疗效果、不良反应发生率、远期疗效和治疗前后血清甲胎蛋白水平及生活质量评分。结果观察组患者的临床治疗总有效率高于对照组,不良反应发生率、疾病转移、复发率以及死亡率低于对照组,治疗后,两组患者血清甲胎蛋白水平均低于治疗前,且观察组较对照组更低,两组患者生活质量评分均高于治疗前,且观察组较对照组更高(P<0.05)。结论对PHC患者应用TACE联合WD-3合剂进行治疗可提升其临床治疗有效率和远期疗效,降低患者死亡率,值得推广。

温胃阳汤对功能性消化不良大鼠肥大细胞活化及SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:基于肥大细胞活化及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/受体酪氨酸激酶c-Kit信号通路探讨温胃阳汤治疗大鼠功能性消化不良的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激加不规则喂养复合番泻叶法建立大鼠功能性消化不良模型,模型建立后,空白组及模型组灌胃给予生理盐水,温胃阳汤低、中、高剂量组和雷尼替丁组则分别用温胃阳汤(0.743 g/mL、1.485 g/mL和2.970 g/mL)及盐酸雷尼替丁胶囊(3 g/L)灌胃。治疗结束后,以碳墨推进法测定小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察大鼠十二指肠组织肥大细胞并计数;ELISA测定大鼠十二指肠中肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)和组胺(histamine,HA)的含量;RT-qPCR检测十二指肠中SCF和c-Kit mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测十二指肠中SCF和c-Kit蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,温胃阳汤治疗显著提高大鼠的小肠推进率(P<0.05);ELISA结果显示,温胃阳汤治疗可减少大鼠十二指肠黏膜组织肥大细胞数量及MCT和HA含量(P<0.05);Western blot和免疫组化结果表明,温胃阳汤治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF蛋白的表达水平(P<0.05),增加SCF和c-Kit阳性细胞数(P<0.05);RT-qPCR结果显示,WWYD治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.01)。而且,小肠推进率分别与MCT和HA含量呈负相关,与SCF和c-Kit的表达呈正相关。结论:温胃阳汤能促进大鼠十二指肠动力,其作用机制可能与抑制大鼠十二指肠MCT和HA的生成,及激活SCF/c-Kit信号通路有关。

温胃阳汤预防胃肠道息肉复发的机制及临床研究初探——感悟中医的胃肠道息肉

胃肠道息肉的复发是困扰着医生和病人的常见难题,中医药对本病的报道甚少。

基于神经免疫调节途径探讨温胃阳汤对功能性消化不良大鼠的作用

目的观察温胃阳汤对功能性消化不良(FD)大鼠十二指肠肥大细胞(MC)、类胰蛋白酶(MCT)、组胺、神经胶质(S100)的影响,探讨温胃阳汤治疗FD的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余组大鼠均采用番泻叶联合夹鼠尾法制备脾阳虚型FD模型。进行胃肠运动实验,观察各组大鼠胃排空率和小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察FD大鼠MC及MC脱颗粒数目;ELISA检测FD大鼠十二指组织MCT、组胺的自发释放水平;采用免疫组化法检测十二指肠组织S100的平均光密度,S100免疫组织化学染色法观察神经纤维的分布及变化情况等。结果与空白组比较,模型组大鼠胃排空率和小肠推进率均降低(P<0.01),十二指肠黏膜MC明显增多且MC脱颗粒明显,MCT、组胺浓度均升高(P<0.01),钙离子浓度降低(P<0.01),十二指肠黏膜下层S100阳性神经纤维表达增强(P<0.01);与模型组比较,雷尼替丁组与温胃阳汤组大鼠胃排空率和小肠推进率均升高(P<0.05),温胃阳汤中、高剂量组大鼠十二指肠黏膜MC及脱颗粒明显减少,温胃阳汤低、中、高剂量组的MCT、组胺浓度均降低(P<0.05),雷尼替丁组及温胃阳汤组S100阳性神经纤维表达减弱(P<0.01),以及钙离子浓度升高(P<0.01)。结论温胃阳汤可明显促进FD大鼠胃肠运动功能,可能是通过抑制十二指肠MC活化和脱颗粒,从而抑制MC分泌组胺,下调MCT表达,激活神经细胞Ca2+内流,改变神经纤维分布来发挥机制。

基于Lab颜色模型探讨湿热内蕴型肝豆状核变性患者治疗前后舌象的特点

目的:研究湿热内蕴型肝豆状核变性(WD)患者治疗前后舌象参数的变化特点,探讨舌象参数在中西医结合治疗WD临床疗效评价中的作用。方法:将117例湿热内蕴型WD患者随机分为治疗组和对照组。对照组给予二巯丙磺钠(DMPS)排铜治疗,治疗组在对照组的基础上联合肝豆汤(大黄6 g,黄连10 g,黄芩10 g,半枝莲15 g,穿心莲10 g,萆薢10 g)治疗,共4个疗程(32 d)。使用道生公司DS01-A舌面脉信息采集体质辨识系统(Lab颜色模型),拍摄患者入院及出院时舌象,并对所拍摄的舌象进行参数运算,观察治疗组与对照组治疗前后舌象参数(舌色及苔色Lab值)变化的特点。运用Pearson相关性检验,分析湿热内蕴型WD患者舌象参数与肝功能相关指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、总胆汁酸(TBA)]水平的相关性。结果:①治疗组有效率高于对照组(93%vs 86%),治疗后治疗组中医证候积分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。②治疗后两组患者舌色及苔色Lab-L值明显上升,Lab-a值和Lab-b值明显下降,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组在改善舌象参数方面优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。③治疗后两组患者ALT、AST、TBA水平明显下降,ALB、PA水平明显上升,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组肝功能指标改善优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。④舌象参数与肝功能相关评价指标具有明显相关性(P<0.05)。结论:肝豆汤清热祛湿、通腑利尿,治疗WD具有较好的临床疗效。舌象Lab值的变化可反映患者肝损害的严重程度,舌象参数可以作为中医临床疗效评价的新指标。

温胃阳汤对胃动力低下大鼠胃电活动、胃窦肌间神经丛5-羟色胺能神经及其受体的影响

[目的]观察温胃阳汤对胃动力低下大鼠胃电活动、胃窦肌间神经丛5-羟色胺(5-HT)能神经及其受体的影响。[方法]将70只Wistar大鼠随机分为正常组(10只,雌雄各半)和模型组(60只,雌雄各半),模型组每只大鼠按10g/kg甘草煎剂灌胃,随机分为模型3d组、7d组、温胃阳汤低、中、高剂量组及吗丁啉组。温胃阳汤低、中、高各剂量组分别予浓度为0.743g/ml、1.485g/ml、2.970g/ml的温胃阳汤灌胃,吗丁啉组予0.27mg/ml吗丁啉混悬液(按100g体重1ml)灌胃。观察各组大鼠胃电活动的变化,并以免疫组化方法结合图像分析技术分析5-HT免疫反应阳性产物的分布、数量和免疫反应强度。以免疫印迹法分析大鼠胃窦组织中5-羟色胺受体(5-HTR),计算出各组的蛋白相对表达量,以百分数表示各组的蛋白表达量。[结果]一定剂量的甘草煎剂能明显抑制大鼠胃电活动,使大鼠窦组织5-HT免疫反应阳性神经纤维、神经节内阳性神经细胞体和平均光密度值明显减少,5-HTR的表达显著降低。而温胃阳汤低、中、高剂量组及吗丁啉组均可使胃动力低下大鼠胃窦组织5-HT免疫反应阳性神经纤维、神经节内阳性神经细胞体和带膨体的神经纤维增多,5-HTR的表达亦得到提高;其中中、高剂量组效果与吗丁啉组比较差异无统计学意义,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。[结论]经温胃阳汤治疗后,胃窦肌间神经丛5-HT免疫反应阳性神经纤维和神经细胞体分布增多,5-HTR表达升高,5-HT能神经活性增强,表明温胃阳汤能通过5-HT能神经参与促胃动力作用。

肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠对湿热内蕴型肝豆状核变性患者的影响

目的:探讨肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠治疗对湿热内蕴型肝豆状核变性患者的安全性及疗效性的影响。方法:回顾性分析湿热内蕴型肝豆状核变性患者245例,其中治疗组125例,对照组120例,治疗组为中药肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠治疗,对照组选择单独应用二巯基丙磺酸钠治疗;在治疗前、治疗后分别进行globleassessment scale(GAS)评分,并观察24 h尿铜、肝功能、肾功能、白细胞、血小板等指标。结果:两组患者在治疗后,GAS评分均明显下降,其中以治疗组改善明显(P<0.05);两组患者肝功能均得到明显改善,其中治疗组改善明显(P<0.05),治疗后治疗组驱铜效果明显优于对照组(P<0.05)。治疗4个疗程后对照组出现明显白细胞减少,治疗组无变化,两组患者具有明显差异(P<0.05)。治疗后治疗组出现20例不良反应,对照组42例,主要为神经系统损害、白细胞减少、胃肠道反应、肝功能损害等,两组患者比较差异明显(P<0.05)。结论:肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠治疗肝豆状核变性具有明显的改善神经功能、改善肝功能、提高驱铜疗效作用,并可有效防止单独西药驱铜治疗引起的白细胞减少,安全有效。

肝豆汤联合DMPS驱铜治疗对Wilson病湿热内蕴型认知功能障碍的影响

目的：探讨肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠（DMPS）治疗对湿热内蕴型肝豆状核变性患者的认知功能障碍影响。方法：回顾性分析湿热内蕴型肝豆状核变性患者85例,其中治疗组45例,对照组40例,其中治疗组给予中药肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠治疗,对照组为单独应用二巯基丙磺酸钠治疗的患者;治疗共进行4个疗程,每个疗程为8 d,DMPS驱铜治疗6 d后间歇休息2 d,在治疗前后分别进行蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评定,并检测认知功能相关指标血清超氧化物歧化酶（SOD）,同型半胱胺酸（Hcy）水平的变化,观察24 h尿铜的改变,并检测肝功能、肾功能、白细胞、血小板等相关安全性指标。结果：两组患者在治疗后,MoCA评分总分较本组治疗前均明显改善,其中以治疗组改善最为明显;治疗后两组间子项目的评分比较,其中视空间与执行功能、注意力治疗组改善显著优于对照组（P〈0.05）;两组血清学指标SOD水平组均改善明显,治疗组显著优于对照组（P〈0.05）,治疗后Hcy水平治疗组明显改善（P〈0.05）,对照组无明显变化;两组驱铜效果均较为显著（P〈0.01）,两组组间对比,治疗组优于对照组（P〈0.05）。结论：肝豆汤联合二巯基丙磺酸钠可显著改善Willson病认知功能,血清SOD,Hcy水平显著改善,驱铜效果明显,不良反应轻微,安全有效。

基于Pink1/Parkin通路探讨肝豆汤对Wilson病TX模型小鼠的线粒体自噬的影响

目的:观察肝豆汤(GDD)对Wilson病毒奶小鼠(TX)模型海马神经元细胞的线粒体自噬影响,并通过研究PTEN诱导激酶1(Pink1)/E3泛素连接酶(Parkin)介导的线粒体自噬通路,探讨肝豆汤对神经元细胞损伤的保护机制。方法:60只小鼠分为空白组、模型组、肝豆汤低、中、高剂量组(5.5、11、22 g·kg^(-1))和青霉胺组(0.09 g·kg^(-1)),予以相应灌胃8周。采用Morris水迷宫、悬挂实验及爬杆实验检测行为学;苏木素-伊红(HE)染色结合透射电镜观测细胞凋亡、超微结构、细胞自噬及线粒体结构。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测神经元细胞Pink1、Parkin、自噬标记蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、p62的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠定位巡航时间延长,穿越平台次数减少,悬挂得分降低,爬杆时间显著延长(P<0.01);与模型组比较,肝豆汤中、高剂量及青霉胺组小鼠定位巡航时间缩短,穿越平台次数增多,悬挂得分上升,爬杆时间缩短(P<0.01)。与空白组比较,模型组神经元细胞损伤显著,自噬体增多;与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组及青霉胺组神经元细胞损伤改善显著,自噬体减少。与空白组比较,模型组MDA、ROS水平升高,SOD水平下降(P<0.01);与模型组比较,肝豆汤低、中、高剂量组MDA、ROS下降,SOD水平显著上升(P<0.01)。与空白组比较,模型组Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平上升,p62表达水平下降(P<0.05);与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白及mRNA表达水平下降,p62明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:肝豆汤显著的抑制TX小鼠海马神经元线粒体过度自噬,保护神经元细胞的损伤,其机制考虑可能为通过调控Pink1/Parkin通路而实现。

中药煎液对铜离子络合能力评估的分析方法研究

目的:建立筛选分析方法评估中药水煎液对铜离子的络合能力,以揭示中药治疗铜离子代谢障碍疾病的物质基础。方法:采用1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)为络合剂,乙醇为助溶剂,二氯甲烷为萃取剂,建立分光光度法于600 nm处测定中药水煎液中铜离子的含量。通过外加一定量铜离子来测定回收率。此回收率与铜离子被络合能力负相关,以此评估中药水煎液与铜离子的络合强度。结果:铜离子质量浓度在0.64~6.4 mg·L^(-1)的范围内线性关系良好,重复性较好,检测下限为0.046 mg·L^(-1)。给中药煎液外加铜离子的回收率测定显示出很好的准确性和重复性。以此方法评估了10味中药水煎液对铜离子的络合能力,其中茵陈、黄芩、升麻和鱼腥草4味中药对Cu^(2+)的络合能力较强(56.19%~69.00%)。结论:本文建立的方法能够很好地应用于中药煎液对铜离子络合能力的评估,可用于中药治疗铜离子代谢障碍疾病物质基础的研究。

扶正抗癌方联合吉非替尼对A549细胞的协同抗癌作用及机制

目的:通过体外体内实验观察扶正抗癌(FZKA)方联合吉非替尼(Gefitinib)对人肺腺癌A549细胞增殖,凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨研究其相关作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测空白组,FZKA方组(0.2,0.4,0.8,1.6,3.2 g·L^-1),Gefitinib组(10,20,40,60,80,100μmol·L^-1)的干预A549细胞24,48,72 h及FZKA方(2 g·L^-1)联合Gefitinib(40μmol·L^-1)组干预A549细胞24 h的增殖能力;流式细胞术分析检测联合用药组细胞凋亡及周期的变化;划痕实验和transwell小室实验检测联合用药组的侵袭转移能力变化;蛋白免疫印迹法检测细胞联合用药组活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),F-盒和含蛋白7的WD重复结构域(FBW7)及髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白表达的变化情况。结果:与空白组比较,FZKA方,Gefitinib呈剂量依赖性、时间依赖性显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05);与空白组比较,FZKA方组,Gefitinib组均能减弱细胞划痕愈合能力和侵袭能力,促进细胞凋亡(P<0.05),均能上调Bax,Caspase-3,FBW7蛋白表达,下调Bcl-2,MCL-1蛋白表达(P<0.05);与Gefitinib单独给药比较,FZKA方联合Gefitinib抑制A549细胞增殖能力和诱导细胞凋亡更明显(P<0.05);细胞划痕愈合能力与侵袭能力明显减弱(P<0.05);上调Bax,Caspase-3,FBW7蛋白表达,下调Bcl-2,MCL-1蛋白表达效果明显(P<0.05)。结论:FZKA方与Gefitinib合用后比单用Gefitinib更能诱导A549细胞凋亡,抑制其增殖及侵袭转移能力更强,两者具有协同抗癌作用,其机制可能与调控FBW7/MCL-1通路相关。

中药肝豆汤治疗Wilson病疗效机制的研究进展

Wilson病(WD)是一种以铜代谢障碍为生化特征的可治性神经遗传病,目前以青霉胺(PCA)为代表的金属络合剂驱铜治疗等治疗方法存在一定的局限性,使其治疗范围和效果受到限制,基因治疗尚处于实验室研究阶段,走向临床尚需时日。笔者等在现代医学对WD认识的基础上,根据对WD中医病机、证候学、中药方剂治疗学等方面的研究结果,创用中药组方肝豆汤治疗WD患者,获得了良好的临床疗效。基于此,笔者等在多个国家自然科学基金项目的资助下,从铜代谢的分子通路,Wnt/β-catenin通路和丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路等调控肝损伤的细胞信号通路,细胞外信号调节激酶(ERK)通路和肝激酶B1(LKB1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路等调控神经元损伤的细胞信号通路等角度对肝豆汤治疗WD的疗效机制进行了系列研究,结果发现中药组方肝豆汤能多层次、多靶点调控铜代谢障碍所致的WD肝细胞和神经元细胞的调亡、自噬等细胞程序性死亡过程,并通过TX小鼠等WD的动物模型验证了上述实验结果,从而证明了肝豆汤组方的合理性、配伍的必要性和用药的准确性,并为肝豆汤组分的进一步优化提供了依据。文章最后对肝豆汤治疗WD疗效机制的未来研究方向提出了一些设想和可行性建议。