基于miR-126-5p/Bcl-2/mPTP通路探究稳心汤对缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞损伤修复的作用机制

目的:观察稳心汤对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响,并基于miR-126-5p/Bcl-2/心肌细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)调控通路明确其作用机制。方法:使用5%CO_(2)、1%O_(2)、94%N 2培养箱构建H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型,并通过细胞转染技术达到miR-126-5p的过表达与抑制。待干预结束后观察心肌细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、心肌细胞活性氧(ROS)含量;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;流式细胞仪检测心肌细胞线粒体mPTP开放水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞色素C(Cyt-C)释放水平与Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-126-5p及Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的RNA表达水平。结果:与miR-126-5p低表达组比较,miR-126-5p过表达可显著降低LDH释放水平;减少心肌细胞ROS含量;改善心肌细胞凋亡率;提高心肌细胞CalceinAM水平,减少mPTP开放。miR-126-5p过表达可以减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平,miR-126-5p低表达可部分减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平。miR-126-5p过表达可上调Bcl-2蛋白与基因表达,下调Caspase-3与Caspase-9蛋白与基因表达。miR-126-5p低表达可部分上调miR-126-5p表达水平与Bcl-2蛋白与基因表达;部分下调Caspase-3与Caspase-9蛋白与基因表达。结论:稳心汤改善缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤可能与调控miR-126-5p/Bcl-2/mPTP信号通路有关,从而减轻氧化应激反应,降低线粒体膜通透性,抑制心肌细胞凋亡,延缓心肌损伤。

平肝定悸方联合稳心颗粒治疗心肾阳虚慢性心律失常随机平行对照研究

[目的]观察平肝定悸方联合稳心颗粒治疗心肾阳虚慢性心律失常疗效。[方法]使用随机平行对照方法，将门诊及住院患者按抽签法简单随机分为两组，观察期间不再服其他抗心律失常药物，强调长期规律用药，对症治疗。对照组60例稳心颗粒，8-9g／次，3次／d，口服。治疗组60例平肝定悸方（炙甘草、生地各15g，桂枝9g，丹参15g，党参10g，生龙骨15g，生牡蛎、灵磁石各20g，苦参10g，川芎8g，五味子、赤芍各10g，炒枣仁15g等），1剂／d，水煎200mL，100mL/次，早晚口服；稳心颗粒同对照组。连续治疗1个月为1疗程。观测临床症状、心律失常发作频率、持续时间、平均心率、P-R间期、QRS脱落、不良反应。不良反应。治疗1疗程，判定疗效。[结果]治疗组显效32例，有效22例，无效6例，总有效率90．00％。对照组显效25例，有效19例，无效16例，总有效率73．33％。治疗组疗效优于对照组（P〈O．05）。平均心率、P-R间期、QRS脱落两组均有改善（P〈0．01），治疗组改善优于对照组（P〈O．05，P〈0．01）。[结论]平肝定悸方联合稳心颗粒治疗心肾阳虚慢性心律失常，疗效满意，无严重不良反应，值得推广。

温心方含药血清对人脐静脉内皮细胞外泌体及人主动脉血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的 从人脐静脉内皮细胞(HUVECs)外泌体及人主动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)表型转化角度探讨温心方治疗冠心病的可能作用机制。方法 30只SD大鼠给予温心方水煎剂33.75 g/(kg·d)灌胃,连续7天,末次灌胃2 h后腹主动脉取血制备含药血清。取对数生长期的HUVECs,分别设立对照组、模型组及温心方高、中、低剂量组,对照组使用完全培养基培养,温心方高、中、低剂量组分别用5%、15%、25%温心方含药血清培养24 h后加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养24 h,模型组仅加入50 mg/L ox-LDL培养24 h造模。各组高速离心分离获取HUVECs外泌体,透射电镜观察外泌体形态,BCA法测定外泌体蛋白浓度,检测外泌体粒径,Western Blot法检测外泌体标志蛋白溶酶体相关膜蛋白3 (CD63)、肿瘤易感基因101 (TSG101)表达,qRT-PCR法检测外泌体miR-145表达。各组HUVECs外泌体50 ng与HAVSMCs共培养24 h,观察外泌体摄取,于6、12、24、48 h应用MTT法检测HAVSMCs细胞增殖率,Transwell法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌22α蛋白(SM22α)、骨桥蛋白(OPN)水平。结果 成功提取HUVECs外泌体,在镜下可见HAVSMCs细胞摄取HUVECs外泌体。模型组HUVECs外泌体中CD63、TSG101及miR-145表达较对照组显著减少(P<0.01),温心方组各剂量组CD63、TSG101及miR-145表达较模型组显著升高,且温心方高剂量组在升高CD63、miR-145方面优于温心方低、中剂量组(P<0.05或P<0.01)。各组外泌体与HAVSMCs共培养后,与对照组比较,模型组HAVSMCs细胞增殖率、细胞凋亡率增加,细胞迁移个数增多,α-SMA、SM22α蛋白表达降低、OPN升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,温心方各剂量组在24、48 h时细胞增殖率及细胞凋亡率均降低,12、24、48 h时细胞迁移个数减少,α-SMA、SM22α表达升高,OPN表达降低(P<0.05或P<0.01);与温心方中、低剂量组比较,温心方高剂量组在24、48 h细胞增殖率降低,在12、24、48 h细胞迁移个数降低,α-SMA、SM22α表达升高,OPN表达降低(P<0.05)。结论 温心方含药血清可通过促进HUVECs外泌体释放,抑制HAVSMCs表型转化,减轻细胞增殖迁移,从而发挥治疗冠心病作用。

温心方颗粒治疗慢性稳定性心绞痛阳虚痰瘀证临床研究

目的 评价温心方治疗慢性稳定性心绞痛阳虚痰瘀证的疗效.方法 将符合入选标准的65例慢性稳定性心绞痛阳虚痰瘀证患者,采用随机数字表法分为温心组34例和对照组31例.温心组口服温心方颗粒,对照组口服阿司匹林与阿托伐他汀钙.2组均治疗30 d.比较2组治疗前后心绞痛疗效评分、中医证候积分及心电图变化,观察硝酸甘油停减率,评价临床疗效.结果 经30 d治疗,温心组心绞痛积分、心电图改善情况及硝酸甘油停减率与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.温心组中医证候总有效率为94.1%（32/34）、对照组为74.2%（23/31）,2组比较差异有统计学意义（χ^2=4.945,P=0.039）.温心组综合疗效总有效率为88.3%（30/34）、对照组为74.2%（23/31）,2组比较差异无统计学意义（χ^2=2.124,P=0.204）.温心组综合疗效显效率为29.4%（10/34）、对照组为9.7%（3/31）,2组比较差异有统计学意义（χ^2=3.947,P=0.045）.结论 温心方颗粒可有效降低慢性稳定性心绞痛阳虚痰瘀证患者中医证候积分,改善临床症状.

基于UPLC-MS/MS多反应监测的温心方人参皂苷Rb1、肉桂酸、芍药苷及小檗碱同时定性定量分析

目的建立基于超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)多反应监测(MRM)模式的温心方中人参皂苷Rb1、肉桂酸、芍药苷及小檗碱同时定性定量的分析方法,为温心方新药研发提供评价方法。方法采用Waters ACQUITY UPLCTM HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.03%甲酸水溶液,梯度洗脱,利用三重四极杆在MRM扫描模式下检测,以保留时间及相对丰度比(定性离子对/定量离子对)定性,以定量离子对峰面积进行定量研究。结果温心方中4种有效成分均被定性检出且线性关系良好;准确度、精密度、重复性、稳定性良好;回收率为96.24%~104.19%,RSD为1.29%~3.27%。结论该方法简便、准确、快速、灵敏,可用于温心方中4种有效成分的定性定量研究。