基于Micro-CT评价温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死模型股骨头微结构的影响

目的:通过Micro-CT图像评价温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死模型股骨头骨量的影响。方法:选取健康雄性新西兰大白兔6只,分成空白组、模型组、中药组(温阳补肾方临床等效剂量组)。用马血清加甲基强的松龙的方法建立兔激素性股骨头坏死模型,同时正常组等量注射生理盐水。造模结束后,正常组与模型组予生理盐水灌胃,治疗组则给予温阳补肾方灌胃,第四周处死所有兔子取材双侧股骨头,用Micro-CT扫描图像进行分析和评价。结果:大体形态观察:模型组股骨头破损变薄,骨质脆弱,软骨面颜色苍白,表面粗糙;中药组与模型组相比,股骨头破损程度较降低,软骨面颜色较白,骨质较硬,与正常组相比,光泽度较弱。Micro-CT图像显示:模型组股骨头变形,骨皮质不连续且较正常组薄弱,骨质密度不均,“星芒征”消失;软骨面可见剥脱裂纹,骨小梁排列紊乱,甚至断裂;中药组各个骨组织形态与正常组接近;与模型组相比,股骨头外形饱满;骨小梁的排列趋于规则,软骨层增厚,骨皮质连贯。结论:糖皮质激素的大量运用会导致股骨头形态发生改变,主要表现为外形塌陷、骨皮质连续性破坏、骨密度降低、软骨面剥脱、骨小梁紊乱等;温阳补肾方的应用可扭转激素性股骨头坏死的骨组织形态变化,使已变形塌陷的股骨头外形趋于饱满、紊乱的骨小梁排列整齐、恢复骨皮质连续性、增厚薄弱的软骨层。从直观的影像学角度,证明了温阳补肾方在治疗激素性股骨头坏死方面的显著作用。

益气温阳补肾方加减治疗老年高血压患者的临床疗效及对其血管内皮功能和血压控制效果的影响

目的 探讨益气温阳补肾方加减治疗老年高血压脾肾阳虚证的临床效果。方法 选取2021年12月—2022年11月期间青岛市中医医院收治的脾肾阳虚证老年高血压患者98例,采用随机数字表法分为对照组和试验组,每组各49例。对照组给予常规西药降压治疗,试验组在对照组基础上联合益气温阳补肾方加减治疗,两组患者均治疗4周。观察比较两组患者临床疗效、治疗安全性,治疗前后中医证候积分、血压[收缩压(Systolic blood pressure,SBP)、舒张压(Diastolic blood pressure,DBP)、脉压(Pulse pressure,PP)、24 h SBP、24 h DBP]水平、血管内皮功能指标[内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、血栓素A2(Thrombin A2,TXA_(2))]水平。结果 (1)临床疗效:治疗后试验组总有效率95.92%(47/49)明显高于对照组81.25%(39/48),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)中医证候积分:治疗后两组患者中医证候各项症状积分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且试验组中医证候各项症状积分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)血压监测水平:治疗后两组患者SBP、DBP、PP、24 h SBP、24 h DBP水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且试验组SBP、DBP、PP、24 h SBP、24 h DBP水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)血管内皮功能水平:治疗后两组患者血清ET-1、TXA_(2)均较治疗前降低,NO较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且试验组ET-1、TXA_(2)均明显低于对照组,NO明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)安全性:治疗期间,两组患者均未发生严重或影响治疗的不良反应,仅对照组出现1例轻度潮红,未给予干预自行缓解。结论 益气温阳补肾方加减治疗老年高血压脾肾阳虚证效果显著,安全性高,有利于控制患者血压水平,且可能与调节血管内皮功能有关。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症大鼠PKC信号通路的影响

目的:研究补肾温阳化瘀方治疗子宫内膜异位症(EMs)的作用,探讨其调控蛋白激酶C(PKC)信号通路的机制。方法:将50只SPF级8~10周龄雌性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组和西药组,每组10只。采用自体移植法复制EMs大鼠模型,造模成功后分别给予补肾温阳化瘀方低、高剂量及孕三烯酮灌胃,假手术和模型组灌胃蒸馏水,连续21 d。HE染色观察在位内膜及异位灶的病理形态改变;Western blot测定在位内膜及异位灶磷酸化蛋白激酶C的α亚型(p-PKCα)、蛋白激酶C的α亚型(PKCα)蛋白的表达水平。结果:模型组在位内膜和异位灶p-PKCα蛋白水平升高;给予补肾温阳化瘀方治疗后,p-PKCα的蛋白表达水平降低(P<0.05),PKCα的蛋白表达水平无明显变化。结论:补肾温阳化瘀方通过抑制PKC信号通路来治疗EMs。

健脾补肾温阳方治疗老年糖尿病肾病综合征的疗效及对中医证候评分、血肌酐、尿素氮指标的影响

目的探析健脾补肾温阳方在老年糖尿病肾病综合征患者中的治疗效果,分析该方对中医证候评分、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)指标的影响。方法选取该院2019年2月—2020年2月收治的82例老年糖尿病肾病综合征患者,根据不同疗法将其分为A组与B组,每组41例,A组予以前列地尔治疗,B组予以前列地尔联合健脾补肾温阳方治疗,对比两组患者的中医证候评分、临床疗效、肾功能指标(SCr、BUN)、血糖水平(空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白数)以及不良反应发生情况(恶心、头晕、腹泻、皮疹、发热)。结果 B组治疗后的中医证候评分(12.32±2.18)分,低于A组(15.74±2.71)分,P<0.05;B组的总有效率(90.24%,37/41)高于A组(75.61%,31/41),P<0.05;B组治疗后的SCr、BUN水平(141.16±25.01)μmol/L、(8.03±3.99)mmol/L均低于A组(175.33±26.82)μmol/L、(10.15±4.31)mmol/L,P<0.05;B组治疗后的空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白水平(7.15±1.85)mmol/L、(8.03±1.74)mmol/L、(6.38±1.16)%均低于A组(8.22±2.03)mmol/L、(10.67±2.16)mmol/L、(7.52±1.23)%,P<0.05;B组的不良反应发生率(12.20%,5/41)与A组(9.76%,4/41)相近,P>0.05。结论健脾补肾温阳方在老年糖尿病肾病综合征患者中的治疗效果显著,可快速缓解患者的临床症状,改善肾功能指标,降低血糖水平,且与单纯西药治疗相比未新增不良反应,值得临床推行。

温阳补肾方对激素性股骨头坏死模型兔血清中成骨、成血管因子及H型血管标志物的影响

目的:观察温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死血清中的成血管因子低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF),成骨因子骨形态发生蛋白2(BMP2)、成骨细胞特异基因(Osterix)及H型血管标志物血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、内皮黏蛋白(EMCN)的影响,探讨温阳补肾方逆转激素性股骨头坏死的作用机制。方法:选用27只健康雄性新西兰大白兔,随机分成正常组、模型组、中药组(温阳补肾方临床等效剂量组)、基因沉默组(miR-130a抑制剂)。在造模成功后,从正常组中随机抽取1只,造模组中随机抽取2只,用于模型鉴定。采用ELISA试剂盒检测兔血清中低氧诱导因子、血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白2、Osterix、CD31、内皮黏蛋白浓度。结果:兔血清中低氧诱导因子、血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白2、Osterix、CD31、内皮黏蛋白的浓度,模型组明显低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);中药组明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);基因沉默组明显低于正常组和中药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大量糖皮质激素的应用可下调血管内皮生长因子、低氧诱导因子、骨形态发生蛋白2、Osterix、CD31、内皮黏蛋白的表达,从而造成骨质破坏和血供受损,导致股骨头坏死。温阳补肾方能调控成血管相关因子血管内皮生长因子、低氧诱导因子,成骨相关因子骨形态发生蛋白2、Osterix,H型血管标志物CD31、内皮黏蛋白,使以上各项指标的浓度均增高,促使股骨头内部新生血管增多,增强股骨头内营养供给,从而增强骨组织的自我修复能力,这可能是温阳补肾方能够逆转激素性股骨头坏死的原因之一。

温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死组织RANKL/RANK/OPG通路的影响

目的:观察温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死组织RANKL/RANK/OPG通路的影响。方法:选取普通级健康新西兰大白兔136只,随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组。干预8周后运用Western-blot检测OPG、RANK、RANKL蛋白表达。结果:中药各剂量组OPG的表达量均高于模型组(P<0.05,P<0.01),而RANK、RANKL的表达量低于模型组(P<0.01)。随用药剂量的增加,OPG蛋白相对表达量逐渐升高,RANK、RANKL蛋白相对表达量逐渐降低。结论:温阳补肾方能激活RANKL/RANK/OPG通路,提高激素性股骨头坏死兔股骨头组织中OPG的表达,抑制RANK、RANKL的表达,从而刺激成骨细胞与破骨细胞的功能及活性,这可能是其有效防治股骨头坏死的机制之一。

温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的:探讨温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法:体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化,分别用温阳补肾方低、中、高剂量组含药血清和0.9%氯化钠溶液血清干预,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)酶动力法测定各组TRACP活性,实时荧光定量PCR检测温阳补肾方对破骨细胞组织蛋白酶K(Cts K)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA水平。结果:与对照组比较,温阳补肾方含药血清可显著抑制破骨细胞TRACP活性(P<0.01),显著降低破骨细胞骨Cts K、MMP-9 mRNA的表达(P<0.01)。结论:温阳补肾方含药血清可抑制破骨细胞的骨吸收功能,中剂量组效果最佳。

温阳补肾方对小鼠胫骨骨折愈合的影响

目的:观察温阳补肾方对小鼠胫骨横行骨折愈合过程的影响。方法:无菌条件下对C57BL/6小鼠实施胫骨骨干横形骨折髓内钉固定术,随机分为模型组和治疗组,治疗组给予温阳补肾方灌胃,模型组给予同体积0.9%氯化钠溶液,分别于给药后第4、7、10、14、21天取样,运用X-ray、Micro-CT、HE染色及形态计量学分析,综合评估温阳补肾方对小鼠胫骨骨折愈合过程的影响并初步探索其作用机制。结果:治疗组骨折线模糊程度在术后14、21d明显高于模型组;术后21d治疗组BV/TV、Tb.N则明显高于模型组(P<0.01),而Tb.Pf、SMI显著低于模型组(P<0.05);术后14、21d治疗组骨性骨痂量、形态、骨小梁方向优于模型组(P<0.05)。结论:温阳补肾方可促进小鼠胫骨横行骨折的愈合,加快对骨痂的再塑形,且其作用时间点为小鼠骨折愈合中后期。

温阳补肾方对激素性股骨头坏死模型兔股骨头形态学的影响

目的:观察温阳补肾方对激素性股骨头坏死模型兔股骨头形态学的影响。方法:136只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、中药低、中、高剂量组。造模成功后,分别于给药后第4、8、12周取双侧股骨头行常规苏木精-伊红染色,计算空骨陷窝率。结果:第4、8、12周时,正常组、中药中、高剂量组空骨陷窝率均明显低于模型组(P<0.01)。结论:大剂量激素使用可增加股骨头空骨陷窝率,使骨过度吸收从而破坏骨质导致股骨头坏死。温阳补肾方可以降低空骨陷窝率,抑制破骨细胞的活化,促进新骨的形成。

基于miR-221介导的细胞自噬探讨补肾温阳化瘀方治疗肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症的作用机制

目的:探讨补肾温阳化瘀方治疗大鼠肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症(EMs)的疗效及可能的作用机理。方法:将100只实验大鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组,每组20只,肾阳虚血瘀组EMs造模成功后分别给予补肾温阳化瘀方高、低剂量及孕三烯酮灌胃,假手术组和模型组纯净水灌胃,连续3周。Western blot检测Beclin-1、P62蛋白表达;RT-PCR检测miR-221及Beclin-1、P62 mRNA水平。结果:与假手术组比较,模型组在位内膜的Beclin-1蛋白及mRNA水平显著升高(P<0.01,P<0.05),P62蛋白及mRNA水平显著下降(P<0.01,P<0.05),miR-221水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组在位内膜及异位灶的Beclin-1蛋白及mRNA水平显著下降(P<0.05),P62蛋白及mRNA水平显著升高(P<0.01,P<0.05),miR-221水平显著下降(P<0.01,P<0.05)。miR-221与Beclin-1 mRNA呈现正相关,与P62 mRNA呈现负相关,相关系数(r)分别为0.515、-0.796(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾温阳化瘀方能够通过调节自噬基因Beclin-1、P62活性从而抑制细胞自噬水平,其机制可能与在转录水平下调miR-221有关。