温阳生肌膏调控GRP78/CHOP通路抑制过度内质网应激促糖尿病难愈合创面修复

目的:通过分析葡萄糖调节蛋白78(CRP78)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路研究温阳生肌膏对内质网应激(ERS)的调控,以探讨温阳生肌膏促进糖尿病难愈合创面修复的相关机制。方法:SD大鼠高脂饲料喂养联合链脲霉素腹腔注射后手术制备背部全层皮肤缺损建立大鼠糖尿病难愈合创面模型;实验分为正常组、模型组、温阳生肌膏组和贝复新(重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶)组;正常组及模型组消毒后予以生理盐水涂抹,温阳生肌膏组及贝复新组分别以温阳生肌膏、贝复新涂抹创面,每日换药1次;处理14 d后观察创面愈合情况,计算创面愈合率;HE染色观察创面组织显微形态;Western blot法检测创面组织GRP78、CHOP和cas pase-12含量;免疫组化法检测创面GRP78、CHOP和caspase-12表达及分布情况;透射电子显微镜观察创面内质网数量及肿胀情况;ELISA检测创面促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果:各组相应干预14 d后检测各项指标。与正常组相比,模型组创面愈合率显著降低(P<0.01),炎症渗出较多,肉芽组织生长情况差,GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达升高(P<0.01),炎症因子IL-1β含量显著增加(P<0.01);与模型组相比,温阳生肌膏组创面愈合率显著增加(P<0.01),炎症渗出减少,肉芽组织生长良好,创面组织GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01);炎症因子IL-1β含量显著降低(P<0.01)。结论:温阳生肌膏促进糖尿病难愈合创面愈合的作用,可能与其下调GRP78/CHOP通路,抑制过度ERS,降低创面细胞凋亡水平有关。

基于网络药理学联合动物实验探究温阳生肌膏治疗糖尿病创面的作用机制

目的从网络药理学角度探讨温阳生肌膏治疗糖尿病创面的作用机制,并通过动物实验进行验证。方法采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及相关文献筛选温阳生肌膏(WYSJO)活性成分及对应靶点;通过Gene Cards、Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM)、Drug Bank、Pharm Gkb和Therapeutic Target(TTD)等数据库检索糖尿病创面的作用靶点;使用Cytoscape 3.9.0绘制出WYSJO活性成分-糖尿病创面靶标网络;应用检索相互作用基因/蛋白质的搜索工具(STRING)平台搭建蛋白互作网络(PPI);应用京都基因与基因组百科全书(KEGG)与基因本体(GO)富集分析WYSJO与糖尿病创面的信号通路;应用Auto Dock 1.5.6对核心成分与靶点进行分子对接;将18只大鼠随机分为对照组、模型组和WYSJO组(n=6),以模型组和WYSJO组制备糖尿病大鼠难治性创面模型。分别在处理第0、5、9、14天时观察创面愈合,苏木素-伊红(HE)染色观察创面组织形态,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测核心基因表达情况。结果网络药理学筛选出WYSJO药物有效成分76种,药物靶点206个,糖尿病创面疾病靶点3797个,以及WYSJO治疗糖尿病创面作用靶点167个;通过构建WYSJO活性成分-糖尿病创面作用靶标网络,发现槲皮素、大豆苷元、山奈酚、鼠李素、鼠李柠檬素、异长春花苷内酰胺和邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)7个核心靶点。GO富集分析表明温阳生肌膏治疗糖尿病创面可能涉及细胞对脂多糖、细菌来源分子、金属离子、外来刺激、化学应激、营养水平、缺氧及氧化应激等生物过程。KEGG富集分析表明温阳生肌膏治疗糖尿病创面可能涉及高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)信号通路、p53信号通路、白介(IL)-17信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、细胞凋亡、脂质和动脉粥样硬化等相关通路发挥治疗糖尿病创面的作用。动物实验显示WYSJO可显著加快糖尿病创面的愈合速度(P<0.05),减轻炎症反应,促进肉芽组织生长,同时也可下调网络药理学预测的E1A结合蛋白p300(EP300)、Jun激酶(JUN)、骨髓细胞瘤癌基因(MYC)、缺氧诱导因子1A(HIF1A)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、特异性蛋白1(SP1)、肿瘤蛋白p53(TP53)以及雌激素受体1(ESR1)等8个核心基因表达(P<0.05)。结论WYSJO治疗糖尿病创面的作用机制可能与AGE-RAGE、p53、HIF-1等通路密切相关,通过此研究可为WYSJO的药理学研究提供新思路,并为其进一步转化应用提供基础。

温阳生肌膏联合带蒂复合组织皮瓣治疗压力性损伤的临床观察

目的探讨温阳生肌膏联合带蒂复合组织皮瓣在压力性损伤修复中的应用。方法回顾性分析2016年1月至2021年6月湖南中医药大学第一附属医院烧伤疮疡整形科收治的60例压力性损伤患者进行研究,通过随机数字表法分为两组,每组各30例。对照组使用带蒂复合组织皮瓣手术治疗,研究组使用温阳生肌膏联合带蒂复合组织皮瓣治疗,比较两组患者的临床治疗效果及不良反应的发生情况。结果研究组治疗的总有效率为100.00%,高于对照组的80.00%,差异有统计学意义(P<0.05);对照组不良反应的总发生率为60.00%,高于研究组的16.70%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对压力性损伤患者采用温阳生肌膏联合带蒂复合组织皮瓣治疗的方法,有利于促进压力性损伤患者创面的愈合,治疗效果明显,不良反应发生情况明显减少,安全有效,是治疗此类患者的较为理想方法,值得临床推广。

温阳生肌膏对糖尿病大鼠阴证慢性创面CD34和VEGF表达及血管重建的影响

目的:探讨温阳生肌膏对糖尿病大鼠阴证慢性创面的治疗机制。方法:60只雄性SD大鼠采用高脂乳剂灌胃+腹腔注射链脲佐菌素的方法制备2型糖尿病大鼠模型,再以股部外侧注射氢化可的松及用打孔器在背部两侧制备全层皮肤缺损的方法制备阴证创面模型。将模型大鼠随机分为模型组、实验组和对照组(n=20)。模型组不做处理,其余2组分别给予温阳生肌膏和象皮生肌膏外敷,每日1次,共21 d。观察造模后3、7、14、21 d创面愈合大体情况和造模后14 d的创面组织病理学变化;免疫组化检测造模后7和14 d创面组织CD34和血管内皮生长因子(VEGF)的表达;测定造模后3、7、14 d微血管密度(MVD)的变化。结果:实验组大鼠创面愈合率明显高于模型组及对照组(P<0.05);造模后3~7 d,实验组皮损处新生肉芽组织MVD较模型组及对照组显著升高(P<0.05);造模后14 d,实验组皮损处新生肉芽组织CD14和VEGF水平与模型组及对照组相比较显著升高(P<0.05);实验组肉芽组织生长旺盛,毛细血管丰富,炎症细胞较少。结论:温阳生肌膏可促进糖尿病大鼠阴证创面的愈合,其作用机制可能与增加局部皮损处新生肉芽组织中的新生微血管数量有关。

回阳生肌膏拆方对慢性皮肤溃疡模型小鼠疮面愈合及疮面巨噬细胞表型转化的影响

目的探讨回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡的影响及可能作用机制。方法 150只BALB/c小鼠分为空白组、模型组、西药组、益气温阳组、活血通络组,每组30只。采用免疫抑制联合皮肤伤口的方法制备小鼠慢性皮肤溃疡模型。益气温阳组和活血通络组分别给予益气温阳方和活血通络方各0.018 g,西药组给予重组人碱性成纤维细胞生长因子0.3 g,均制成含药明胶海绵、无菌贴贴敷,隔天换药,进行疮面拍照。测定疮面面积并计算愈合率;创伤第3、7、14天取疮面组织,HE、Masson和天狼星红染色观察疮面新生肉芽组织及胶原分布等;免疫组织化学法检测疮面组织巨噬细胞数量;使用实时定量PCR检测疮面局部M1、M2型巨噬细胞分泌的细胞因子基因表达。结果损伤第7、14天,与模型组比较,西药组、益气温阳组、活血通络组疮面面积减小,愈合率升高(P<0.05),且活血通络组愈合率高于益气温阳组(P<0.05)。损伤第3天,空白组、西药组、益气温阳组白细胞介素6(IL-6)水平低于模型组,血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素10(IL-10)水平高于模型组,活血通络组VEGF、IL-10水平高于模型组,且活血通络组VEGF水平高于益气温阳组(P<0.05)。损伤第7天,空白组、西药组、益气温阳组、活血通络组皮肤M1型巨噬细胞数量、TNF-α水平明显低于模型组,M2型巨噬细胞数量、VEGF、IL-10水平高于模型组(P<0.05或P<0.01),且活血通络组VEGF、IL-10水平高于益气温阳组(P<0.05)。结论活血通络方与益气温阳方均可促进小鼠皮肤慢性疮面愈合,其机制可能是通过促进巨噬细胞表型转化,促使疮面修复由炎症期过渡到增殖期,并且活血通络方对巨噬细胞表型转化作用优于益气温阳方。