变性梅毒重组抗原免疫印迹技术的建立及其在鉴别梅毒血清学假阳性实验的应用

目的为了评估临床梅毒抗体筛查中出现假阳性实验结果的真实性,建立了变性梅毒重组抗原免疫印迹技术,并应用于对临床非高危人群梅毒抗体筛查阳性血清进行验证确认,分析出现假阳性的可能性。方法采用梅毒TP47,TP45,TP17和TP15重组抗原,将变性后的抗原与非变性的抗原配对包被在硝酸纤维膜载体上,建立梅毒免疫印迹抗体谱检测方法。收集临床经电化学发光免疫分析仪及配套试剂检测的梅毒螺旋体抗体假阳性的非性病高危人群门诊和住院患者血清样本56例、临床确认梅毒患者血清样本25例和健康体检人员样本30例进行方法学验证。并用该方法对1例特殊的“梅毒患者”进行了鉴别。结果根据建立的变性与非变性抗原配对梅毒免疫印迹抗体谱检测结果判定模式,56例临床梅毒螺旋体抗体筛查假阳性样本,对四种变性重组抗原均不发生反应,无阳性条带。但是对二种以上非变性抗原发生弱阳性反应,出现阳性条带;25例梅毒患者对照样本,对四种非变性和变性重组抗原均有反应,出现强阳性条带;30例健康体检人员样本,对四种非变性和变性重组抗原均无反应。梅毒螺旋体特异性抗体阳性特殊“梅毒患者”血清样本,对四种变性重组抗原均为阴性反应,但对四种非变性重组抗原出现阳性反应。患者样本经血清免疫固定电泳分析,结合临床资料诊断为IgGλ型单克隆免疫球蛋白血症。结论变性梅毒重组抗原免疫印迹抗体谱检测,可有效鉴别临床梅毒抗体假阳性样本。但是,对于梅毒患者的确认一定要将检验结果结合患者的流行病学史、临床表现等进行诊断。

传统蛋白免疫印迹技术常见异常结果及影响因素探究

蛋白免疫印迹技术(western blotting,WB)是检测蛋白质经济、有效的方法,已广泛应用于分子相关的领域,但其影响因素多、操作复杂,常出现异常结果。本研究使用传统蛋白免疫印迹技术法检测(Sprague-Damley,SD)大鼠肝脏、脾脏组织某些蛋白质的表达,分析探讨常见异常结果及处理方法,为实验室和其他实验者提供参考。

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹技术分析弓形虫蛋白质与抗原的研究

本研究应用聚丙烯酸胺凝胶电泳及免疫印迹技术,对我们分别引进或从畸胎中分离所得的弓形虫株——RH株、Z-2株、CN株和SH1、2、3、4、5、8株的蛋白质和抗原成份进行分析,结果表明,在蛋白质的主要区带方面,9株弓形虫比较接近,而在部分区带上有所不同;用高滴度的针对RH株的抗弓形虫抗体分析9株弓形虫抗原成份,可见有一些共同的抗原成份。

蛋白质免疫印迹技术检测肺癌组织上皮钙粘蛋白的表达

目的探讨上皮钙粘蛋白(E-cad)与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法应用蛋白质免疫印迹技术(W estern b lot)检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中E-cad的表达,并对部分表达阴性的标本用免疫组化方法进行验证。结果癌组织、癌旁组织、远癌组织E-cad的阳性率分别为36.7%、70.0%、96.7%。癌组织E-cad阳性率明显低于癌旁组织(P<0.017),也明显低于远癌组织(P<0.017);癌旁组织E-cad阳性率明显低于远癌组织(P<0.017)。在30例肺癌患者鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织中E-cad阳性率分别为33.3%、40.0%、33.3%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌旁组织中的阳性率分别66.7%、73.3%、66.7%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的远癌组织中的阳性率分别为91.7%、100.0%、100.0%。癌、癌旁和远癌组织中E-cad的表达与肺癌组织学类型无关(P>0.05)。结论E-cad蛋白表达减少或缺失与肺癌有相关性,与肺癌的组织类型无相关性。

蛋白质免疫印迹技术在本科实验教学中的应用

蛋白质免疫印迹技术是生命科学研究领域的常用技术手段,尝试将其改造成适于本科教学实践的实验内容,即在基础性分子生物学实验的基础上开设"免疫印迹法检测目的基因在原核细胞中的表达"这一综合性实验。根据学生的理论和操作水平以及本科实验教学特点,对实验内容和实验方法进行了优化,并采取研讨式分组教学模式,使学生能够深入、全面、系统地理解和掌握蛋白质免疫印迹技术,提高了实验教学质量,并有助于培养学生的科学思维、科学素养以及综合实践能力。

酶联免疫电转移印迹技术(EITB)检测抗EB病毒特异性DNA酶抗体

本研究用酶联免疫电转移印迹技术,检测血清中抗 EB 病毒特异性 DNA 酶抗体,试图建立一种可常规应用于临床的检测方法。结果表明:50例鼻咽癌患者血清中,26例在52～59KD 范围内出现由4条阳性显带融合而成的阳性反应区;健康成人和其他头颈部肿瘤患者血清无一例在此区域内出现阳性显带,表明其特异性甚高。

免疫印迹技术的一些改进

本文描述了作者在研究低等生物着丝粒蛋白过程中对免疫印迹技术所作的一些改进：１．分离胶由１２％ＳＤＳ聚丙烯酰胺均一胶改作５％—１２％（或１５％）的线性梯度胶，使不同分子量范围的蛋白都能得以较好地分离；２．用眼虫色素代替溴酚蓝作示踪剂，以能适时地终止电泳；３．转移由４００ｍＡ３．５ｈ改为２００ｍＡ１７ｈ，由冰箱内空气冷却改为流水浴冷却，提高了冷却效率；４．对转移后的硝酸纤维素膜作除ＳＤＳ处理；使转移后的蛋白在一定程度上得以复性；５．抗体孵育温度由３７℃或室温１—２ｈ改为４℃冰箱过夜，降低了本底，提高了印迹反应的特异性。我们已用改进后的方法对一些低等生物作了一系列的着丝粒蛋白研究，取得了比较满意的结果。

APAAP免疫印迹技术对抗副流感病毒1，3型单克隆抗体识别抗原表位的研究

副流感病毒１，３型（ＰａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓｔｙｐｅ１，３：ＰＩＶ＿１．３）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）应用免疫印迹技术（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）识别抗原表位特性。结果表明：ＰＩＶ＿１．３抗原经还原剂处理后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ５％～１５％梯度胶电泳，能分辨二十多条清晰的蛋白带。转印后采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物（ＡＰＡＡＰ）染色，本底浅，呈玫瑰红色带，优于ＨＲＰ染色结果。ＰＩＶ＿１的５株ＭｃＡｂ：ＩＣ＿５、ＩＨ＿６、ＩＨ＿２、ＩＣ＿１０、３Ｄ＿５分别与６８ｋＤ～５０ｋＤ、６８ｋＤ、５８ｋＤ～２７ｋＤ、５５ｋＤ～５０ｋＤ、５０ｋＤ对应ＰＩＶ＿１的蛋白质抗原表位起反应。ＰＩＶ＿３的６株ＭｃＡｂ：２Ａ＿１０、５Ｇ＿３、２Ｄ＿１１、２Ｅ＿１０、２Ｂ＿１２、４Ｆ＿１２与７０ｋＤ、６８ｋＤ、６０ｋＤ～５０ｋＤ、５５ｋｐ～４０ｋＤ、５５ｋＤ、４０ｋＤ对应的蛋白质抗原表位特异结合，说明ＰＩＶ＿１．３的１１株ＭｃＡｂ同对应抗原表位点的结合分布较广，有利于对ＰＩＶ＿１．３抗原的快速、敏感、特异检测。

酶联免疫吸附法和免疫印迹技术检测天疱疮抗体的比较

目的比较酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹技术(IBT)检测天疱疮抗体的临床应用价值。方法对23例天疱疮患者(PV13例,PF10例)及10例正常对照者行ELISA检测血清中抗桥粒芯糖蛋白(Dsg)1和Dsg3抗体滴度;并用正常包皮分离表皮后提取的蛋白为底物行IBT检测,并与ELISA方法进行比较。结果两种方法阳性率均为91.30%,两种方法对PV和PF抗体的检测差异无统计学意义(P=0.400和1.000)。结论 ELISA和IBT在天疱疮的实验室诊断中均有重要价值,ELISA方法更简便、迅速。

免疫印迹技术在临床幽门螺杆菌检测中的应用

目的分析临床慢性上消化道疾病患者幽门螺杆菌的分型及检出率。方法应用免疫印迹技术对779例慢性上消化道疾病患者进行血清学分析。结果Ⅰ型检出率为65.08%,Ⅱ型检出率为28.11%,总检出率93.20%。结论免疫印迹技术具有高特异性、高灵敏度及易操作性的特点,较适合临床广泛推广应用。

免疫印迹技术测定血清中抗小脑浦肯野细胞Yo抗体

本文报道4例副肿瘤性小脑变性患者血清中存在特异性抗小脑浦肯野细胞抗体，免疫组化示小脑浦肯野细胞呈特征性粗颗粒状染色，患者血清中抗体滴度为1∶8000～1∶32000。免疫印迹技术发现抗体识别小脑浦肯野细胞提取物中分子量为34000与62000两种蛋白抗原，认为这种抗体是特异性抗-Yo抗体。本文就抗-Yo在临床检查中的意义进行了讨论。

微波快速免疫印迹技术研究

ＭＷ技术在蛋白质的免疫印迹技术中的效果如何？我们针对这个问题，应用ＣＭＩＡＳＢ型真彩色图像定量分析仪，研究了ＭＷ辐射技术在蛋白质斑点杂交中的效果，现介绍如下。材料和方法１．材料：鼠ＩｇＧ及ＨＲＰ标记羊抗鼠ＩｇＧ（１∶５００）为军科院五所产品，醋酸纤...

免疫印迹技术检测七种结缔组织病自身抗体

以兔胸腺可提取性核抗原（ＥＮＡ）的免疫印迹技术（ＩＢＴ），对１７７例结缔组织病患者及３２例正常人血清进行了７种自身抗体的测定。抗Ｓｍ抗体见于５０％的ＳＬＥ患者，敏感性较高；抗ＲＮＰ抗体可在多种结缔组织病中测出，在ＳＬＥ中阳性率较高；抗Ｒｏ（ＳＳＡ）、抗Ｌａ（ＳＳＢ）抗体见于部分ＳＬＥ患者；抗核糖体抗体仅见于ＳＬＥ，可能为ＳＬＥ的又一标记。本文ＩＢＴ具有广谱、快速、精确及稳固等优点，对提高结缔组织病的诊断和鉴别诊断水平有重要意义。

免疫印迹技术检测抗ENA抗体谱的应用现状及技术进展

目的 分析探讨免疫印迹法(IBT)检测可提取核抗原(ENA)多肽抗体谱报告结果和临床应用中出现的常见问题、解决措施及技术进展。方法 利用万浮生物技术公司的IBT试剂盒检测抗ENA抗体进行观察,分析总结近年来该项检测结果出现的问题。结果 因为对抗ENA自身抗体谱的谱带特征认识不足,对免疫印迹法缺乏深入了解,在临床中出现抗Sm、抗U1RNAP、抗SSA、抗rRNP等抗体的错误判断;另一方面,临床医师过分地看重实验报告,以至为数不少的病人被误诊、误治,造成不可弥补的医源性疾患。结论 为了使免疫印迹法测定抗ENA抗体谱更好地运用于临床,不论检验人员还是风湿免疫科医师,均应正确看待多肽抗体检测的临床意义。

免疫印迹技术在大疱性皮肤病研究中的应用

简要介绍免疫印迹技术的基本原理和特性,应用此项技术研究大疱性皮肤病抗原所获得的成果以及在大疱性皮肤病诊断中的价值.

应用定量免疫印迹技术分析人类自身反应抗体库

定量免疫印迹技术是近年来新兴的一门崭新技术 ,本文编译了应用该项技术分析人类自身抗体库所取得的一系列进展。研究发现 ,天然自身抗体仅与一组进化上保守的自身抗原反应 ,个体之间高度保守 ,并且天然自身抗体的选择需要正常T B细胞的相互作用 ,这种方法有可能用来区分器官特异性自身免疫疾病与免疫功能失调性自身免疫疾病。另外还观察到在一些自身免疫性疾病中 。

Western印迹分析嗜人按蚊中肠膜蛋白免疫原性

采用Western-blot免疫学方法对嗜人按蚊中肠粗蛋白和膜蛋白(即纯化后的粗蛋白)分子量及免疫原性进行分析.结果,经SDS-PAGE电泳,嗜人按蚊中肠粗蛋白显示8条主带,分子量范围在(66 200～15 850Da);而膜蛋白显示4条主带,分子量范围在(66 200～35 480Da).利用中肠粗蛋白免疫小鼠所获得的抗血清,可特异性识别粗蛋白中的3个条带;而特异性识别膜蛋白的仅1条,分子量为38.9 kDa.可见,利用蔗糖不连续梯度离心可获得膜蛋白,该蛋白含有与抗蚊中肠粗蛋白抗体相结合的膜蛋白表面抗原,这对今后制备嗜人按蚊中肠单克隆抗体具有参考价值.