转反义PLDγ基因小麦的获得及其抗白粉病的初步鉴定

利用穗茎注射法将反义PLDγ基因导入烟农15和农大1521两个小麦品种中,旨在获得抗病性增强的转基因植株。结果表明:T3代经PCR及PCR-Southern杂交鉴定,目的基因已经整合到小麦的基因组中,并能在小麦基因组内稳定遗传;烟农15和农大1521的6个转基因株系的抗白粉病的能力明显增强。

反义磷脂酶D γ基因转化小麦的研究

目的:获得抗寒、耐盐等能力增强的小麦新种质或新品种。方法:利用穗茎注射法将含有反义磷脂酶Dγ基因(PLDγ)的根癌农杆菌菌液注入到春小麦富硒乌麦旗叶鞘内,T1代经田间表型选择筛选到10株变异株,通过特异PCR扩增和Southern杂交技术对获得的变异株进行分子检测,并对转基因植株进行耐盐性鉴定。结果:变异株均扩增出大小为430bp的目的片段,Southern印迹结果与其一致,证实反义PLDγ基因已经整合到小麦的核基因组中;6株转基因植株的抗寒力比对照显著增强,4株的熟期提早3～4d;在室内耐盐性筛选中,2株变异植株耐NaCl的能力比对照有不同程度的提高。结论:反义PLDγ基因在提高小麦的抗寒、耐盐性上具有很大的应用价值。

反义磷脂酶Dγ转基因片段的结构与功能分析及转基因产物预测

目的:从生物信息学角度,对反义磷脂酶Dγ转基因片段的结构、来源进行查找,并预测分析该片段的转录产物、翻译产物,进而推导该片段的最终产物和作用方式。方法:利用http://www.expasy.ch/、http://bioweb.pasteur.fr、http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www、http://www.ncbi.nlm.nih.gov等在线分析工具。结果:该片段来自拟南芥第4条染色体上磷脂酶Dγ2(NM_117252.4│GI:42566497),转录生成一段400bp、没有稳定二级结构的RNA,且不能翻译产生蛋白质;经查找,有许多转录物因子和micRNA(mRNA干扰互补RNA,反义RNA)查找。结论:该片段最终产物为micRNA,在RNA干扰(RNAi)水平上调控相关基因的表达。