WIF-1在COPD合并骨骼肌萎缩大鼠中的表达及其与血清炎症因子、Atrogin-1/MuRF-1蛋白水平的关系

目的探讨WIF-1在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并骨骼肌萎缩大鼠中的表达及其与血清炎症因子、Atrogin-1/MuRF-1蛋白水平的关系。方法将30只SD大鼠按照随机数字表法分为COPD组(仅建立COPD成功的大鼠,n=11)、COPD合并骨骼肌萎缩组(COPD合并营养不良骨骼肌萎缩大鼠,n=9)和对照组(未建立动物模型的健康大鼠,n=10),分别给予相应的处理。采用酶联免疫吸附试验法检测3组大鼠的血清白细胞介素(IL)-6、IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;苏木精-伊红染色观察肺组织及骨骼肌腓肠肌组织形态;免疫组织化学检测骨骼肌组织中WIF-1细胞阳性表达率;采用蛋白质印迹法检测骨骼肌组织中Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达;Pearson法分析WIF-1与Atrogin-1、MuRF-1相关性。结果与对照组相比,COPD组大鼠IL-6、IL-8及TNF-α水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与COPD组相比,COPD合并骨骼肌萎缩组大鼠IL-6、IL-8及TNF-α水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,COPD组大鼠WIF-1细胞阳性表达率较高,但差异无统计学意义(P>0.05);与COPD组相比,COPD合并骨骼肌萎缩组大鼠WIF-1细胞阳性表达率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,COPD组大鼠Atrogin-1、MuRF-1蛋白水平增加,但差异无统计学意义(P>0.05);与COPD组相比,COPD合并骨骼肌萎缩组大鼠Atrogin-1、MuRF-1蛋白水平均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。WIF-1与Atrogin-1呈正相关(r=0.760,P<0.001),WIF-1与MuRF-1无相关性(r=0.149,P=0.433)。结论WIF-1基因在COPD合并骨骼肌萎缩大鼠中阳性表达显著升高,具有促炎症因子反应的作用,同时可影响肌肉萎缩相关蛋白而促进疾病进展。

急性髓系白血病中医证型与Dkk-3、Wif-1基因甲基化水平相关性研究

目的:研究急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)患者不同中医证型与焦磷酸测序法检测的Dkk-3和Wif-1基因启动子甲基化水平的关系,比较不同证型Dkk-3和Wif-1基因甲基化水平与AML患者生存时间的差异,为AML中医辨证分型提供参考依据及评估预后。方法:选取45例2020年6月-2021年6月福建中医药大学附属人民医院血液病科门诊或住院初诊AML患者(病例组)和20例缺铁性贫血患者(对照组),比较焦磷酸测序法检测的两组Dkk-3、Wif-1基因甲基化表达水平差异,并比较组内气阴两虚证、瘀血痰结证、毒热炽盛证三种不同证型与Dkk-3和Wif-1基因启动子甲基化水平的关系,并以AML患者死亡或随访终点(1年)为终止时间点,比较各证型患者的生存时间差异。结果:AML患者中气阴两虚证者最多,瘀血痰结证者次之,毒热炽盛证者最少,各中医证型与性别、FAB分型、骨髓原始细胞比例的差异无统计学意义(P>0.05),但不同中医证型患者年龄的差异有统计学意义(P<0.05)。AML患者的Dkk-3、Wif-1基因甲基化表达水平均比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。各证型AML患者Dkk-3基因甲基化表达水平的差异无统计学意义(P>0.05);各证型AML患者Wif-1基因甲基化表达水平的差异有统计学意义(P<0.05),气阴两虚证患者的表达水平最高,瘀血痰结证次之,毒热炽盛证最小。对AML患者进行随访,中位随访0.3~24个月,中位生存时间为(11.80±6.29)个月,各个证型患者总体生存时间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AML患者的Dkk-3、Wif-1基因甲基化阳性率较无恶性血液病患者高,Dkk-3、Wif-1基因甲基化可能与AML发病有相关性。AML患者中医证型与Wif-1基因甲基化表达有相关性,气阴两虚证、瘀血痰结证患者的Wif-1甲基化表达明显高于毒热炽盛证患者,其可能可以作为AML中医辨证分型的参考指标。各中医证型AML患者生存时间的差异无统计学意义(P>0.05),今后应采用大样本、多中心的临床试验来进一步验证中医证型与生存时间的相关性。

pVAX-WIF-1真核表达载体的构建及其抗肺癌作用

背景与目的 WIF-1是肺癌中重要的抑癌基因之一,其编码蛋白WIF-1能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路达到抑制肿瘤生长增殖及促进凋亡等抗肺癌作用。本研究旨在利用美国食品和药品管理委员会认可用于临床治疗的p VAX载体,构建p VAX-WIF-1真核表达载体,初步探究p VAX-WIF-1在体内外对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用。方法应用PCR方法扩增人WIF-1编码序列片段,构建p VAX-WIF-1载体后转染肺癌A549细胞,Western blot检测WIF-1基因的表达;采用MTT法、Hoechst3235染色和流式细胞术分别检测p VAX-WIF-1在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡作用的影响;构建A549小鼠皮下瘤模型,探究p VAX-WIF-1在体内的抗肺癌作用。结果真核表达质粒载体p VAX-WIF-1构建成功,p VAX-WIF-1转染A549细胞后,WIF-1蛋白表达升高。p VAX-WIF-1转染A549后能抑制细胞增殖和诱导凋亡。动物体内结果表明,p VAX-WIF-1能有效抑制肺癌肿瘤生长。结论本研究成功构建了p VAX-WIF-1真核表达质粒,p VAX-WIF-1能明显抑制A549肺癌细胞增殖和促进凋亡,有效抑制A549皮下瘤生长。本研究将为WIF-1基因的肺癌临床治疗奠定了基础。

巢式甲基化特异性PCR检测肺癌病人WIF-1基因启动子区异常甲基化

为了检测肺癌患者血浆中WIF-1基因启动子区的甲基化状态,收集肺癌患者及健康对照者的血浆标本,采用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)法检测WIF-1基因启动子区甲基化状态,并与普通甲基化特异性PCR(MSP)法进行了比较,结果在58例肺癌患者血浆样品中经nMSP法发现20例WIF-1基因启动子的过甲基化,用MSP法只检出10例,有吸烟史组WIF-1基因的甲基化率高于无吸烟史组(P<0.05).而20例正常对照血浆中都未检测到WIF-1基因启动子的过甲基化;表明利用巢式MSP(nMSP)法检测外周血血浆中WIF-1基因启动子的甲基化,可为非损伤性筛选和早期诊断肺癌提供有价值的信息.

贲门腺癌Wif-1基因启动子区甲基化状态的检测及临床意义

目的研究贲门腺癌(gastric cardiacadenoc arcinoma,GCA)中Wnt抑制因子-1(Wntinhibitory factor-1,Wif-1)基因启动子区甲基化状态及表达情况,探讨其与贲门癌发生的关系及可能机制。方法分别用巢式甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR方法检测贲门腺癌及相应正常黏膜组织中Wif-1基因的甲基化状态和mRNA表达水平;应用免疫组化S-P法检测β-catenin蛋白的表达情况。结果Wif-1基因在贲门腺癌及正常黏膜组织中的甲基化率分别61.7%(58/94)和34.0%(32/94),癌组织中Wif-1基因的甲基化率明显高于正常黏膜组织(χ2=14.409,P=0.000);癌及正常黏膜组织中Wif-1基因mRNA的阳性表达率分别为10.6%(10/94)和86.2%(81/94),β-catenin蛋白的异质表达率分别为90.4%(85/94)和38.3%(36/94),癌组织中Wif-1mRNA表达及β-catenin蛋白的表达均与Wif-1基因的甲基化明显相关(P<0.01);Wif-1基因的甲基化与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤的病理分级及临床分期无关。结论Wif-1基因启动子区甲基化在贲门腺癌中频繁发生,可能通过引起经典Wnt/β-catenin通路的异常激活与贲门腺癌的发生密切相关。

大肠癌中WIF-1和Wnt2b的表达及其临床意义

目的通过检测WIF-1与Wnt2b在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及其与大肠癌生成、侵袭转移之间的关系,探讨WIF-1与Wnt2b之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测WIF-1和Wnt2b蛋白在15例癌旁正常组织、18例大肠腺瘤和103例大肠癌组织中的表达。结果 (1)WIF-1蛋白在大肠癌中的阳性率明显低于癌旁正常组织和腺瘤;Wnt2b蛋白在大肠癌中的阳性率高于癌旁正常组织和腺瘤。(2)WIF-1在大肠癌中的表达与患者的年龄、性别、分化程度、浸润程度、淋巴转移和远处转移均无关系(P>0.05);Wnt2b在大肠癌中的表达与大肠癌的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移和远处器官转移相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别均无关(P>0.05)。(3)大肠癌中WIF-1与Wnt2b的表达呈负相关(r=-0.199,P<0.05)。结论 WIF-1在正常大肠组织中呈阳性表达,在大肠癌的发病机制中可能发挥一定作用;Wnt2b的表达与大肠癌的发生、侵袭转移有关,联合检测WIF-1和Wnt2b有助于大肠癌的诊断、预防和治疗。

肝癌细胞中WIF-1的甲基化状态分析

目的探讨WIF-1基因在肝癌细胞中的甲基化状态及其与蛋白表达的关系,并初步研究了WIF-1与肝癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和测序方法分析了9种肝癌细胞系中WIF-1启动子区的甲基化状态,用RT-PCR检测了其mRNA的表达。用去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理肝癌细胞株并分析其mRNA和蛋白的表达的变化。结果6种肝癌细胞中检测到异常的甲基化,甲基化率为66.7%。在用5-Aza-CdR处理细胞后,WIF-1表达缺失的肝癌细胞系不同程度地恢复了表达。MTT法分析发现WIF-1对SMMC-7721(7721)细胞生长有较为显著的抑制效果。结论推断WIF-1启动子区频繁甲基化的现象可能是它在肝癌中表达沉默的主要机制,并在肝癌的发生发展起作用。

WIF-1与肿瘤关系的研究进展

WIF-1是Wnt/β-catenin信号通路的重要拮抗物之一。WIF-1作为一种抑癌基因,被发现在大多数肿瘤中表达降低,这与其启动子甲基化密切相关,而经去甲基化剂作用可恢复其表达。启动子甲基化导致的WIF-1抑癌作用的丧失可能主要通过异常激活Wnt/β-catenin信号通路而促进了肿瘤的发生。在不同肿瘤中,WIF-1表达降低与临床病理参数之间的关系有差异性。检测WIF-1表达及启动子甲基化水平可能为肿瘤早期诊断、治疗及判断预后提供帮助。

上调WIF-1基因表达对胆管癌细胞侵袭力的影响

目的研究WIF-1在人胆管癌细胞株中的表达及其在胆管癌细胞侵袭、转移过程中的作用。方法免疫组织化学法检测WIF-1在胆管癌细胞的表达,通过脂质体将WIF-1基因转染至胆管癌细胞中,采用Transwell法检测胆管癌细胞体外侵袭力的变化。结果 WIF-1在胆管癌细胞中未见表达,转染WIF-1质粒后,胆管癌细胞WIF-1表达显著上升,但其侵袭力则显著下降(P<0.05)。结论 WIF-1启动子的甲基化导致其在胆管癌细胞中表达下降,进而不能抑制Wnt/β-catenin信号通路而发挥抑癌作用。WIF-1在胆管癌发生、发展及转移过程中起着极其重要的作用。

WIF-1基因启动子甲基化与肝细胞癌的相关性研究

目的:探讨肝细胞癌(HCC)的发生与WIF-1基因启动子甲基化的相关性。方法:通过甲基化特异性PCR(MSP)检测WIF-1基因启动子在76例(实验组)HCC组织中的甲基化率,并随机留取伴肝硬化患者癌旁肝硬化组织标本47例(对照组),分析WIF-1基因启动子甲基化与HCC的相关性。结果:与肝硬化癌旁组织比较,HCC组织WIF-1基因启动子甲基化阳性率明显增高(P<0.05),并且HCC组织中WIF-1甲基化阳性率与甲胎蛋白(AFP)之间存在负相关关系(r=-0.759,P<0.001)。结论:WIF-1基因启动子甲基化与HCC的发生有关;在HCC中WIF-1基因启动子甲基化与AFP浓度呈明显负相关关系。

对讲机使用产生的电磁暴露对Wif-1基因甲基化水平及血液中淋巴细胞构成的影响

有研究提示电磁暴露可能是白血病发病的潜在危险因素。为探讨对讲机产生的电磁暴露对Wif-1基因甲基化水平及血液中白细胞构成的影响,采用1:1配对设计,选择年龄匹配的60名男性作为研究对象,最终纳入分析的为对讲机使用组(暴露组)29名,非使用组(对照组)28名。采用自行设计的流行病学调查问卷收集研究对象的一般人口学特征及职业暴露情况等。采用美国SEQUENOM Mass Array?Epi TYPER技术平台检测Wif-1基因的甲基化水平。采用配对t检验和多因素混合效应模型分析对讲机使用和Wif-1基因甲基化水平,以及Wif-1基因甲基化水平和血液中白细胞构成的关系。研究结果显示:在Wif-1基因启动子区域的32个CpG位点中,7个位点(CpG7、CpG8、CpG12、CpG16、CpG21、CpG28和CpG31)的甲基化水平暴露组显著高于对照组;电磁暴露与Wif-1基因平均甲基化水平呈正相关(偏回归系数β=2.19,概率P=0.026)。而Wif-1基因甲基化水平与淋巴细胞百分比呈正相关(β=0.633,P=0.020),与嗜酸性粒细胞百分比呈负相关(β=-0.151,P=0.016)。结果表明电磁暴露可能通过调节Wif-1基因甲基化水平而影响血液中淋巴细胞的构成,因而遗传的改变可能是电磁暴露致癌的重要机制,但是还需要更大样本量的研究来进一步确认。

肿瘤表观遗传学研究的新视点-WIF-1基因的甲基化

肿瘤抑制基因的异常甲基化在肿瘤的发生、发展中扮演着重要角色,其甲基化状态可作为肿瘤早期诊断、评价转移和评估预后的重要分子标记,而且抑癌基因的去甲基化亦可为肿瘤提供一种新的治疗方法。候选的抑癌基因WIF-1是Wnt蛋白的内源性分泌型拮抗因子,研究发现其可在多种人类肿瘤中因基因过度甲基化而导致Wnt信号途径的异常激活,促进肿瘤的发生。

5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中Wif-1基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响

目的探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。方法用不同浓度(0.5、1.0、1.5μmol/L)5'-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中Wif-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-Aza-CdR处理后Wif-1基因mRNA和蛋白重新表达,实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR(0.5、1.0、1.5μmol/L)在HT-29细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.207±0.052)、(1.790±0.033)和(2.016±0.123);在LoVo细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.294±0.048)、(1.893±0.061)和(2.204±0.041)。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为(0.456±0.040)、(0.511±0.025)、(0.857±0.031)和(0.934±0.047);LoVo细胞株相对表达量分别为(0.842±0.032)、(0.844±0.044)、(0.854±0.037)和(0.856±0.034)。以上作用均呈时间、剂量依赖性,Wif-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义(F=144.823,P=0.000;F=476.195,P=0.000)。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义(F=129.674,P=0.000),但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义(F=0.117,P=0.948)。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。

WIF-1基因启动子区甲基化在胃癌组织中的检测

目的检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况，并结合临床病理资料，探讨WIF-1基因甲基化状态与胃癌发生、发展的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specinc PCR，MSP）检测30例胃癌组织、30例癌旁组织及10例正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况。结果胃癌组织、癌旁组织及正常对照组WIF-1基因启动子甲基化阳性率分别为76．6％（23／30）、13．3％（4／30）和0．0％（0／10），胃癌组织甲基化率明显高于后两组，差异有统计学意义（均P〈0．05）。胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度的WIF-1基因甲基化阳性率差异均无统计学意义；有淋巴结转移组甲基化率（90％）高于无淋巴结转移组甲基化率（50％），差异有统计学意义（P〈0．05）；而Ⅲ～Ⅳ期和Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织中WIF-1基因甲基化阳性率分别为90．5％与44．4％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论WIF-1基因启动子区发生高甲基化导致其表达下调或缺失与胃癌的发生、发展以及临床病理特征有着密切的关系，通过MSP法检测胃癌组织及正常组织的甲基化率，为胃癌的早期诊断及综合治疗寻找新的靶点。

p15和WIF-1在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨p15和WIF-1在人脑神经胶质瘤中的表达,及其与临床病理特征和生物学行为的关系。方法:应用免疫组化SP法检测53例神经胶质瘤和20例正常脑组织中p15和WIF-1蛋白的表达,结合病例随访资料分析其临床意义。结果:p15及WIF-1蛋白在神经胶质瘤中的阳性表达率明显低于正常脑组织,差异具有统计学意义(P<0.05);p15及WIF-1蛋白的阳性表达率与神经胶质瘤的病理学分级和瘤周脑水肿具有相关性(P<0.05),但与性别和年龄不相关(P>0.05)。p15和WIF-1蛋白在神经胶质瘤中的阳性表达率复发组与无复发组有明显差异(P<0.05)。p15与WIF-1蛋白的表达呈正相关(r=-0.396,P<0.01)。结论:p15、WIF-1的表达与人神经胶质瘤的发生及进展相关;p15、WIF-1低表达患者预后较差。联合检测p15、WIF-1蛋白的表达对神经胶质瘤的早期诊断、判断预后有参考价值。

5-氮-2-脱氧胞苷调控Wif-1基因甲基化对胆管癌细胞侵袭力的影响

目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(DAC)对胆管癌细胞TFK-1侵袭力的影响及其机制。方法采用Transwell法检测胆管癌细胞在不同浓度DAC(0、10、20、40、80、160μmol·L-1)作用下侵袭力的变化;Western-blot法检测DAC作用后Wif-1蛋白的表达。结果 DAC对胆管癌细胞侵袭力有显著性抑制(P<0.05),且呈浓度依赖性;Wif-1蛋白在TFK-1细胞中未见表达,DAC处理后Wif-1蛋白再现表达。结论 DAC对胆管癌TFK-1细胞的侵袭有抑制作用,此作用可能是由Wif-1基因去甲基化来实现。

血浆WIF-1 DNA甲基化与肝癌患者临床特征和预后的关系

目的:检测肝癌患者血浆WIF-1甲基化状态,研究其与临床各相关因素的关系及对肝癌患者预后的意义。方法:采用甲基化特异性PCR法检测肝癌患者和健康体检者血浆中提取DNA的WIF-1甲基化状态,结合临床特征(包括性别、年龄、肝硬化、AFP水平、Hbs Ag及临床分期)进行分析,探讨联合甲基化状态与临床特征之间的关系,分析其与肝癌患者复发转移和预后的关系。结果:96例肝癌患者血浆WIF-1甲基化阳性为31.4%,对照健康组无甲基化,差异有显著的统计学差异(P<0.05)。肝癌血浆WIF-1甲基化状况与病人性别、年龄、抗-HBs、肝硬化无相关性(P>0.05),与AFP水平、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。WIF-1甲基化阳性组较阴性组转移复发率高,存活率较甲基化阴性组低。结论:WIF-1基因甲基化是影响肝癌患者FPS(progression-free survival)和OS(overall survival)的危险因素,对肝癌复发转移预测具有重要的价值,有望成为评估肝癌预后的有效指标。

肾细胞癌中Wif-1基因的甲基化状态及表达

目的检测肾细胞癌(RCC)中Wnt抑制因子-1(Wif-1)基因的甲基化状态及表达水平,探讨其在肾细胞癌发生发展中的可能机制。方法分别应用甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测56例肾细胞癌及相应癌旁正常肾组织中Wif-1基因的甲基化状态及表达水平。结果 Wif-1基因在RCC组织中的甲基化率显著高于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。Wif-1基因在RCC组织中的相对表达量显著低于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。在RCC组织中,Wif-1基因甲基化阳性组mRNA的相对表达量与甲基化阴性组mRNA的相对表达量比较无显著差异(P>0.05)。结论 Wif-1基因启动子区的高甲基化在肾细胞癌的发生中是一个频发事件。

WIF-1启动子甲基化与肿瘤

WIF-1(Wnt Inhibitory Factor-1)是Wnt信号通路的一种拮抗物,能在胞外与Wnt蛋白结合而抑制Wnt信号转导。近年来的研究表明,多种肿瘤中均存在WIF-1基因启动子的异常甲基化。WIF-1启动子甲基化使WIF-1蛋白表达降低,从而降低了抑制Wnt信号转导的作用,使细胞发生增殖、分化,促进肿瘤的发生发展。检测组织中WIF-1甲基化程度,可作为肿瘤早期诊断和评估预后的生物学标志物;运用去甲基化剂如5-氮杂胞苷,可逆转WIF-1的甲基化状态,从而成为肿瘤治疗的一个新靶点。