甘草素调控WIG-1基因对肺癌细胞增殖、细胞凋亡以及放疗敏感性影响的研究

目的:探讨甘草素(LQ)对肺癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:体外培养肺癌细胞株H1299,采用MTT细胞实验检测不同浓度LQ对H1299细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测H1299细胞凋亡率变化情况。Western blot检测各组H1299细胞中WIG-1蛋白表达情况,克隆形成实验检测不同剂量照射的H1299细胞存活分数。结果:不同浓度LQ处理后可抑制H1299细胞增殖并诱导细胞凋亡;LQ作用H1299细胞后经X线照射可降低H1299细胞存活分数并促进细胞凋亡;LQ可抑制H1299细胞中WIG-1蛋白表达;沉默WIG-1后经X线照射H1299细胞存活分数明显降低并可诱导细胞凋亡;WIG-1过表达可逆转LQ对H1299细胞凋亡及放疗敏感性的作用。结论:LQ通过调控WIG-1基因表达进而抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡及增强放疗敏感性。

Dicer蛋白与Wig-1蛋白的相互作用的研究

Dicer是RNA干扰中起核心作用的一种dsRNase,Wig-1是受p53诱导的、与dsRNA特异结合的一种锌指蛋白。本研究初步证实了Dicer蛋白与Wig-1蛋白存在相互作用。GST pull-down实验表明Dicer蛋白能与GST-Wig-1结合,而Wig-1蛋白能竞争性干扰Dicer与GST-eIF2C1的结合;Far-western分析证实Dicer蛋白可以与结合在硝酸纤维素膜上的GST-Wig-1蛋白结合;进一步发现Wig-1能有效促进重组Dicer的dsRNase酶切活性。这些结果揭示Dicer蛋白和Wig-1蛋白很可能通过相互作用共同参与了dsRNA调控相关的生理过程。

WIG-1表达的调控及其在肿瘤和干细胞中的作用

约50%的人上皮细胞肿瘤中能检测到TP53突变,因此全面阐释p53的功能是肿瘤学研究的核心问题之一[1]。在DNA损伤、癌基因活化、核苷酸耗竭和缺氧等多种应激因素刺激下,p53稳定性增高,并被转录后修饰作用所激活,从而介导细胞发生G1/G2期停滞或凋亡,并参与细胞衰老、分化、DNA修复和基因组稳定性的维持等过程[1-2]。作为转录因子。

p53靶位基因Wig-1——肿瘤与干细胞新的调控因子

Wig-1是抑瘤基因p53的转录调节靶位之一,编码与基因转录后水平调节相关的锌指结构蛋白。Wig-1几乎在所有类型细胞中均有表达,在脑组织中表达水平最高,在干细胞中表达水平较分化细胞高。Wig-1可结合长双链RNA(dsRNA),也可结合短的dsRNA,如microRNA。Wig-1通过结合p53基因3'非翻译区的富于AU元件稳定p53基因mRNA,正反馈调节p53基因。在此讨论Wig-1与p53功能的关系,在肿瘤、非肿瘤性疾病以及干细胞调控中的作用。

术前联合使用顺铂和中药大黄素对人食管鳞癌WIG-1 mRNA的影响

目的分析术前联合使用西药顺铂和中药大黄素对人食管鳞癌WIG-1 mRNA的影响。方法选取在湘雅萍矿合作医院2019年1月—2020年8月接受治疗的120例食管鳞癌患者作为研究对象,所有患者均采用西药顺铂和中药大黄素联合用药的方式进行为期3个疗程的治疗。根据术中所取病灶组织部位的不同,将其分为观察组和对照组。观察组术中取肿瘤病灶组织,对照组术中取距离肿瘤部位3 cm以上的癌旁组织,每组各60例。收集不同病灶样本后,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术对WIG-1 mRNA表达水平进行分析。结果观察组肿瘤组织的WIG-1 mRNA表达水平为(0.79±0.14),高于对照组的(0.06±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者在接受手术后肿瘤组织的WIG-1 mRNA表达水平为(0.24±0.04),低于术前的(0.79±0.14),差异有统计学意义(P<0.05)。结论WIG-1 mRNA基因在未发病组织中表达量较少,且在术前联合使用西药顺铂和中药大黄素对食管鳞癌患者进行治疗有利于减少WIG-1 mRNA的表达量,可较好地改善患者的预后,进而为食管鳞癌的治疗提供临床及分子学依据。

干扰WIG-1的表达对小细胞肺癌多药耐药的影响

目的 探讨WIG-1在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用.方法 运用实时荧光定量PCR（real-time PCR）和Western blot检测小细胞肺癌敏感细胞株H69和耐药细胞株H69AR中WIG-1的表达,real-time PCR法检测化疗敏感和耐药患者血液标本中WIG-1的表达,小干扰RNA （siRNA）抑制耐药细胞株H69AR中的WIG-1的表达,CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡,分析WIG-1的表达与患者临床特征和预后的关系.结果 H69AR和H69细胞株中WIG-1mRNA的表达水平分别为5.965±0.890和1.023 ±0.127,差异有统计学意义（P =0.007）.化疗耐药患者和化疗敏感患者的血液标本中WIG-1 mRNA的表达水平分别为4.169 ±0.970和1.673-±0.127,差异有统计学意义（P＜0.001）.siRNA抑制耐药细胞株H69AR中WIG-1的表达能增加细胞对化疗药物的敏感性,差异有统计学意义（P＜0.01）.H69AR细胞组和H69细胞组的凋亡率分别为（1.037±0.049）％和（7.963±0.097）％,差异有统计学意义（P＜0.01）.下调H69AR细胞中WIG-1的表达后,H69AR-Si-WIG-1组细胞的凋亡率为（20.915±0.890）％,高于空白对照组细胞[（1.037±0.049）％]和阴性对照组细胞[（2.025±0.097）％],差异均有统计学意义（均P＜0.01）.WIG-1的表达与患者的性别、年龄无关（均P ＞0.05）;与患者的疾病分期、化疗药物敏感性和生存状况有关（均P ＜0.05）.结论 WIG-1参与调节小细胞肺癌的多药耐药机制,下调WIG-1基因的表达可能通过增加细胞的凋亡逆转小细胞肺癌的多药耐药性.