广西乐业野生春兰iPBS遗传多样性分析与指纹图谱构建

【目的】分析广西乐业县野生春兰种质资源的遗传多样性,构建其DNA指纹图谱,为野生春兰种质资源的分类和鉴定提供科学依据。【方法】采用iPBS分子标记分析收集于广西乐业县81份野生春兰种质资源和4个春兰栽培品种的多态性位点比率(PPL)、多态性信息含量(PIC)、观测等位基因数(N a)、有效等位基因数(N e)、Nei’s基因多样性(H e)和Shannon信息指数(I)。从83条iPBS引物中筛选出扩增条带清晰、多态性高、重复性好的引物,对供试85份春兰种质的基因组DNA进行PCR扩增,统计凝胶电泳特征性谱带;采用POPGEN 1.32计算各野生春兰种质的遗传多样性指数,并基于其遗传相似系数进行UPGMA聚类;利用引物扩增条带多态性位点构建春兰种质数字指纹图谱。【结果】筛选出的6条引物扩增获得105条清晰谱带,其中,多态性条带95条,多态性比例为90.48%;85份春兰种质的平均PIC、平均N a、平均N e、平均H e和平均I分别为0.8050、1.7923、1.2204、0.2765和0.4590。供试春兰种质间的遗传相似性系数变辐为0.690~0.981,在相似系数0.704处,可将85份春兰种质划分为4个类群,其中,79个广西乐业野生春兰种质分布在第Ⅰ类群,第Ⅱ类群包括4个栽培品种,第Ⅲ和第Ⅳ类群分别只有1份广西乐业野生春兰种质。数字指纹图谱构建结果表明,利用2对iPBS引物(2249和2076)组合扩增的多态性位点即可将85份春兰种质全部区分,由此构建的乐业野生春兰种质数字指纹图谱可为野生春兰种质的鉴定提供科学依据。【结论】81份广西野生春兰种质表现出丰富的遗传多样性,基因交流较频繁,遗传背景相似。iPBS分子标记可用于春兰种质的鉴别及遗传多态性分析。

贵州野生春兰遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD标记对贵州及周边分布的野生春兰遗传多样性进行分析。结果表明：筛选的48个引物共扩增了324条600～2000bp带,其中201条（62.0%）显示多态性,RAPD标记可以有效地用于春兰野生资源遗传多样性评价;原产于贵州不同居群间样品的遗传差异性较大,多态性百分率为36.8%（荔波样品）～69.8%（黎平样品）,高于60%的样品占全部贵州样品的1/3,分布于全省5个地州市;聚类分析显示,样品的聚类具有很强的地域性,特别是贵州样品表现更为明显,来自川西的样品和黔北、黔东北的样品具有很高的同源性。

湖北野生春兰资源遗传多样性的ISSR分析

近年来,由于过度采挖和生境片断化,湖北野生春兰(Cymbidiumgoeringii)资源正面临着灭绝的危险。本文采用ISSR分子标记技术对湖北省内的11个春兰野生居群共325个个体的遗传多样性水平及居群遗传结构进行了研究。11个引物共检测到127个位点,其中112个为多态位点,占88.19%。POPGENE分析结果表明:与其他兰科植物相比,春兰具有丰富的遗传变异(在物种水平上,He=0.2628,Ho=0.4037;在居群水平上,PPL=63.06%,He=0.1945,Ho=0.2958)。Nei's遗传多样性分析和AMOVA分析表明,各居群间产生了一定程度的遗传分化(GST=0.2440,FST=0.2207)。居群间一定程度的遗传分化可能是由生境破坏和基因流障碍(Nm=0.8828)引起。UPGMA聚类分析可知,与其他居群相比,恩施地区的5个居群,即巴东(BD)、福宝山(FBS)、宣恩(XE)、毛坝(MB)、来凤(LF)优先聚成一支,而大悟(DW)居群单独聚为一支。同时本研究也表明,虽然春兰自交亲和,但在自然界中其繁育系统还是以异交为主。鉴于春兰资源的遗传多样性现状和其相应的居群遗传结构,我们建议在遗传多样性较高的来凤(LF)、京山(JS)、大悟(DW)居群设立保护点进行就地保护;而对资源破坏最为严重的毛坝(MB)和宣恩(XE)居群要实行迁地保护。