东北地区野猪粪便中乳酸菌的分离鉴定与生物学特性分析

为了筛选野猪体内潜在的乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)并对其生物学特性进行分析,试验以东北地区野猪粪便为样品,利用MRS培养基分离纯化,结合16S rDNA基因鉴定筛选LAB,并对分离株的耐酸和耐胆盐性能进行测定,进一步分析其黏附、凝集和抑菌特性及在动物体内的安全性。结果表明:从野猪粪便中共分离出106株LAB,经过耐酸和耐胆盐复筛,4株菌株(粪肠球菌2株、唾液乳杆菌1株和乳酸片球菌1株)对低pH值和高浓度胆盐具备良好的耐受能力。4株LAB对Caco-2细胞的黏附率在45.16%~66.66%之间,且自凝集率较高(在70%以上),同时对3株致病菌(大肠杆菌K88、猪霍乱沙门菌C500和金黄色葡萄球菌ATCC 25923)具备较强的共凝集能力;4株LAB对3株致病菌均具有较强的抑菌活性;而将LAB连续饲喂小鼠后无不良反应。说明从野猪粪便中筛选到的4株LAB有潜力作为优良微生态制剂的候选菌株。

野蓝莓、荞麦酸豆乳的研制

以大豆为主要原料,添加一定量的脱脂奶粉及荞麦糊等原、辅料,采用保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌1∶1混合(SL)、两歧双歧杆菌(Bb)、嗜酸乳杆菌(La)四种乳酸菌进行发酵。发酵后用野蓝莓(笃斯越橘)果酱调配制成酸甜可口、风味浓郁的营养保健型酸豆乳。通过正交试验确定最佳工艺条件为:豆水比1∶10,以此原料豆乳为基数,菌种配比SL∶Bb∶La为2∶1∶2,接种量3%,发酵时间6h,发酵温度37℃;各种辅料添加量为:荞麦糊5%,野蓝莓果酱10%,蔗糖6%,乳糖2%,稳定剂0.2%,脱脂奶粉5%。

野生型乳酸菌的分离·筛选及鉴定

[目的]研究从传统乳制品中分离鉴定出乳酸菌,并对其发酵性能进行简单筛选。[方法]以10份传统自制酸乳食品为样品,对发酵性能优良的乳酸菌进行了分离、鉴定和产酸性研究。[结果]样品中共分离出55株乳酸菌,经凝乳试验筛选出27株凝乳效果较好的乳酸菌,鉴定为有乳杆菌属13株、乳球菌属2株和肠球菌属8株。将凝乳最快的2只杆菌SC1、SC4和1只球菌EB1以及按1∶1复配的SC1+EB1和SC4+EB1 5个样品发酵复原乳,分别测定了这5种发酵剂在37和42℃下发酵2～9 h产酸的速率。结果表明,分离得到的菌种37℃下产酸速率都大于42℃下的;且相比单个菌种,复配后的菌种发酵的酸乳产酸速率在37和42℃下都属于中速,但最终酸度最适合饮用,口感最佳。[结论]研究可为以后挑选出优良的野生菌种提供参考。

野猪粪便中乳酸菌的分离鉴定及特性研究

【目的】筛选安全的、具有优良特性的乳酸菌菌株,进一步研发益生制剂,为饲料添加剂等动物相关产品提供资源。【方法】从我国黑龙江省大兴安岭地区采集野猪粪便样品13份,编号后置于4℃保温箱迅速运回实验室,利用MRS培养基分离纯化乳酸菌。使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取分离菌株的基因组DNA,利用细菌16S rDNA通用引物进行PCR鉴定,将扩增得到的序列测序后在NCBI上使用BLAST与GenBank数据库中序列进行对比分析,确定各菌株的分类学地位。将鉴定后的乳酸菌菌株分别接种于酸性(pH 3.0)和含胆盐(0.3%)的MRS培养基,在不同条件下评价乳酸菌菌株的耐酸、耐胆盐特性。将过夜培养的乳酸菌于室温条件下静置,在不同时间测定其OD600nm,进行自凝集能力评价;过夜培养的菌株分别与致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌混合后于室温静置,进行共凝集能力检测。在体外,分别进行乳酸菌菌株对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞的黏附能力测定,评价不同菌株的黏附能力。通过测定乳酸菌菌株对致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌的抑菌环直径,评价分离菌株的抑菌活性。通过体内外试验评价乳酸菌菌株的安全性。在体外,分别以模式菌株嗜酸乳杆菌和金黄色葡萄球菌作为阴性对照和阳性对照,将3株乳酸菌菌株和对照菌株在血平板上划线,37℃厌氧孵育18—24 h,观察细菌菌落周围是否形成溶菌环,评价分离菌株的溶血特性。使用文献中已报道的毒力因子引物对分离的乳酸菌菌株进行PCR扩增,检测是否存在毒力因子的编码基因,评估分离菌株的安全性。在体内,将过夜培养的乳酸菌连续饲喂7周龄的BALB/c小鼠21 d,分别测定小鼠的初始体重和最终体重,观察计算体重变化情况;饲喂21 d后,解剖获取小鼠的脾脏、肝脏和肾脏计算器官指数,评价分离乳酸菌菌株的体内安全性。【结果】从野猪粪便中分离得到3株对酸和胆盐具备一定耐受力的乳酸菌,经鉴定分别为蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)、耐久肠球菌(Enterococcus durans)和黏膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae)。3株乳酸菌菌株均表现出较强的自凝集能力和对致病菌的共凝集能力,同时对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞均表现出较强的黏附能力,抑菌试验结果显示黏膜乳杆菌对3种致病菌均具备较强的抑菌活性。经体内外安全性评价,3株乳酸菌菌株无溶血性,且均未检测到毒力基因,经其连续饲喂的小鼠行为表现正常、状态良好,其中,与对照组相比,黏膜乳杆菌饲喂后小鼠增重显著。【结论】从大兴安岭野猪粪便中分离的3株乳酸菌(特别是黏膜乳杆菌)具有良好的特性和安全性,具备进一步开发益生菌制剂的潜力。

野生猕猴桃酒苹果酸-乳酸发酵优良乳酸菌的筛选与耐受性研究

该研究通过形态观察及生理生化试验,采用酸性番茄(ATB)培养基从自然启动苹果酸-乳酸发酵(MLF)的野生猕猴桃酒中筛选MLF优良乳酸菌,并对其SO2、酒精、pH耐受性进行测定。结果表明,经初筛得到6株乳酸菌,分别编号为R6、R7、R11、R14、R15、R18。其中,菌株R6、R15可耐受SO2 80 mg/L,菌株R7可耐受SO2 100 mg/L;菌株R6、R7可耐受酒精度14%vol,菌株R15可耐受酒精度12%vol;菌株R6、R7可耐受pH 3.2,菌株R15可耐受pH 3.0。综合分析,菌株R6、R7和R15具有较强的SO2、酒精及pH耐受能力,为MLF优良乳酸菌。