UE参数、S-TK1、AG490、WIP1诊断TC

目的:探究UE参数、S-TK1、AG490、WIP1对甲状腺癌(TC)的诊断价值。方法:选择我院收治TC患者102例(TC组)和同期收治甲状腺结节良性患者73例(对照组)。比较两组UE参数、S-TK1、AG490、WIP1,分析各指标对TC的诊断价值。结果:TC组的弹性评分、SR值、S-TK1、WIP1水平均高于对照组,AG490低于对照组(P<0.05);ROC曲线分析发现五项指标联合诊断TC的AUC最高(P<0.05)。结论:UE参数与S-TK1、WIP1、AG490联合检测有利于临床诊断TC。

野生型P53、P16基因协同对肺腺癌细胞系生长抑制作用的研究

为了探讨野生型P5 3基因及P16基因在恶性肿瘤基因治疗中的作用 ,用腺病毒为载体将野生型P5 3基因转入高、低转移的肺腺癌细胞系Anip973、AGZY83 -a和经野生型P16基因质粒转染的高、低转移肺腺癌细胞系Anip973(Anip973P16 )、AGZY83-a(AGZY83-aP16 )。对各组转染细胞进行生长曲线、MTT生长抑制率、原位末端标记、Western -blotting等技术检测分析。结果发现 (1)野生型P5 3蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用。 (2 )野生型P5 3蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Anip973的抑制作用明显高于低转移细胞系AGZY83 -a。 (3)野生型p5 3蛋白的过表达对经野生型P16基因转染的高、低转移的肺癌细胞Anip973、AGZY83-a抑制作用明显高于未经P16基因转染的细胞。野生型P5 3基因可以作为肺腺癌基因治疗的候选基因。肿瘤抑制基因P5 3、P16的联合转染可能是对肺腺癌进行基因治疗的有效手段。

心脉通对家兔颈动脉内皮损伤后野生型p53基因表达的影响

目的:探讨中药复方制剂心脉通防治经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄作用机理。方法:用Fishman空气干燥法,建立家兔颈动脉内皮损伤模型,以组织原位杂交方法观察心脉通对家兔颈动脉内皮损伤后p53基因表达的影响。结果:术后3天出现表达,7天表达增强,14天表达高峰,21天表达减弱,28天仍然持续表达。其中A组(心脉通组)表达信号最强,B组(华法令组)弱于A组,C组(手术对照组)显著弱于A、B组。结论:心脉通能促进家兔颈动脉内皮损伤后野生型p53基因高表达,这可能是心脉通防治再狭窄的重要机理之一。

野生型-p53与JunB融合基因对裸鼠肝细胞肝癌移植瘤的抑制作用

目的探讨野生型(wt)-p53与JunB融合基因抑制裸鼠肝细胞肝癌(肝癌)移植瘤的作用。方法将18只BALB/c裸鼠按随机数字表法随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,每组6只,分别接种wt-p53与JunB融合基因质粒、携带GFP的空质粒及单纯肝癌细胞HepG2,于注射后的28d处死荷瘤裸鼠,测量肿瘤体积、肿瘤重量,计算肿瘤抑制率。结果 3组裸鼠移植瘤位于背侧皮下,实验组裸鼠移植瘤较小,阴性对照组与空白对照组裸鼠移植瘤均明显隆起于裸鼠背部皮下。实验组移植瘤的体积、重量明显小于阴性对照组,差异均有统计学意义(LSD-t=4.63,P=0.006;LSD-t=19.56,P<0.01);实验组移植瘤的体积、重量也明显小于空白对照组,差异均有统计学意义(LSD-t=5.74,P=0.002;LSD-t=27.22,P<0.01);阴性对照组与空白对照组间移植瘤的体积、重量差异无统计学意义(LSD-t=1.59,P=0.171;LSD-t=2.00,P=0.101)。实验组平均肿瘤抑制率为84%。结论 wt-p53和JunB融合基因可明显抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长。

p53基因导致心肌细胞凋亡及其机制探讨

目的 探讨野生型p5 3基因与心肌细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 把野生型p5 3基因重组腺病毒转入体外培养的心肌细胞中 ,采用流式细胞计数仪 (FCM) ,透射电镜等实验方法检测细胞凋亡并分析其作用机制。结果 重组腺病毒能有效地将p5 3基因转入心肌细胞中 ;转入的p5 3基因可以导致心肌细胞体积变小、胞浆浓缩、核固缩、染色质边集 ,引起细胞G1期阻滞。结论 野生型p5 3基因可以导致心肌细胞凋亡 ,并能影响细胞周期。以上结果为进一步研究心肌疾病的发病机制及其治疗提供了重要的实验依据。

野生型P53及其调控基因与子宫颈癌发病机制

P53基因是迄今发现与人类肿瘤的发生相关性最高的抑癌基因,在人类癌症中发生突变的频率高达50%。在子宫颈癌组织中表达则降低,且以野生型(wt)为主。wtP53第4外显子72密码的基因多态性与子宫颈癌发病机制密切相关。wtP53蛋白在子宫颈癌细胞中半衰期短,功能易失活,具有调节细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长的功能。其功能失活与多种基因,如E6,E7,MDM2和STAT3等基因的降解作用有关。

宫颈鳞癌组织中HPVE6与野生型p53和PinX1表达的关系及其临床意义

目的探讨宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁及正常宫颈组织中HPV E6、野生型p53及Pin X1表达及其关系。方法收集第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科2013年3月至2014年2月17例宫颈鳞癌患者宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁组织,选取10例正常宫颈组织作为对照。采用Real-Time PCR、Western blot、免疫组织化学方法检测3组组织中HPV E6、野生型p53和Pin X1的mRNA、蛋白的表达及分布。结果宫颈鳞癌组织中mRNA及蛋白水平结果均显示HPV E6的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),而野生型p53和Pin X1的表达水平明显低于癌旁及正常组织(P<0.05)。相关性分析提示:宫颈鳞癌组织中野生型p53(R=-0.605,P<0.01)和Pin X1(R=-0.496,P<0.05)表达水平的下降与HPV E6的表达水平升高存在负相关,野生型p53与Pin X1的表达呈正相关(R=0.824,P<0.01)。结论宫颈鳞癌组织中HPV E6表达上调与野生型p53、Pin X1的表达负相关,Pin X1的表达与野生型p53密切相关,HPV E6可能通过抑制野生型p53、Pin X1导致宫颈鳞癌的发生、发展。

HSV-tk与p53基因对涎腺多形性腺瘤细胞的杀伤作用

目的 观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV_tk)基因、野生型p53基因(wt_p53)联合杀伤人涎腺 多形性腺瘤细胞的效果。方法 采用腺病毒介导的HSV_tk基因、wt_p53基因联合转染人涎腺多形性腺瘤细胞,逆 转录聚合酶链式反应(RT_PCR)检测转染后的基因表达;四唑盐比色(MTT)法测定tk与p53基因治疗后对肿瘤细 胞的杀伤作用及旁观者效应,并采用相差显微镜观察基因治疗后肿瘤细胞的形态学变化。结果 单独转染wt_p53 及HSV_tk GCV基因5d后,涎腺多形性腺瘤细胞的存活率分别为54%和38%;两者联合转染5d后,细胞的存活率 降至20%,两者差异有显著性(P<0.05)。结论 HSV_tk、wt_p53基因联合应用对涎腺多形性腺瘤的杀伤作用强于 此两基因单独应用的杀伤作用。

野生型p53基因重组质粒的构建及其对人肠癌细胞的抑瘤效应

人p53基因是一种抑癌基因,p53蛋白作为一种细胞增殖的负调节因子,调控细胞的生长和分化,维持基因组DNA的稳定,其突变、缺失或与细胞、病毒、肿瘤蛋白结合所致的p53失功能,在恶性肿瘤发生发展中起着非常重要的作用.为了进一步探讨野生型p53基因的抗肿瘤特性,我们采用分子克隆方法将人野生型p53基因(WT-p53)cDNA全长正向插入到哺乳动物表达载体(pREP9)的BamHl位点,构建了pREP9-p53重组体,用电穿孔方法将其导入有p53基因突变的人肠癌SW1116细胞,通过标记基因Neo^R筛选带外源p53基因的G418抗药性克隆,以观察抗药性克隆数量,同时对G418抗药性细胞的生长速度及细胞增殖周期进行观察.结果表明,导入WT-p53基因能使肠癌SW1116细胞的G418抗药性克隆形成减少,细胞生长速度较对照细胞明显减慢,细胞增殖周期GI期增加、S期下降.这些结果证明人野生型p53基因能抑制肠癌细胞的生长.本研究为大肠癌WT-p53实验性基因治疗提供了理论依据,说明基于恢复P53肿瘤抑制基因功能的基因治疗在治疗结、直肠癌方面有着广阔的应用前景.

肿瘤抑制基因p53的研究进展

综述了p5 3基因的特性、认识阶段。

动态观察红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡与wtp53表达的意义

目的 :探讨红藻氨酸 (KA)致痈大鼠海马神经细胞凋亡与野生型p5 3(wtp5 3)蛋白表达的关系。方法 :采用KA诱导癫痫发作大鼠模型。以TUNEL方法标记DNA片段 ,原位检测凋亡细胞 ;免疫组化SP法检测wtp5 3蛋白。结果 :注射KA 72h后 ,癫痫发作大鼠海马CA1区凋亡神经细胞达高峰及wtp5 3蛋白表达在 2 4h大量出现 ;wtp5 3蛋白表达与细胞凋亡呈正相关。结论 :癫痫神经细胞凋亡与wtp5 3表达密切相关 ;痫性发作使wtp5 3表达上调 ,从而诱导神经细胞凋亡。

p53、Rb、IGF-I、AT_(1B)基因转移对血管新生内膜增殖的影响

目的观察和比较人野生型ｐ５３基因、Ｒｂ基因、反义ＩＣＦ－Ｉ基因与大鼠反义ＡＴ１Ｎ基因对大鼠颈动脉损伤后新生 内膜增殖的影响。方法通过病毒载体介导，将上述４种基因分别转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，２１ｄ后 观察并比较其对新生内膜形成的影响。结果与对照组相比，ｐ５３基因、Ｒｂ基因治疗组及反义ＩＧＦ－Ｉ基因治疗组的动脉 血管新生内膜／中层面积比均显著降低（ｐ＜０．０１）；与ＡｄＶβ ｇａｌ组相比，反义ＡｄＶＡＴ１Ｂ基因组的动脉血管新生内膜／中 层面积比显著降低（Ｐ＜０．０１）．而ｐ５３基因治疗组、Ｒｂ基因治疗组、反义ＩＧＦ－Ｉ基因组及反义ＡｄＶＡＴ１Ｂ基因组之间无显 著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论上述４种基因对血管成形术后再狭窄可能均有一定的预防作用。

野生型p53基因导入诱导神经细胞凋亡

目的 观察野生型 p5 3基因诱导神经细胞凋亡的现象 ,探讨外源性 p5 3基因对神经细胞 p2 1、c-fos和 c-jun基因表达的影响。方法 构建了野生型 p5 3基因的重组线病毒载体 ,体外转染胚胎大鼠神经细胞 ,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的切口末端标记技术原位检测细胞凋亡 ,以免疫组化法测定 P2 1 、c-Fos和 c-Jun蛋白表达水平。结果 外源性基因导入神经细胞后 ,P2 1、c-Fos和 c-Jun蛋白水平显著增高 ,d UTP切口末端标记阳性细胞百分率约为 4 0 %。结论 野生型 p5 3基因可诱导神经细胞凋亡和促进 p2 1、c-fos和

氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53基因对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨氧化铁磁性纳米颗粒介导野生型p53基因(wild type p53,wt-p53)对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法:氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染肺腺癌细胞A549/DDP作为实验组,以纳米颗粒介导空载体pcDNA3转染作为阴性对照组,脂质体介导wt-p53转染作阳性对照组。MTT法和绘制生长曲线观察基因转染对A549/DDP细胞增殖抑制作用,荧光显微镜、流式细胞术观察其对A549/DDP细胞诱导凋亡作用,RT-PCR检测其对A549/DDP细胞Bax mRNA表达的影响。结果:氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP增殖有持续的抑制作用,而以脂质体介导wt-p53对增殖抑制作用持续时间短暂;纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP诱导凋亡作用明显强于以脂质体载体;同时介导wt-p53上调Bax mRNA表达水平的作用也明显强于以脂质体载体。结论:氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染对人肺腺癌细胞A549/DDP有持续的增殖抑制和诱导凋亡的作用。

EBV相关性胃癌罕见p53基因突变的可能机制与意义

2014年癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)首次将胃癌从分子水平分为四型,其中EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染型即EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVa GC)患者,可能是免疫治疗的适宜群体。在包括胃癌在内的大部分肿瘤中p53基因突变率最高,但在EBVa GC中p53基因突变率却远低于EBV阴性胃癌(EBV-negative gastric cancer,EBVn GC)。可能机制为:EBV感染是EBVa GC形成的早期事件;野生型p53蛋白与病毒即刻早期蛋白BZLF1(Z)相互作用,维持EBV潜伏感染状态和早期复制;病毒复制后期,野生型p53蛋白可在病毒产物的作用下通过泛素化等途径被降解,以上或可表明p53基因野生型对EBVa GC形成的重要性。而EBV感染诱导炎症反应,肿瘤组织中大量淋巴细胞浸润,基因组高突变率及PD-L1扩增的特征使其可能成为免疫治疗的适宜群体,也说明免疫微环境在肿瘤发生发展中的重要作用。而在EBVn GC中,多种因素导致p53基因突变率较高,使其失去正常的抑癌功能而导致肿瘤发生。本文就EBVa GC中罕见p53基因突变这一现象的可能机制进行综述。

野生型p53基因转移对血管内膜损伤后再狭窄的防治作用

为防止血管成形术后管腔再狭窄，我们构建了介导野生型ｐ５３基因转移的复制缺陷型重组腺病毒（Ａｄ－ｐ５３），将Ａｄ－ｐ５３感染日本大耳兔球囊损伤后的髂动脉，并通过携带ＬａｃＺ基因重组腺病毒感染观察基因转染效率。结果可见Ａｄ－ｌａｃＺ感染损伤后的动脉３天后血管内膜、中膜、外膜均有ＬａｃＺ基因的阳性表达；Ａｄ－ｐ５３感染损伤后的髂动脉２周后可见血管内膜增厚程度、内膜与中膜的比例明显减小，管腔狭窄程度明显减轻，ｐ５３蛋白大量表达，与对照组相比具有显著差异。证明野生型ｐ５３基因转移能明显抑制血管损伤后的内膜增殖，为野生型ｐ５３基因转移防治血管内膜损伤后再狭窄奠定了实验基础。

野生型p53基因转移抑制兔心肌细胞生长的实验研究

目的 探讨野生型 p5 3基因转移对兔心肌细胞生长的抑制作用及 p5 3基因用于心肌肥厚基因治疗的可能性。方法 将腺病毒介导的野生型 p5 3基因转入体外培养的乳兔心肌细胞 ,应用生化染色方法、Westernblot杂交检测野生型 p5 3基因的转染效率及表达结果 ,采用透射电镜、MTT增殖抑制实验 (MTT)及流式细胞仪细胞周期分析方法研究野生型 p5 3基因对细胞生长的抑制作用。结果 重组腺病毒能有效地将野生型 p5 3基因转入心肌细胞中 ,并且检测到 p5 3基因表达 ;转入的 p5 3基因导致心肌细胞收缩、体积变小 ;MTT结果显示 ,野生型 p5 3基因能够抑制心肌细胞生长 ,且生长抑制率呈现时间和剂量依赖性 ;心肌细胞增殖周期结果显示 ,细胞G0 - G1 期 DNA百分含量明显高于对照组 ,提示发生 G1 期阻滞。结论 野生型 p5 3基因能高效转染体外培养的心肌细胞 ,对心肌细胞生长有明显的抑制作用 ,其抑制作用的机理是由于野生型 p5 3基因影响心肌细胞的增殖周期 ,以上结果为心肌肥厚的基因治疗提供了重要的实验依据。

尿刊酸修饰的壳聚糖介导野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系H1299增殖和凋亡的影响

目的:研究尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因转染对人肺腺癌细胞系H1299(p53基因缺失)的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,采用荧光显微术、RT-PCR法和West-ernblot法分别检测细胞内绿色荧光蛋白(GFP)、wt-p53mRNA和蛋白的表达,并通过MTT法分析基因转染对细胞的生长抑制作用,DAPI染色法和琼脂糖凝胶电泳法评价其对细胞的诱导凋亡作用。结果:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,大量细胞表达GFP,细胞内wt-p53mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞生长受到显著地抑制,凋亡细胞数量明显增加,并有清晰的DNA梯状条带出现。结论:UAC介导wt-p53基因转染能够显著地抑制人肺腺癌细胞系H1299的增殖,并诱导其凋亡。

肺腺癌高、低转移细胞系Anip973、AGZY83-a中野生型p53基因过表达研究

目的探讨野生型ｐ５３基因及其表达产物ｐ５３蛋白在恶性肿瘤基因治疗中的作用。方法应用腺病毒为载体将野生型ｐ５３基因转入高、低转移的肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３、ＡＧＺＹ８３－ａ，并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位末端标记、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ等技术检测分析。结果野生型ｐ５３蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用，野生型ｐ５３蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３的抑制作用明显高于低转移细胞系ＡＧＺＹ８３－ａ。结论外源性野生型ｐ５３基因的过表达，可以有效抑制上述肿瘤细胞的增殖，同时对高转移肺腺癌细胞系的抑制作用更加显著。

野生型p53对热休克蛋白90β基因表达的调控作用

为了阐明野生型p53分热休克蛋白90β（hsp90β）基因表达调控中的作用，我们利用野生型p53的表达质粒转染Jurkat细胞，发现野生型p53可以剂量依赖方式抑制hsp90β基因的启动子活性，并且证实hsp90β基因的表达在mRNA和蛋白水平均明显减少。