植物源无血清培养基的研究进展

在培养基中添加血清是目前培养哺乳动物细胞最常见的方法,血清几乎可以提供细胞生长的一切营养物质,但同时,血清成分复杂,价格昂贵,会增大变异和宿主动物病原体感染的风险,导致细胞污染。而在培养基中添加植物源蛋白水解物代替血清,不仅能避免它带来的外源性污染缺陷,还能获得良好的细胞培养效果并维持其原有生物学功能,大大提高生物安全性,降低细胞培养成本。综述了植物源无血清培养基的研究现状,阐述了现有研究的问题和未来研究的潜在方向,为后续植物源无血清培养基的开发提供理论指导。

Williams E无血清培养基中绵羊皮肤游离毛囊的培养

[目的]为研究哺乳动物毛囊的生长机理提供依据。[方法]将分离的蒙古绵羊皮肤毛囊接种到Williams E无血清培养基上,研究蒙古绵羊皮肤毛囊的体外生长规律,并分析在Williams E无血清培养基中添加胰岛素和氢化可的松对绵羊皮肤毛囊生长和形态的影响。[结果]在Williams E无血清培养基上,87.5%绵羊皮肤毛囊生长良好,其平均生长期为19 d,平均生长长度为0.15 mm/d,前6 d的生长速度最快。在培养前15 d,毛囊形态结构无明显变化。随着培养时间延长,毛囊逐渐增长,外根鞘和毛根不断延长,真皮鞘变薄。22 d后,毛囊出现贴壁,角朊细胞从外根鞘上移出,毛囊生长速度减慢。添加胰岛素和氢化可的松有维持毛囊形态的作用。[结论]该研究为检测某些细胞因子和药物提供了模型。

MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感疫苗研究与生产中的应用进展

流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒研究的不断深入,为了进一步拓展MDCK细胞用于流感病毒研究和工业应用的能力,研究人员开始发展MDCK细胞无血清全悬浮培养技术。通过长期的培养和优化,驯化的MDCK悬浮细胞株可以更好地适应流感病毒的生长环境,提高流感病毒的产量和感染性。总之,MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感病毒研究和工业应用中发挥着重要作用,为流感疫苗生产和抗流感药物研发提供更好的工具。同时也必须重视MDCK细胞的安全性,采取合适的措施来确保其应用的安全性和可靠性。

常规培养基低血清培养对猪圆环病毒Ⅱ型效价的影响

为了减少抗原生产过程中血清的使用量,节约生产成本、提升产品质量,本试验通过降低常规培养基中血清浓度和不同时间点换液相结合的方法培养猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus typeⅡ,PCVⅡ),收获后对比分析病毒滴度。结果显示试验组的病毒滴度比对照组略高,表明常规培养基降低血清浓度亦能维持细胞生长,并收获与原生产工艺病毒滴度相当的抗原。该方法的应用将减少血清使用量,节约生产成本。

无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞的比较

目的对无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞进行比较。方法应用两种培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化及对血凝效价的影响。结果应用无血清培养基(A)培养CHO-C28细胞虽然可维持细胞正常生长,但贴壁不好,逐渐降低(A)加量情况可得到相应改善。结论 目前无血清培养基尚不能完全取代含血清培养基用于培养CHO细胞。

不同种属真皮成纤维细胞在不同血清浓度培养基中生长的比较观察

目的 :探讨作为皮肤组织工程种子细胞的不同种属动物成纤维细胞在不同培养基中的生长状态 ,以获得最佳生长状态的种子细胞。方法 :分别配制体积分数为 10 0、50、2 0ml/L血清和 2 0ml/L血清 +牛垂体提取物 (BPE ,0 .0 2 5g/L) 4种培养基来培养人、York猪、SD鼠的真皮成纤维细胞 ,通过MTT比色和BrdU检测观察细胞的生长状态。结果 :成纤维细胞在 4种培养基中的生长状态有所不同 :人成纤维细胞在 10 0、50ml/L血清和 2 0ml/L血清 +BPE的培养基中生长良好 ,York猪成纤维细胞在 50ml/L血清和 2 0ml/L血清 +BPE的培养基中生长良好 ,SD鼠成纤维细胞只有在 2 0ml/L血清 +BPE的培养基中生长状态好 ,增殖快。结论 :不同浓度血清的培养液对真皮成纤维细胞的生长都有影响 ,血清体积分数为 2 0ml/L(含BPE ,0 .0 2 5g/L)的培养液对3种真皮成纤维的生长都适合 ,血清体积分数为 10 0ml/L和 50ml/L的培养液也分别适合于人。

无血清培养基与完全培养基体外诱导扩增CIK细胞分泌细胞因子水平的比较

目的比较无血清培养基（AIMV）与完全培养基（CM）体外诱导扩增CIK细胞及CIK细胞分泌细胞因子水平。方法分别用AIMV及完全培养基加入4种细胞因子（IFN-γ、IL2、IL-1及OKT3）将脐带血单个核细胞（CBMNCs）诱导成CIK细胞，比较细胞的增殖能力、细胞表型及分泌细胞因子水平。结果与完全培养基比较，无血清培养基培养的CIK细胞增殖高峰较晚（14～17天），但增殖倍数高，在细胞表型、分泌细胞因子水平方面两种培养基培养的CIK细胞均无明显的差别（P〉0．05）。结论无血清培养基可代替完全培养基。

哺乳动物细胞无血清培养基研究进展

随着哺乳动物细胞培养种类、规模和应用范围的不断扩大以及安全性能要求的不断提高,无血清培养基的研制已经成为细胞工程领域的重要课题。许多类型的哺乳动物细胞无血清培养基配方得到了研究开发和优化,且有些已经进入第3代无蛋白无血清培养基研制阶段。论文重点概述了无血清培养基在添加因子作用机制、细胞分化条件、细胞和组织移植以及肿瘤治疗等方面的研究进展。

无血清专用培养基体外快速培养临床级树突状细胞的实验探讨

目的:探讨采用无血清专用培养基从肺癌患者外周血单核细胞快速培养树突状细胞(DCs)的方法。方法:将10例肺癌患者外周血单核细胞同时采用含人AB型血清培养基和无血清DCs专用培养基(DCMedium)培养,5例于第7天加入促成熟细胞因子组合,第9～10天收获成熟DCs,另5例于第5天加入促成熟细胞因子组合,且TNF-α剂量加大5倍,第7天收获成熟DCs。结果:DCMedium培养的DCs形态变化快,细胞出现突起的时间早;9～10天收获的两种培养基培养的DCs性能无差异;7天收获的DCs中,DCMedium培养的DCs得率和纯度、共刺激分子表达水平、刺激T细胞增殖能力均优于含血清培养基。结论:无血清DCs专用培养基可以在体外快速培养临床级DCs,为肿瘤免疫治疗奠定基础。

无血清培养基与完全培养基对体外诱导免疫细胞支持作用的比较

目的 :多方面比较无血清培养基AIMV与完全培养基对体外诱导免疫细胞支持作用。方法 :分别用AIMV及完全培养基在IFN γ ,IL 2 ,及抗 CD3单抗存在的条件下培养人外周血单个核细胞 ,比较细胞的增殖能力、细胞表型、及细胞因子分泌能力 ,并比较不同培养基培养细胞回输体内后的抑制病毒效果。结果 :与完全培养基培养细胞相比 ,无血清培养基AIMV培养细胞增殖能力与之相当 ;CD2 5的表达率增高 ,表达持续时间延长 ;细胞因子IFN γ的分泌时间延长 ;回输体内后的抑制病毒作用更明显。结论 :无血清培养基AIMV用于培养临床治疗用的免疫细胞 ,综合效果优于完全培养基。

无血清培养基与完全培养基对体外诱导扩增CIK细胞及抗肿瘤活性的比较研究

目的:比较无血清培养基AIMV与完全培养基对体外诱导扩增CIK细胞的效果。方法:分别用AIMV及完全培养基加入4种细胞因子(IFNγ、IL2、IL1及OKT3)将脐带血单个核细胞(CBMNCs)诱导成CIK细胞,比较细胞的增殖能力、细胞表型、对肿瘤细胞的增殖抑制作用及其诱导肿瘤细胞凋亡等几个方面。结果:与完全培养基比较,无血清培养基AIMV培养的CIK细胞增殖高峰较晚(14～17d),但增殖倍数高(倍),在细胞表型、对三株肺癌细胞的生长抑制作用及不同效靶比诱导细胞凋亡方面两种培养基培养的CIK细胞差异无统计学意义,P>0.05。结论:无血清培养基AIMV可代替完全培养基。

黑水虻幼虫培养基替代豆粕对吉富罗非鱼生长、体组成和血清生化指标的影响

在实用饲料(含豆粕35.0%,豆粕粗蛋白质含量为47.7%)的基础上,用黑水虻幼虫培养基分别替代0(G0)、15%(G15)、30%(G30)、45%(G45)的豆粕,配制成4种等氮(31%),等脂(6%)的实验饲料,以研究罗非鱼(Oreochromis niloticus)饲料中黑水虻幼虫培养基替代豆粕的可行性。将400尾初始体重为(2.30±0.02)g的罗非鱼随机分成4组(每组设4个重复,每个重复25尾),其中以饲喂G0实验饲料的组为对照组,实验期为8周。结果显示:黑水虻幼虫培养基替代豆粕对罗非鱼增重率、饵料系数、存活率影响不显著。与G0组相比,各替代组罗非鱼全鱼粗蛋白、灰分、水分含量差异不显著,但随着替代量的增加,全鱼粗脂肪含量显著降低,G45组全鱼粗脂肪含量显著低于对照组。黑水虻幼虫培养基替代豆粕对罗非鱼肥满度影响不显著,但肝体比随着替代量的增加显著降低,在30%的替代量时差异达到显著水平。与G0组相比,各替代组罗非鱼血清白蛋白、球蛋白、血糖、甘油三酯、胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶以及尿素含量差异不显著。由以上研究结果得出,在豆粕用量为35%的基础饲料中,黑水虻幼虫培养基可替代豆粕用量的45%而不影响罗非鱼生长,黑水虻幼虫培养基在基础饲料中的添加量为34.6%,占饲料总蛋白质含量的23.69%;黑水虻幼虫培养基可显著降低罗非鱼全鱼粗脂肪含量以及肝体比。

无血清培养基IVD101和G1/G2在牛体细胞核移植中的应用研究

通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基(IVD101、G1/G2)条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa+5%FBS作为对照组。无血清培养基IVD101和G1/G2的囊胚发育率与对照组无显著性差异(41.2%±9.1%、42.2%±10.8%,48.0%±9.2%,P>0.05)。通过囊胚差异染色和冷冻/解冻胚胎存活率分析胚胎质量,发现无血清培养基ICM/Total略低于对照组(31.8%±10.5%、29.5%±11.9%vs.33.0%±14.8%),但无显著性差异(P>0.05);3个组别的囊胚经程序化冷冻/解冻后无血清培养基的存活率(IVD101、G1/G2)略高于对照组,但差异不显著(84.8%、80.4%vs.77.3%,P>0.05)。结果证明无血清培养基(IVD101、G1/G2)可以支持体细胞核移植重构胚的体外发育,且其对程序化冷冻的耐受性与添加血清组(CR1aa+5%FBS)相似。

动物细胞无血清培养基的发展和应用

随着生物医药产业和生命科学基础研究对动物细胞培养规模、效率和安全性能要求的不断扩大和提高,无血清培养基的研制和开发已经成为细胞工程领域的重要课题。无血清培养基的发展历经了无血清来源、无动物源、无蛋白和化学成分限定培养基等四个阶段,逐步使得无血清培养基的成分更为明确和简单,进一步提升了无血清培养基在细胞培养中可避免外源物污染等的优势,使其在生物制品和生命科学领域获得了广泛的应用和发展。本文主要系统总结了无血清培养基的发展历程、组分构成和优化方法,尤其对无血清培养基近年来在生物制品、干细胞培养及肿瘤研究等方面的最新开发应用进行了扼要分析述论,以期对无血清培养基在生物学前沿领域的应用和优化提供可借鉴的方向,尤其在肿瘤干细胞的方面可以进行更深入的探索。

简化无血清培养基分离U2-OS人骨肉瘤细胞系肿瘤干细胞

背景:已有实验应用成分复杂的无血清培养基从骨肉瘤组织中分离出干细胞样肿瘤细胞。目的:应用简化的无血清培养基在U2-OS人骨肉瘤细胞系中分离培养出骨肉瘤干细胞并对其作肿瘤干细胞的相关检验。设计、时间及地点:干细胞体外培养实验,于2006-02/2007-02在兰州大学第二医院骨科研究所完成。材料:U2-OS人骨肉瘤细胞系购自中科院上海生命科学研究院细胞库。无血清培养基为在DMEM/F12培养基中添加重组表皮生长因子(20μg/L)和重组成纤维生长因子(20μg/L),L-谷氨酰胺(2mmol/L),胰岛素(4U/L),青霉素G(1×l05U/L),链霉素(100mg/L)。方法:取在含血清培养基中贴壁生长的U2-OS细胞,接种于含有表皮生长因子和成纤维生长因子的简化无血清培养基中,形成悬浮生长的骨肉瘤细胞球后观察其增殖、分化能力。用免疫细胞化学染色法检测间充质干细胞标志CD44、CD105蛋白在骨肉瘤细胞球中的表达。反转录-聚合酶链反应法检测U2-OS细胞及其肿瘤干细胞中胚胎多能干细胞管家基因Oct3/4mRNA的表达。主要观察指标:①悬浮细胞球的形成。②肿瘤干细胞增殖活性。③肿瘤干细胞的侵袭能力。④CD44、CD105蛋白在骨肉瘤细胞球细胞中的表达。⑤肿瘤干细胞中Oct3/4mRNA的表达。结果:U2-OS人骨肉瘤细胞系中有极少数的细胞能在简化无血清培养基中增殖形成骨肉瘤细胞球,具有很强的增殖分化能力,其表面具有间充质干细胞的膜分子CD44、CD105,表达胚胎干细胞管家基因Oct3/4mRNA。结论:U2-OS细胞系中存在肿瘤干细胞,简化无血清培养基可用于分离培养骨肉瘤干细胞。

无血清培养基培养乳猪肝细胞的效果

目的:比较无血清培养基和含血清培养基培养乳猪肝细胞的效果,以寻找一种用于生物人工肝猪肝细胞无血清培养的良好培养基。 方法:采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞。将肝细胞以5×10~8·L^(-1)分别培养在无血清培养基和含血清培养基中,动态观察培养7d中肝细胞活率、蛋白质和葡萄糖合成功能、G-6-Pase活性、安定转化功能及LDH漏出量。 结果:无血清培养的猪肝细胞各项指标除G-6-Pase活性在0,1,2d较低、葡萄糖合成功能在2,7d较低外,其余与含血清培养基培养的肝细胞无显著差异。肝细胞活率随着培养时间的延长而下降,但均高于88％;无血清培养的肝细胞的蛋白质合成功能在培养7d中保持稳定。安定转化功能在培养2,3d最强(安定浓度2d时为75±4pg·cell^(-1),3d时为77±5pg·cell^(-1);葡萄糖合成功能从1d时1.00±0.15nmol·cell^(-1)下降到2d时0.71±0.02nmol·cell^(-1);G-6-Pase活性从0d时1290±30zmol·cell^(-1)下降到1d时306±38zmol·cell^(-1),然后维持在较低水平;LDH漏出量在2,3d较高。

一种适合肝细胞生长的无血清培养基

背景：寻找一种既能适合细胞生长又避免添加血清的培养基迫在眉睫,无血清培养应运而生.目的：探索一种适用于C3A 细胞生长的无血清培养基,为肝细胞用于临床治疗以及生物人工肝走入临床奠定基础.方法：分别用无血清培养基、完全培养基和基础培养基培养C3A 细胞,观察细胞的生长状态,绘制细胞生长曲线和活力曲线,全自动生化分析仪测定上清中谷丙转氨酶漏出量、尿素含量,放射免疫分析法检测白蛋白分泌量,实时荧光定量PCR检测基因水平的变化情况.结果与结论：3 种培养基培养的细胞生长良好,无血清培养基组与完全培养基组细胞密度在培养周期内,除第7 天以外差异无显著性意义（P 〉 0.05）.培养第4~7 天,其他两组明显高于基础培养基组（P 〈 0.05）;无血清培养基尿素合成水平〉完全培养基〉基础培养基（P 〈 0.05）.Real-time qPCR 显示,无血清培养基组相对于完全培养基组仅CK18、CK19 和HNF4α基因表达量下降（P 〈 0.05）.说明实验研制了一种适合于肝细胞（C3A）生长的无血清培养基,与传统血清培养能达到同样的效果.

无血清培养基的成分改进及应用现状

无血清培养基因其组成成分相对清楚,制备过程简单,与天然培养基、合成培养基相比有着无可比拟的优势,因而在生命科学基础研究和生物医药等领域日益得到了重视和广泛应用。主要对无血清培养基的发展过程、成分及改进、应用及开发方面进行了论述。

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响:Ⅱ.氨的作用

目的 在无血清培养基中，研究氨对杂交瘤细胞生长代谢的影响。方法 在培养基中添加不同浓度的氨，考察细胞生长和代谢及单抗生成的变化。结果 添加0．8mmol/L）的氨时就对细胞生长和代谢有影响，当氨浓度达4mmol/L时，对细胞的生长代谢有明显的抑制，当培养基中氨浓度高于6mmol/L时，细胞生长停止，代谢受到严重影响。氨的添加降低了培养上清中的单抗浓度，但提高了单抗的比生产速率。结论 氨对细胞生长和代谢有较大的影响，对单抗浓度的影响主要由细胞密度降低造成，单抗的比生产速率增加。

无血清培养基用于Vero细胞培养的效果

应用美国Ｈｙｃｌｏｎｅ生产的无血清培养基（Ｂ３）用于Ｖｅｒｏ细胞的培养。结果Ｖｅｒｏ细胞用１０％小牛血清加入基础培养基使细胞贴壁后换以无血清培养基后，Ｖｅｒｏ细胞用１０％小牛血清加入基础培养基使细胞贴壁后换以无血清培养基后，Ｖｅｒｏ细胞可以生长繁殖，其繁殖数量在培养９６ｈ可达１５万／ｍｌ，但少于对照１９９加１０％小牛血清组（３０万／ｍｌ），细胞长成单层后接种狂犬病固定毒ＣＴＮＣＰ３０，病毒生长繁殖，第７天达到高峰，毒力为６．０ｌｏｇＬＤ５０／ｍｌ，低于对照组（毒力７．５ｌｏｇＬＤ５０／ｍｌ），表明无血清培养基（Ｂ３）虽可促进Ｖｅｒｏ细胞生长并对感染病毒敏感，但其细胞生长数量和促进病毒繁殖较加入小牛血清差。