胃癌中新抑癌基因WTX启动子区域甲基化水平的检测(英文)

目的探讨抑癌基因WTX启动子区域甲基化水平及其在胃癌中的作用。方法运用MassARRAY定量分析系统分析20例胃癌及配对正常组织和3种胃癌细胞株(MGC803、SCG7901和BGC823)中WTX基因启动子区域甲基化水平。应用5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)对胃癌细胞BGC823进行去甲基化处理,分析其对WTX基因启动子区域甲基化水平的影响。结果在胃癌及其配对正常组织和胃癌细胞株中,WTX基因启动子区域甲基化水平普遍较低,并且3组之间无统计学差异。用5-aza-dC处理后并不能改变胃癌细胞株中WTX基因启动子区域的甲基化水平。结论胃癌中基本不存在WTX基因启动子区域高甲基化状态。

人X染色体含有一个黑色素瘤抗原基因亚家族

肿瘤相关基因的研究是肿瘤基因形成学说的核心内容。肿瘤相关基因家族的研究则是其中的重点和难点．从４～６月孕龄人胎肝。ＤＮＡ文库中克隆到１个黑色素瘤抗原基因（ＭＡＧＥ－Ｄ１）。随后发现了一个黑色素瘤抗原基因亚家族，称为ＭＡＧＥ－Ｄ亚家族，其成员包括３个直系同源体（人ＭＡＧＥ－Ｄ１、大鼠ＳＮＥＲＧ－１和小鼠ＤＬＸＩＮ－１）和２个旁系同源体（人ＭＡＧＥ－Ｄ和人ＫＩＡＡ１１１４）。该家族的３个人类成员均定位于染色体Ｘｐ１１．２１－ｐ１１．２３，同时具有独特的基因组结构。分子进化树分析表明，该家族与已知ＭＡＧＥ－Ａ、－Ｂ和－Ｃ ３个亚家族之间具有明显的进化上分歧。该亚家族的发现为研究肿瘤相关基因新功能提供了重要线索。

稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立

目的构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障。方法以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-N1表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体。经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功。构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞。qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达。结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达。BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX。结论本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础。

应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞系

目的构建WTX CDS区全长重组慢病毒表达载体,感染结直肠癌SW620细胞,建立WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞株。方法将WTX基因全长CDS区插入GV287慢病毒质粒载体,重组载体与包装载体共转染人胚肾293T细胞,收集上清、浓缩得到表达WTX的重组慢病毒。慢病毒感染结直肠癌SW620细胞,荧光显微镜初步观察感染效率,G418进一步筛选得到稳定感染细胞株。QPCR及Western blotting检测WTX过表达效率。每部分均设立相应对照。结果载体片段测序结果示成功构建了WTX重组表达载体;包装病毒滴度检测适中,提示WTX表达慢病毒包装成功;慢病毒感染结直肠癌SW620细胞后,WTX基因m RNA以及蛋白表达水平明显增高,有统计学意义,提示SW620结直肠癌细胞WTX高表达稳定株构建成功。结论建立慢病毒感染方法的结直肠癌SW620细胞WTX过表达稳定细胞株,为进一步研究WTX对结直肠癌发生、发展的作用机制提供分子生物学工具。

XAF1和XIAP在肺鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)在肺鳞癌发生、发展中的作用。方法 51例肺鳞癌患者术后切除的肺组织标本分为三组:A组为肺癌组织,B组为肺癌旁2cm组织,C组为肺癌旁5cm组织。应用免疫组化检测三组XAF1蛋白表达;半定量逆转录-PCR检测51例肺癌组织中XAF1和XIAP mRNA表达,分析其表达与临床病理特征的相关性。结果 A组XAF1的表达强度显著低于B、C组(54.9%vs.78.4%、86.7%)(P<0.05);低分化和高TNM分期的XAF1表达低于高分化和低TNM分期(P<0.05)。A组中XAF1mRNA的表达水平低于C组(P<0.05)。结论 XAF1在肺癌发生、发展中具有促凋亡作用。

甲状腺结节克隆来源分析

目的通过分析甲状腺结节的克隆来源,以增强对甲状腺肿瘤起源的进一步认识。方法对有关甲状腺结节克隆来源的相关文献进行综述并分析。结果关于甲状腺结节克隆起源,目前多采用X染色体失活和单基因突变检测的方法确定其克隆性。X-染色体失活研究的文献证实,甲状腺结节尤其是甲状腺肿瘤多为单克隆性,且通过甲状腺内淋巴网转移,但是单克隆与多克隆可以同时存在。单基因突变的检测目前仅发现BRAF突变对于甲状腺结节克隆性判断有一定价值。结论甲状腺结节为临床常见疾病,甲状腺结节克隆性尚未定论,文献研究仍表明甲状腺结节多为单克隆性。