Wilms肿瘤基因反义寡苷酸对白血病细胞凋亡的影响

了解Wilms肿瘤基因 (WT1)反义寡核苷酸 (ASO)对白血病细胞凋亡的作用。方法 :应用WT1ASO以及足叶乙甙 (VP 16 )作用K5 6 2、HL 6 0细胞系 ,然后应用流式细胞仪测定DNA含量以确定白血病细胞的凋亡数。结果 :K5 6 2细胞系经WT1ASO作用 2 4h和 6 0h后细胞凋亡数分别为 14.6 %和 2 6 .8% ;而WT1有义寡核苷酸 (SO)组分别为 3.1% (2 4h)和 3 9% (6 0h) ;加入少量VP 16后凋亡数达到 37 2 % (2 4h)和 6 6 .6 % (6 0h)。HL 6 0细胞经WT1ASO作用 2 4h及 6 0h后细胞凋亡数无明显增高 ,但作用 6 0h后与VP 16联合作用 ,细胞凋亡可达 34.7% ,大于单用VP 16 (13 .7% )及VP 16 +SO (15 .4% )诱导的细胞凋亡数。结论 :WT1ASO可以导致K5 6 2细胞凋亡并可提高白血病细胞对VP 16的敏感性。WT1基因与白血病细胞的凋亡有关 ,其在不同细胞中所发挥的作用不同。

Wilms肿瘤基因在生长发育及非肿瘤性疾病中作用研究

Wilms肿瘤基因(WT1)是与Wilms肿瘤密切相关的癌基因,具有锌指转录因子活性。近年来研究表明,WT1基因是维持组织器官生长发育的重要调控因子;当WT1基因表达异常时,除了作为抑癌或原癌基因参与多种肿瘤发生发展外,还与肥胖、糖尿病、高血压等非肿瘤性疾病关系密切。本文主要就WT1基因在生长发育及非肿瘤性疾病发生中的作用综述如下。

Wilms肿瘤基因在骨髓增生异常综合征与急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

目的研究Wilms肿瘤基因(WT1)在骨髓增生异常综合征(MDS)及急性白血病(AL)患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法采用qRT-PCR检测62例MDS(MDS组)、157例AL(AL组)和38例非恶性血液病患者(对照组)骨髓细胞中WT1的表达。结果 MDS组WT1阳性率低于AL组(27.4%vs.79.0%)(P<0.01);对照组无WT1阳性表达。MDS组内难治性血细胞减少伴单系发育异常/难治性贫血伴环状铁粒幼红细胞(RCUD/RARS)型、难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)型、难治性贫血伴原始细胞增多Ⅰ型(RAEB-1型)和RAEB-2型WT1阳性率分别为9.1%、20.0%、35.3%和57.1%,组间均有统计学差异(P<0.01);AL组内急性髓细胞性白血病(AML)型和急性淋巴细胞性白血病(ALL)型WT1阳性率分别为80.8%和71.9%(P>0.05)。AL患者中,WT1阳性组化疗后的完全缓解率低于WT1阴性组(P<0.05),且半年内复发率高于WT1阴性组(P<0.05)。结论 WT1在MDS及AL患者骨髓细胞中表达水平可作为临床评估疾病的发生发展、预后及检测微小残留病的指标。

Wilms肿瘤易感基因在急性髓系白血病中的研究进展

Wilms肿瘤易感基因(Wilms tumor type 1,WT1)起初作为肿瘤抑制基因而被大家认识,而最近报道指出WT1作为原癌基因在正常造血系统细胞增殖分化过程中发挥着重要的作用,且预示着较差的肿瘤预后。表明WT1基因与疾病的发生、发展及预后存在密切关系。近年来对WT1基因的表达、突变与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)疗效和预后的关系有进一步的研究进展。本文就近几年WT1在AML疾病中的作用进行了综述,旨在全面考虑该基因对于疾病的作用并对患者实施分层治疗,从而达到精准治疗。

不同基因突变的急性髓系白血病患者的疗效及预后研究进展

急性髓系白血病(AML)是一组起源于造血干细胞的血液系统恶性肿瘤。近年来细胞遗传学改变被认为是AML患者重要的独立预后因素。FLT3、NPM1、RUNX1及WT1基因突变已成为重要的危险分层评价指标。其中FLT3-ITD突变可导致白血病细胞增殖失控,是独立预后不良因素。NPM1突变预示着更好的预后,可考虑选择全反式维甲酸和砷剂联合治疗、抗CD33单抗、放线菌素等治疗。RUNX1基因突变是近年来在髓系肿瘤中发现的热点突变,在初发核型正常AML中频发,与短的总体生存时间及不成熟的细胞形态有关,被认为是维持AML生存所必需的肿瘤抑制因子。WT1基因为调节造血和凋亡的肿瘤抑制基因,表达高低可能与临床缓解和复发有关,可作为潜在的预后因素和特异性免疫治疗的新靶点。复发时用定量PCR方法检测NPM1突变较WT1更具优势。本文就以上分子标志作一综述。旨在寻找潜在的基因靶点,为开发精准治疗AML的新型基因靶向药物提供参考。

白血病患者WT1基因表达及其临床意义

本文探讨 Ｗ Ｔ１ 基因在各种白血病中的表达及其临床意义。应用逆转录酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 法测定 Ｋ５６２ 细胞株，２３例白血病患者，其中 Ａ Ｍ Ｌ１２ 例， Ａ Ｌ Ｌ３ 例， Ｃ Ｍ Ｌ７ 例， Ｃ Ｌ Ｌ１ 例；２ 例恶性淋巴瘤（ Ⅲ期） 患者骨髓或外周血及１０ 例正常人外周血 Ｗ Ｔ１ 基因表达。 Ｋ５６２ 细胞株高度表达 Ｗ Ｔ１ ，急性髓性白血病（ Ａ Ｍ Ｌ）１２ 例中１０ 例，急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３ 例中２ 例，慢性粒细胞白血病（ Ｃ Ｍ Ｌ） 急性变６ 例表达阳性； Ｃ Ｍ Ｌ 加速期、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤（ Ⅲ期） 和１０ 例正常人外周血 Ｗ Ｔ１ 基因表达阴性。 Ｗ Ｔ１ 基因在早期造血细胞中表达，与急性白血病密切相关，有可能作为残余白血病细胞检测的特异性指标。

急性白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的观察WT1基因在白血病细胞的表达及其临床意义,探讨WT1基因表达与白血病疗效关系。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测初治及复发急性白血病患者73例治疗前WT1基因的表达,结合临床观察WT1表达阳性与急性白血病治疗疗效关系,并观察缓解后患者WT1基因表达的变化。结果73例急性白血病患者WT1阳性53例(72.6%),其中46例急性髓细胞白血病阳性32例(69.6%),23例急性淋巴细胞白血病阳性17例(73.9%)。3例急性混合细胞白血病及1例急性浆细胞白血病均表达阳性。在急性淋巴细胞白血病和非M3型急性髓细胞白血病中,WT1表达阳性对治疗缓解率无明显影响。对21例患者治疗后动态观察,当完全缓解时,WT1表达转阴性;复发时WT1表达又转阳性。结论WT1在急性白血病阳性率较高,但阳性与否对临床疗效无明显影响。WT1基因作为白血病标志用于急性白血病微小残留病的检测有重要价值。

卵巢浆液性肿瘤中WT-1异常活化对ki-67和P53蛋白表达的调控作用

目的探讨卵巢浆液性肿瘤WT-1异常活化情况,并分析对ki-67和P53蛋白表达的调控作用及临床意义。方法随机选取我院卵巢肿瘤患者100例,其中卵巢浆液性囊腺瘤26例、交界性浆液性肿瘤15例、卵巢浆液性癌34例和卵巢黏液性癌25例,采用免疫组化检测WT-1、ki-67、P53蛋白的表达,并分析其与关系。结果在卵巢浆液性癌中WT-1阳性率为32.35%,显著高于交界性浆液性肿瘤,其中高级别浆液性癌中的阳性率为36.84%,又明显高于低级别浆液性癌(26.87%),组间比较差异具有统计学意义(P<0.05),而在卵巢浆液性囊腺瘤中未见WT-1蛋白异常表达。在卵巢浆液性癌和交界性浆液性肿瘤中ki-67、P53蛋白的表达明显高于浆液性囊腺瘤(P<0.05),ki-67和P53在不同级别卵巢癌中亦存在差异性表达(P<0.05);在卵巢黏液性癌和浆液性癌组织中WT-1和ki-67、P53蛋白差异均未见统计学意义(P>0.05)。Spearman等级相关分析显示,WT-1蛋白与ki-67、P53蛋白的表达均呈正相关(r=0.998和0.745,P=0.001)。结论卵巢浆液性癌中存在WT-1异常活化,且主要发生于高级别浆液性癌中,其可能通过调控ki-67、P53蛋白的表达而发挥癌基因的作用,检测WT-1蛋白对判断肿瘤性质和级别具有重要的指导价值。

胰腺导管腺癌组织中WT1,IGF-IR表达与细胞凋亡的关系

目的:研究胰腺导管腺癌组织中WT1,IGF-IR的表达与细胞凋亡关系．方法:应用免疫组化技术检测WT1,IGF-IR在49例胰腺导管腺癌及15例正常胰腺组织中的表达,并应用TUNEL法检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI)．结果:WT1,IGF-IR在正常胰腺组织中的阳性表达率分别为26．67％(4／15)、40．00％(6／15);在胰腺导管腺癌组织中的阳性表达率分别为71．43％(35／49)、77．55％(38／49),两者在癌组织中的表达分别明显高于其在正常胰腺组织中的表达(P<0．05),且在癌组织中的表达呈正相关(r=0．385,P<0．05)．正常胰腺组织及癌组织中的AI分别为0．41±0．13、5．93±4．18,两者比较有显著性差异(P<0．05),癌组织中AI随组织分化程度的升高而升高．IGF-IR表达阳性组的AI显著低于阴性组(4．11±3．68 vs 12．21±5．67,P<0．01)．结论:胰腺导管腺癌组织中IGF-IR的高表达抑制细胞凋亡,WT1,IGF-IR的高表达以及细胞凋亡的减少可能在胰腺导管腺癌的发生发展中起重要作用．

实时荧光定量RT-PCR检测白血病细胞WT1 mRNA方法的建立

目的 建立实时荧光定量 RT-PCR检测白血病细胞 WT1m RNA的方法。方法 在 PCR反应体系中加入了一条与靶基因序列互补的寡核苷酸双荧光标记探针 (5′端为荧光报告基团 ,3′端为荧光淬灭基团 ) ,建立实时荧光定量 RT-PCR检测白血病细胞 WT1m RNA的方法 ,并测试其特异性及敏感性。结果 所建立的实时荧光定量 RT-PCR检测 WT1m RNA的方法具有很好的准确性 ,检测 WT1m RNA的灵敏度达 10 - 4。方法的变异系数为1.93 % ,稳定性较好。循环阈值与 PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系 (斜率为 -3 .5,线性相关系数 r=0 .997) ,可对 WT1m RNA的表达进行准确定量分析。结论 实时荧光定量 RT-PCR检测白血病细胞WT1m RNA的方法具有很好的特异性和敏感性 ,且操作简便、安全。

巢式PCR检测WT1在白血病患者中的表达及其临床意义

应用巢式逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)测定 K5 62细胞株及 75例白血病患者及 10名正常人 WT1基因的表达。并同时测定 mdr1的表达。检测结果为 K5 62细胞株高表达 ,急性髓性白血病 ( AML) 3 0例中 19例 ,急性淋巴细胞白血病 ( AL L) 13例中 10例 ,慢性粒细胞白血病 ( CML)共 17例 ,其中加速及急变期 3例 ,慢性期 14例中 8例 ,WT1表达为阳性 ,10名正常人及 7例缓解期患者 WT1表达均为阴性 ;且 WT1阳性患者完全缓解率 ( CR)低于表达阴性者 (分别为 65 %和 88% ,P<0 .0 5 )。此结果说明 WT1在白血病患者中高表达 ,可作为检测白血病微小残留病的标记基因 ,WT1的阳性表达者化疗后 CR率低 ,且其与白血病的病程发展可能有关 ,WT1与 m dr1无明显相关性。

白血病细胞系WT1的表达及反义核苷酸对其的抑制作用

目的:探讨RT-PCR方法测定白血病细胞系WT1基因的表达以及WT1反义寡核苷酸对白血病细胞系增殖的抑制作用。方法:应用RT-PCR方法测定K562、HL-60、TF-1及U937 4株白血病细胞系WT1基因的表达,然后应用针对WT1翻译起始位点的反义寡核苷酸(WT1 ASO)处理K562细胞系、U937细胞系,采用锥虫蓝拒染法确定白血病细胞的增殖。结果:K562、HL-60及TF-1 3株白血病细胞系均高度表达WT1,而U937细胞系未测到WT1。WT1 ASO能够抑制WT1表达阳性的K562细胞的生长,对WT1表达阴性的U937则无抑制作用;而WT1有义寡核苷酸对K562细胞系、U937细胞系均无抑制作用。结论:RT-PCR测定方法可以检测WT1基因在白血病细胞系表达,WT1反义寡核苷酸对白血病细胞有特异的抑制作用。WT1基因在白血病细胞增殖过程中起一定作用。

WT1在子宫内膜腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Wilms肿瘤基因(WT1)在子宫内膜腺癌组织、子宫内膜不典型增生组织以及正常内膜组织中的蛋白和基因表达水平及其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR及2-ΔΔCt法定量分析WT1 m RNA的相对表达量,应用蛋白印迹(Western blot)法检测子宫内膜组织中WT1蛋白的表达。结果:WT1在子宫内膜腺癌组织中的基因和蛋白表达均明显高于子宫内膜不典型组织和正常内膜组织(均P<0.01);WT1 m RNA与子宫内膜腺癌患者年龄、绝经情况、临床分期、淋巴结浸润情况、雌激素受体(ER)和体质量指数(BMI)无显著相关性,与病理分级、肌层浸润情况和孕激素受体(PR)相关(P<0.05);WT1蛋白的表达与患者年龄、绝经情况、临床分期、肌层浸润、ER、PR和BMI无显著相关性,与病理分级、淋巴结转移情况相关(P<0.05)。结论:子宫内膜腺癌中存在WT1 m RNA和蛋白表达水平上调,可能与子宫内膜腺癌的发生和进展有关。

白血病患者WT1基因的表达及其临床意义

目的：探讨ＷＴ１基因在白血病细胞中的表达及其临床意义。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定Ｋ５６２、ＨＬ－６０、ＴＦ－１及Ｕ９３７四株白血病细胞系，４５例白血病患者，１５名正常人外周血及１０例非血液病患者正常骨髓细胞ＷＴ１基因的表达。结果：Ｋ５６２、ＨＬ－６０及ＴＦ－１三株白血病细胞系均高度表达ＷＴ１，而Ｕ９３７细胞系未测到ＷＴ１。急性髓系白血病（ＡＭＬ）２５例中２１例、急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）１１例中８例、慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）急性变者２例、慢性及加速期ＣＭＬ患者７例中１例ＷＴ１表达阳性。１５名正常人外周血及１０例非血液病患者正常骨髓细胞ＷＴ１基因表达阴性。结论：ＷＴ１基因在大多数急性白血病中表达，与白血病的病程发展可能有关，可作为检测白血病微量残留病的特异性标记。