敲低WTAP表达抑制脑胶质瘤干细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨敲低Wilms肿瘤抑制因子(WTAP)表达对脑胶质瘤干细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 从手术切除胶质瘤标本中提取胶质瘤干细胞(GSC),应用lipofectamine2000转染WTAP shRNA质粒敲低WTAP表达,以shRNA为阴性对照;PCR检测WTAP mRNA水平分析敲低效率;MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法检测细胞AKT磷酸化水平。结果 从胶质瘤标本中成功提取GSC,其SOX2表达显著降低(P<0.001),而α-SMA和PDGFRb的表达上调(P<0.001)。与阴性对照组相比,WTAP敲低组GSC细胞WTAP mRNA水平明显降低(P<0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05),细胞AKT的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论 敲低WTAP表达可抑制GSC的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制AKT磷酸化有关。

WTAP通过调控SIRT1诱导小胶质细胞M1型极化的研究

目的探讨Wilms肿瘤抑制因子1相关蛋白(Wilms’tumor 1-associating protein,WTAP)在小胶质细胞活化调控中的作用及其可能的分子机制。方法用100 ng/mL IFNγ联合1μg/mL LPS诱导HMC3小胶质细胞M1极化作为实验组,以未处理的细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中促炎细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和N6-甲基腺苷(m6A)相关基因的表达,在HMC3小胶质细胞中转染RNAi慢病毒敲低WTAP,使用实时荧光定量PCR和Western blot检测敲低效率,Western blot检测敲低HMC3小胶质细胞WTAP后促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表达,Western blot检测敲低WTAP后HMC3小胶质细胞沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating-type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)、COP1、USP18、EP4、促炎转录因子和部分炎症相关通路受体的表达,使用SIRT1激动剂SRT1720和SIRT1抑制剂EX527分别处理空载病毒组和敲低WTAP组HMC3细胞后,Western blot检测c/EBPβ的表达。结果与空白对照组比较,100 ng/mL IFNγ联合1μg/mL LPS诱导的HMC3细胞IL-6、IL-1β、TNF-α表达上调(P<0.05)。M1极化的HMC3小胶质细胞中WTAP高表达(P<0.05)。敲低WTAP后,HMC3细胞促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达降低(P<0.05),SIRT1表达升高(P<0.05),且促炎转录因子c/EBPβ表达降低(P<0.05)。SIRT1激动剂SRT1720使空载病毒组相对高表达的c/EBPβ降低(P<0.01)。SIRT1抑制剂EX527使敲低WTAP的HMC3细胞相对低表达的c/EBPβ升高(P<0.05)。结论WTAP促进HMC3小胶质细胞M1极化,其作用机制可能与通过调控SIRT1表达进而影响c/EBPβ信号通路有关。

WT1异构体与白血病发生 发展及预后的关系

WT1基因作为肿瘤抑制基因参与Wilms瘤的发生。然而．大量研究显示WT1基因作为一种重要的转录调控因子。参与许多肿瘤特别是白血病的发生．其通过两种选择性剪接编码产生四种主要异构体，不同异构体的功能及相互之间的比例与白血病的发生、发展及预后之间的关系逐渐引起人们的关注，本文就此进行综述。