人WASH468和WASH465蛋白质特性辨析

目的探讨两种较为公认但序列不同的Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(Wiskott-Aldrich syndrome protein and SCAR homolog,WASH)的差异。方法使用免疫荧光、免疫共沉淀和激光微辐射等实验分析两种WASH在定位模式、与FAM21或Ku蛋白的相互作用、向DNA损伤位点募集速率和蛋白质稳定性方面的差异;比较多种生物中的WASH蛋白质序列和检测多种在生物和医学研究中常用的细胞中的WASH编码序列,分析两种人WASH序列的普遍性和保守性。结果两种WASH展现出类似的内体(endosome)定位模式。WASH468表现出与FAM21更强的相互作用,并且WASH468展现出更强的稳定性。WASH465表现出与Ku蛋白更强的相互作用,并且WASH465展现出向DNA损伤位点更强的募集。多种生物中的WASH序列与人WASH468序列的一致性明显高于WASH465,并且多种在生物和医学研究中常用的细胞中的WASH氨基酸序列均与WASH468一致。结论WASH468和WASH465的生物学特性存在差异,WASH468序列的普遍性和保守性明显高于WASH465,因此WASH468是更保守的人WASH序列。

WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.