Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族成员3对非小细胞肺癌侵袭转移的影响及机制研究

目的:探究Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族成员3(WASF3-AS1)对非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭转移的影响及机制。方法:选取26例临床不同病理分期NSCLC患者的癌组织和癌旁组织,以及NSCLC细胞系NCI-H1975细胞和正常肺支气管上皮细胞系HBE细胞为研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测上述临床组织和细胞系中WASF3-AS1、赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、E-钙黏蛋白(E-ca)、N-钙黏蛋白(N-ca)的表达。采用CCK-8实验检测细胞增殖。采用划痕实验检测细胞迁移能力。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。采用Western blot检测LSD1、HDAC6、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)、E-ca和N-ca的表达。结果:与对照组比较,在NSCLC组织和细胞中,WASF3-AS1、LSD1、HDAC6、PTEN和E-ca低表达,AKT和N-ca高表达(均P<0.05);WASF3-AS1过表达能够促进LSD1和HDAC6并抑制PTEN/AKT信号,进而抑制NCI-H1975细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化(均P<0.05)。结论:ASF3-AS1可能通过招募LSD1和HDAC6到靶基因PTEN启动子区发挥抑制NSCLC细胞侵袭转移作用。

ABI家族成员3结合蛋白在血管紧张素Ⅱ诱导内皮祖细胞功能障碍中的作用及机制研究

目的探讨ABI家族成员3结合蛋白(ABI family member 3-binding protein,ABI3BP)在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导内皮祖细胞功能障碍中的作用及机制。方法为探讨ABI3BP在AngⅡ诱导内皮祖细胞功能障碍中的作用,将细胞分为4组,sh-NC组[转染阴性对照短发夹RNA(LV-scramble-shRNA)+磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)]、sh-ABI3BP组[转染ABI3BP shRNA(LV-ABI3BP-shRNA)+PBS]、sh-NC+AngⅡ组(LV-scramble-shRNA+AngⅡ)和sh-ABI3BP+AngⅡ组(LV-ABI3BP-shRNA+AngⅡ)。采用Transwell实验检测细胞迁移能力,黏附实验检测细胞黏附能力,Matrigel检测细胞成管能力,原位末端标记法检测细胞凋亡。Western blot检测整合素β1-黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)-P53信号通路变化情况。结果与sh-NC组比较,sh-NC+AngⅡ组迁移细胞数量、黏附细胞数量、小管形成数量显著降低,细胞凋亡率、整合素β1、磷酸化FAK(p-FAK)/FAK及P53蛋白表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与sh-NC+AngⅡ组比较,sh-ABI3BP+AngⅡ组迁移细胞数量[(88.67±8.33)个vs(62.33±7.37)个]、黏附细胞数量[(104.33±6.03)个vs(68.33±10.05)个]、小管形成数量[(36.33±3.21)个vs(19.33±3.06)个]显著增高,细胞凋亡率、整合素β1、p-FAK/FAK及P53蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AngⅡ可上调ABI3BP表达,敲低ABI3BP基因表达可改善AngⅡ诱导的内皮祖细胞功能障碍,其机制可能与抑制整合素β1-FAK-P53信号通路有关。

普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员3在相关疾病中的研究进展

普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员3(pleckstrin homology-like domain family A member 3,PHLDA3)广泛存在于人体器官中。研究表明,PHLDA3在恶性肿瘤、糖尿病、心血管疾病和器官损伤等疾病的发生、发展中发挥作用。本文对PHLDA3在上述相关疾病中的研究现状进行综述。

钙黏蛋白家族成员3及11号染色体开放阅读框30基因多态性与支气管哮喘病儿易感性及糖皮质激素疗效的研究

目的探讨钙黏蛋白家族成员3(CDHR3)及11号染色体开放阅读框30(C11orf30,EMSY)基因多态性与支气管哮喘病儿易感性及糖皮质激素疗效。方法前瞻性选取2020年5月至2021年10月于泰州市第二人民医院就诊的支气管哮喘病儿132例作为易感组。均接受糖皮质激素吸入治疗,并根据疗效分为疗效良好组和疗效不良组。选取同期体检的48例儿童作为对照组,采用倾向性匹配方法对易感组和对照组性别、年龄等基线资料进行匹配;采用PCR检测CDHR3及EMSY基因的单核苷酸多态性,计算其基因型频率和等位基因频率,基因位点的多态性与儿童支气管哮喘易感风险间的关系采用多因素logistic回归分析。对比疗效良好组和疗效不良组不同基因型分布。结果易感组和对照组经倾向性评分匹配后有36组配对成功(每组36例),匹配后基线资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。匹配后易感组和对照组CDHR3基因rs6967330位点、EMSY基因rs12278256位点基因型频率及A等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示:EMSY基因rs12278256位点AA基因型[OR=9.91,95%CI:(1.02,96.65)]、CDHR3基因rs6967330位点AA基因型[OR=10.09,95%CI:(1.08,94.02)]是支气管哮喘易感的危险因素(均P<0.05)。治疗12周后,24例(66.67%)为疗效良好组,其余12例(33.33%)归为疗效不佳组,两组CDHR3基因rs6967330位点基因型分布对比差异无统计学意义(P>0.05);两组EMSY基因rs12278256位点基因型分布对比差异有统计学意义(P<0.05),其中疗效良好组AA基因型分布频率[37.50%(9/24)]明显高于疗效不良组[0(0/12)](P<0.05)。结论CDHR3基因rs3847076位点以及EMSY基因rs12278256位点与儿童支气管哮喘易感有关,EMSY基因rs12278256位点与糖皮质激素治疗疗效相关。

Sin3A基因变异致Witteveen-Kolk综合征遗传学分析

目的 探讨开关不敏感3转录调节因子家族成员A(Sin3A)基因变异导致的Witteveen-Kolk综合征临床表型和遗传学特点。方法 收集1例发育迟缓患儿的临床资料,对患儿及其父母进行全外显子基因测序,采用Sanger测序验证可疑变异,并进行家系分析。结合文献分析Witteveen-Kolk综合征的临床特征和基因变异特点。结果 Witteveen-Kolk综合征患儿临床表现主要为轻中度智力障碍或发育迟缓、特殊面容(长脸、前额突出、鼻梁凹陷、长人中等)、身材矮小。颅脑磁共振成像(MRI)显示不同程度的脑畸形。全外显子基因测序结果显示,患儿Sin3A基因存在移码变异c.803dupC(p.Leu269Thrfs*37)(杂合)。Sanger测序证实存在变异位点,患儿父母该位点均为正常基因型。gnomAD等对照人群数据库未收录该变异位点,根据美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)/美国分子病理学学会(AMP)指南归类为“致病性”变异。结论 Sin3A基因变异可导致Witteveen-Kolk综合征。基因检测可明确生长发育迟缓伴特殊面容患儿的病因。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3炎症小体的活化调节与牙周疾病的关系

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员(NLRP)3炎症小体是一种位于细胞质内的多蛋白质复合体,由其核心成分感知病原体和宿主危险信号后组装而成,通过激活半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1致促炎因子白细胞介素(IL)-1β成熟与分泌参与免疫炎症反应。牙周病是由宿主和微生物因素相互作用导致的局部炎症反应,而IL-1β又是牙周炎发病的关键因素之一。IL-1β的成熟和分泌与NLRP3炎症小体密切相关,且牙周致病菌可调节该炎症小体的表达及活化,因此NLRP3炎症小体对牙周疾病的发生发展和治疗具有重要意义。本文就NLRP3炎症小体的生物学功能、活化机制及其在牙周病学领域的研究进展作一综述。

脓毒症患者血清NLRC3、ECM1表达与急性呼吸窘迫综合征的相关性研究

目的探讨脓毒症患者血清NOD样受体家族含CARD结构域蛋白3(NLRC3)、细胞外基质蛋白1(ECM1)表达与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的相关性。方法选取脓毒症患者133例纳入脓毒症组,并选取同时间段体检健康者80例纳入对照组。根据是否并发ARDS分为ARDS组(52例)和非ARDS组(81例),采用酶联免疫吸附法检测血清NLRC3、ECM1表达。通过多因素Logistic回归分析筛选脓毒症患者并发ARDS的因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NLRC3、ECM1表达对脓毒症患者并发ARDS的预测价值。结果与对照组比较,脓毒症组血清NLRC3表达降低,ECM1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。133例脓毒症患者ARDS发生率为39.10%(52/133)。与非ARDS组比较,ARDS组血清NLRC3表达降低,ECM1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症患者并发ARDS的独立危险因素为序贯器官衰竭评估评分增加、血乳酸升高、ECM1升高,独立保护因素为NLRC3升高(P<0.05)。血清NLRC3、ECM1表达联合预测脓毒症患者并发ARDS的曲线下面积为0.887,大于血清NLRC3、ECM1表达单独预测的0.811、0.792(P<0.05)。结论脓毒症患者血清NLRC3表达降低和ECM1表达升高与并发ARDS密切相关。血清NLRC3、ECM1表达联用对脓毒症患者并发ARDS有较高的预测价值。

驱动蛋白家族成员20A对结直肠癌恶性增殖和化疗耐受的影响

目的:探讨驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)对结直肠癌(CRC)恶性行为和化疗耐受的影响及其机制。方法:12例CRC及配对正常肠黏膜组织样本获自南方医科大学南方医院病理科。免疫组化、Western blot和RT-qPCR分析CRC组织和癌旁组织中KIF20A表达水平。KIF20A短发夹RNA(sh-KIF20A)转染或KIF20A过表达慢病毒(LV-KIF20A)感染CRC细胞。将RKO或LOVO细胞分为MOCK组(未转染的RKO或LOVO细胞)、LV-NC组(对照慢病毒感染RKO或LOVO细胞)和LV-KIF20A组(LV-KIF20A感染RKO或LOVO细胞);将HCT-116细胞分为MOCK组(未转染的HCT-116细胞)、sh-NC组(对照shRNA转染HCT-116细胞)和sh-KIF20A组(sh-KIF20A转染HCT-116细胞)。CCK-8和集落形成实验检测细胞活力和集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达。免疫组化检测化疗敏感的CRC组织和化疗不敏感CRC组织中KIF20A和p-STAT3蛋白水平。将LV-NC或LV-KIF20A感染的RKO细胞接种于BALB/c裸鼠右侧皮下(每组5只),检测KIF20A对肿瘤体内生长的影响。结果:KIF20A在CRC组织及细胞中显著上调(P<0.05)。敲减KIF20A抑制CRC细胞的活力和集落形成能力,而过表达KIF20A则促进CRC细胞活力和集落形成能力。在5-氟尿嘧啶处理下,敲减KIF20A促进cleaved caspase-3和Bax表达,抑制Bcl-2表达,促进细胞凋亡;而过表达KIF20A会抑制cleaved caspase-3和Bax表达,促进Bcl-2表达,抑制细胞凋亡。机制研究表明,过表达KIF20A可上调p-JAK2和p-STAT3水平并激活JAK2/STAT3通路,KIF20A沉默可下调p-JAK2和p-STAT3水平。沉默STAT3可逆转由KIF20A过表达引起的细胞增殖能力提高和凋亡减少。与化疗敏感的CRC组织相比,KIF20A和pSTAT3在化疗不敏感的CRC组织中表达水平更高。体内实验表明,KIF20A过表达促进CRC肿瘤生长(P<0.05)。结论:KIF20A通过激活JAK2/STAT3信号通路调节CRC的恶性增殖及化疗耐受。

微RNA-196a-1-3p靶向Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系RBE细胞增殖的关键微RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为2020年1月至2022年1月。磷酸盐缓冲液(PBS)处理为对照组,TGF-β处理为TGF-β组,TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组RBE细胞的增殖水平。miRNA高通量测序检测三组RBE细胞的miRNA调控变化,并进行miRNA模拟物过表达筛选鉴定受TGF-β调控的影响RBE细胞增殖水平的关键miRNA。miRNA数据库(miRDB)在线分析miRNA的潜在底物,并通过小干扰RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组,TGF-β组RBE细胞的增殖水平上升(1.62±0.07比2.35±0.09,P<0.05),抗体组RBE细胞的增殖水平下降(1.62±0.07比1.11±0.08,P<0.05)。过表达微RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。敲低Ras响应元件结合蛋白(RREB1)时,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。过表达miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1的信使RNA(mRNA)和蛋白水平下降(P<0.05)。敲低miR-196a-1-3p后,RBE细胞中RREB1与SMAD家族蛋白3(SMAD3)的相互作用增加。敲低SMAD3后,RBE细胞的增殖水平下降(P<0.05)。与仅敲低SMAD3相比,敲低SMAD3的同时过表达RREB1的RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低SMAD3和miR-196a-1-3p的RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论TGF-β能够通过miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进RBE细胞增殖;miR-196a-1-3p和RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。

驱动蛋白家族成员11作为一个新的caspase-1靶点嵌合到caspase-1依赖性的细胞死亡

目的：探讨驱动蛋白家族成员（KIF）11降解在诱导细胞死亡中的作用。方法：用基因克隆技术构建不同显性负KIF11（ΔKIF11-T）表达质粒,通过脂质体转染将质粒导入细胞中,使其在细胞中表达出目的蛋白。用溴化乙锭染色法检查细胞死亡,用免疫细胞化学法染色G2/M期标志物磷酸化的组蛋白H3（p H3）和细胞凋亡标志物激活的caspase-3,通过蛋白质免疫印迹杂交法（Western blot）检测KIF11剪切产物。结果：成功构建不同ΔKIF11-T表达质粒,转入细胞48 h后,引起的细胞死亡是对照组的2-3倍,且没有使细胞中的p H3增加,caspase-3虽然在转染了ΔKIF11-T的细胞中被激活数目比对照质粒p CIG中的多,但有激活的caspase-3的细胞占死亡细胞的比例很小。氨基酸序列分析显示,KIF11有2个caspase-1酶切位点,Western blot检测到40 ku的KIF11剪切产物。结论：通过在细胞中表达ΔKIF11-T诱导的死亡不一定涉及细胞周期的抑制也并非主要依靠caspase-3相关机制。

溶质载体家族6成员1通过调节PI3K/Akt信号通路磷酸化促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨溶质载体家族6成员1(SLC6A1)对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及分子机制。方法下载并综合分析数据集GSE125989和GSE100534,筛选差异基因;通过STRING数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建差异基因的蛋白相互作用网络,并筛选hub基因;通过Ualcan和GEPIA数据库检测hub基因SLC6A1在乳腺癌中的表达及其对预后的影响;转染SLC6A1-siRNA干扰乳腺癌细胞MDA-MB-231中SLC6A1的表达;细胞划痕实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的变化;基因集富集分析和Western blotting检测SLC6A1在乳腺癌中发挥作用的机制;采用SC79激活Akt通路并检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果共筛选出92个乳腺癌原位癌与转移瘤的差异基因,并确定Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、SLC6A1等20个hub基因;SLC6A1在乳腺癌组织中高表达(P<0.001),且与患者预后相关(P=0.01);SLC6A1表达被干扰后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05);SLC6A1表达降低可抑制PI3K/Akt信号通路的磷酸化(P<0.05);激活PI3K/Akt通路后SLC6A1-siRNA对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用消失(P<0.05)。结论SLC6A1通过调节PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌的侵袭和转移。

基于生物信息学筛查CLEC3B蛋白及其在脓毒症诊断中的作用

目的:研究正常人与脓毒症患者血清差异表达蛋白中C-型凝集素域家族3成员B(CLEC3B)蛋白,探讨目标CLEC3B蛋白作为脓毒症分子标志物的可能性。方法:收集10名健康志愿者(健康组)和18例脓毒症患者(脓毒症组)外周血,利用数据独立采集法对外周血清蛋白数据进行采集,数据上传至i DEP在线平台分析脓毒症患者外周血中差异表达蛋白。并对这些差异蛋白进行生物信息学分析,筛选出脓毒症关键蛋白。酶联免疫吸附法(ELISA)验证并绘制关键蛋白受试者工作特征(ROC)曲线。结果:蛋白质组学分析筛选出138个差异表达蛋白(DEPs),其中34个蛋白显著下调,104个蛋白显著上调。DEPs主要富集在细胞过程、生物调节、生物过程调节、参与绑定、催化活化、分子功能监管、免疫系统、信号转导等。DEPs构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)筛选出感兴趣的关键蛋白CLEC3B。ELISA实验表明脓毒症组患者CLEC3B蛋白浓度(297.73±22.00)ng/ml显著低于健康组(452.42±191.72)ng/ml,差异具有统计学意义(t=13.13,P=0.000)。CLEC3B蛋白的ROC曲线下面积为0.998,灵敏度为97.73%,特异度为100.0%。结论:CLEC3B蛋白在脓毒症组中显著降低,其灵敏度高,特异度高,可以作为脓毒症潜在的生物学诊断标志物。临床试验注册号中国临床试验注册中心,ChiCTR1900021261。

溶质转运蛋白SLC3A2与肿瘤的关系

溶质转运蛋白是细胞内数量最多的一类转运蛋白,能够转运包括核酸、氨基酸、糖类、离子、矿物质、药物等物质,是调节和控制细胞内外物质转运的重要通道。越来越多的证据表明溶质转运蛋白与肿瘤密切相关,近年来研究发现其家族成员溶质转运蛋白家族3成员2(Solute Carrier family 3 member 2,SLC3A2)在包括肝癌、肾癌、黑色素瘤等多种肿瘤中表达量增高,并且参与肿瘤细胞增殖、迁移、黏附等生物学行为的调节。本文就近年来关于SLC3A2的研究进展加以总结和概述。

C型凝集素9家族A成员的研究进展

C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树突状细胞抗原3阳性DC(BDCA3^+DC)表面。在表型和功能方面,人的同时表达CLEC9A和BDCA3(CLEC9A^+BDCA3^+)的DC与小鼠的CD8α^+DC具有相似性。CLEC9A能够与坏死或受损细胞的纤维状肌动蛋白结合,经细胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构启动细胞内信号的转导。CLEC9A能介导内吞作用,参与交叉提呈抗原等作用,在抗病毒感染、肿瘤预防与治疗和疫苗的研究中具有潜在的应用前景。本文阐述了CLEC9A分子的研究进展。

血清FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平在冠心病合并高尿酸血症患者中的意义

目的探讨冠心病合并高尿酸血症(HUA)患者叉头转录因子O亚家族成员3a(FOXO3a)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水平变化的意义。方法选取河南科技大学第一附属医院2021年1月至2022年8月收治的156例冠心病患者为研究对象,根据尿酸水平分为HUA组(62例)和UA正常组(94例)。比较两组一般临床资料及FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平,分析FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平与临床资料中有统计学差异指标及UA水平相关性,采用logistic回归分析影响冠心病合并HUA的危险因素,以受试者工作特征(ROC)曲线分析FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平联合检测对冠心病合并HUA的诊断价值。结果HUA组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于UA正常组(P<0.05);HUA组FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平高于UA正常组(P<0.05);相关性分析发现,FOXO3a、NLRP3、sICAM-1水平与TC、TG、LDL-C、UA水平均呈正相关(P<0.05);logistic回归分析发现,TC(>5.04 mmol·L^(-1))、TG(>1.88 mmol·L^(-1))、LDL-C(>2.53 mmol·L^(-1))、FOXO3a(>4.65μg·L^(-1))、sICAM-1(>195.73μg·L^(-1))、NLRP3(>1322.12 ng·L^(-1))水平是冠心病患者合并HUA的危险因素(P<0.05);ROC分析发现,FOXO3a、sICAM-1、NLRP3水平联合诊断冠心病合并HUA的曲线下面积(AUC)为0.811,敏感度、特异度分别为95.16%、67.02%,优于各指标单一指标诊断,具有较高诊断效能(P<0.05)。结论FOXO3a、NLRP3、sICAM-1参与冠心病合并HUA发生过程,且在临床诊断冠心病合并HUA方面具有较高效能。

miR-127靶向驱动蛋白KIF3B调控肺鳞癌紫杉醇药物敏感性的研究

目的探讨microRNA-127(miR-127)通过靶向调控驱动蛋白Kinesin家族成员3B(KIF3B)增强肺鳞癌细胞对紫杉醇(PTX)敏感性的作用机制研究。方法通过实时荧光定量PCR法和Western blot法检测人肺鳞癌细胞系NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-127和KIF3B蛋白表达量。采用PTX长期浓度梯度递增法体外建立SK-MES-1/PTX耐药细胞株,分为空白组、阴性组、miR-127 mimics组和miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B组。TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因测定分析miR-127对KIF3B可能的靶向调控关系。采用MTT法和流式细胞术法检测各组细胞对紫杉醇的敏感性。结果与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,人肺鳞癌细胞系NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1中miR-127表达量降低,KIF3B蛋白表达量升高(P<0.05)。体外成功建立SK-MES-1/PTX耐药细胞株,与SK-MES-1细胞相比,SK-MES-1/PTX细胞miR-127表达量降低,KIF3B蛋白表达量升高(P<0.05)。经TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-127存在与KIF3B基因靶向结合的互补序列。经不同浓度PTX作用后,miR-127 mimics组SK-MES-1/PTX细胞IC 50为(115.35±10.94)nmol/L,100 nmol/L PTX作用48 h的凋亡率为(33.69%±5.48%),均高于空白组(P<0.05);而miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B组SK-MES-1/PTX细胞IC 50为(220.47±15.86)nmol/L,100 nmol/L PTX作用48 h的凋亡率为(15.72%±2.67%),则较miR-127 mimics组显著降低(P<0.05)。结论肺鳞癌SK-MES-1/PTX耐药细胞中miR-127表达量降低,同时KIF3B蛋白表达量升高。上调miR-127表达可通过抑制驱动蛋白KIF3B转录提高SK-MES-1/PTX耐药细胞对PTX的敏感性。

糖尿病肾脏病肾精亏虚证中尿ERdj3和Nephrin表达研究

目的探究糖尿病肾脏病(DKD)患者肾小球足细胞是否存在内质网应激,分析患者尿液中内质网定位Dna J家族成员3(ERdj3)和足细胞保护标志蛋白(Nephrin)与中医证型、蛋白尿和肾功能的相关性。方法以2020年9月—2023年6月北京中医药大学东直门医院东城区、通州院区诊治且基线匹配的56例2型糖尿病(T2DM组)和45例糖尿病肾脏病(DKD组)患者为研究对象,其中DKD组患者再分为DKD肾精亏虚组和DKD非肾精亏虚组。比较T2DM组和DKD组、DKD非肾精亏虚组和DKD肾精亏虚组间ERdj3、Nephrin水平;分析DKD组患者ERdj3、Nephrin水平与中医肾精亏虚证积分、兼夹实证证素积分、24h尿蛋白定量、血肌酐(SCr)、估算肾小球滤过率(eGFR)的相关性。结果DKD组患者尿ERdj3、Nephrin水平均明显高于T2DM组(P均<0.05);DKD肾精亏虚组患者尿ERdj3、Nephrin水平均明显高于DKD非肾精亏虚组(P均<0.05)。尿ERdj3水平与DKD精亏证、气滞证、血瘀证、痰浊证积分和24 h尿蛋白定量均呈正相关(P均<0.05),尿Nephrin水平与DKD精亏证、水湿证、血瘀证积分和24 h尿蛋白定量均呈正相关(P均<0.05)。结论DKD患者存在尿ERdj3、Nephrin高表达,且二者表达水平均与精亏证积分呈正相关,有望为寻找DKD肾精亏虚证及相关兼夹实证可能的分子标记物提供客观依据。

雄黄主要成分As_(2)S_(2)通过“ANP32A-INHAT-H3乙酰化”轴抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移的表观遗传调控机制

目的探究雄黄主要成分二硫化二砷(As_(2)S_(2))对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)的作用及表观遗传调控机制。方法采用CCK-8、平板克隆形成和细胞划痕实验探究As_(2)S_(2)对人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及TNBC细胞增殖和迁移的影响;4D-label free定量蛋白质组学分析挖掘As_(2)S_(2)抗TNBC的潜在干预靶点酸性核磷蛋白家族成员32A(acidic nuclear phosphoprotein family member 32A,ANP32A);慢病毒感染法构建ANP32A过表达敲低细胞株,探究潜在靶点ANP32A对As_(2)S_(2)抗TNBC作用的影响;蛋白质免疫共沉淀和Western blot实验探究As_(2)S_(2)是否通过ANP32A调控TNBC细胞H3乙酰化。结果As_(2)S_(2)对人正常乳腺上皮细胞MCF-10A影响甚微,但显著抑制TNBC细胞增殖和迁移,且呈剂量依赖性;4D-lable free定量蛋白质组学分析结果显示,促癌因子ANP32A被As_(2)S_(2)显著下调,且ANP32A表达影响As_(2)S_(2)在TNBC中的抗增殖和迁移效果。As_(2)S_(2)能下调ANP32A的蛋白水平,抑制乙酰转移酶抑制剂复合物亚基的招募,增加H3乙酰化水平。结论As_(2)S_(2)通过下调ANP32A蛋白调控TNBC细胞中H3乙酰化,抑制TNBC细胞增殖和迁移。