柳树丛枝病感病植株内源激素含量变化研究

为探究植原体诱发的柳树丛枝病病株内源激素含量的变化,为柳树丛枝病的致病机理及防治提供理论依据。本研究以垂柳和旱柳为试验材料,采用LC-MS/MS法检测丛枝病病株和健株叶片中四大类13种植物激素的含量变化情况。结果表明,两种柳树病株与健株相比,ABA和CTK类激素DZ、6-BA显著增加,生长素类激素NAA、IPA和GA类激素GA-3、GA-4、GA-7显著减少。柳树被植原体侵染后其内源激素含量剧烈变化,从而导致柳树出现丛枝、腋芽丛生等症状。

甘肃省柳树丛枝病中瘿螨的发生规律调查研究

柳树是西北园林的主要绿化树种之一,在栽培过程中极易受栽培条件和自然环境因素的影响而遭受病虫害侵袭。近年来,柳树丛枝病在甘肃省发生并蔓延,且发生量呈上升趋势,严重影响甘肃省的景观生态。柳树丛枝病发生的瘿瘤中存在大量瘿螨,为明确瘿螨与柳树丛枝病之间的关系,2020-2021年,调查了甘肃省柳树丛枝病主要发生地的瘿螨种群动态,并对各地瘿螨进行了形态学鉴定。结果表明,柳树丛枝中的瘿螨为张掖瘿螨,隶属瘿螨科,瘿螨属;随着调查地点由西到东的变化,瘿螨种类数量在逐渐递增,其中庆阳市柳树丛枝病瘿瘤中的瘿螨数量最多(平均为529头),酒泉市的瘿螨数量最少(平均为52头);瘿螨数量与柳树丛枝病的发病程度相关;不同地区瘿螨的发生时间不同,酒泉市瘿螨的发生时间最迟,庆阳市发生时间最早;瘿螨的发生期由西至东逐渐延长,其中酒泉市瘿螨的发生期最短(约3个月),庆阳市瘿螨的发生期最长(约5个月)。研究结果可为快速防治柳树丛枝病的发生及蔓延提供一定的理论依据。

间接免疫荧光显微术检测泡桐丛枝病原MLO的研究

以感染类菌原体ＭＬＯ的泡桐组培苗为病原繁殖材料，采用差速离心和Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心来提纯ＭＬＯ作为免疫抗原制备兔抗血清。抗血清经健康汁液吸收后，作为第一抗体，用异硫代氰酸荧光素ＦＩＦＣ标记的羊抗兔免疫球蛋白作为第二抗体，进行间接免疫荧光显微镜检查染病组织中的ＭＬＯ特异性荧光。经与ＤＡＰＩ染色技术比较，找出了适宜的徒手切片和减少非特异性反应的途径。此技术具有灵敏度高、特异性强和测定简便等特点。适用于ＭＬＯ组织定位、组培苗脱毒效果评估、病原株系鉴定和病害检疫等。

温度处理和茎尖培养结合脱除泡桐丛枝病类菌原体（MLO）

将患有丛枝病的泡桐组培苗进行温度处理，结合茎尖培养用来脱除病原ＭＬＯ。结果表明，在４５℃下，病茎段２４—４８小时内脱水枯死；在４０℃下３周内病苗黄化枯萎；但在３０℃和２５℃处理的茎段萌发新枝条仍表现典型丛枝症状。而在３５℃下处理的茎段，１周后，新生长茎叶外观恢复正常，继续处理至８０天，植株仍能正常生长。组织经ＤＡＰＩ染色后荧光显微镜检查显示出在３５－４０℃下处理的病苗体内ＭＬＯ４周之内的变化和降解情况。分别剪取３５℃下处理２９、３３、５５和８０天的组培苗０．５ｃｍ的茎尖，转入ＭＳ培养基或改良的ＭＳ培养基上，在２５℃下培养，长成的组培苗一直生长正常。荧光显微镜和电镜检察结果均显示病原ＭＬＯ已被脱除。

枣疯病和泡桐丛枝病原植原体分离物的组织培养保藏和嫁接传染研究

分别从河北唐县赞皇大枣、辽宁凌源梨枣和河南濮阳扁核酸3个品种的枣疯病和来自山东、江西和北京的不同无性系的泡桐丛枝病树上采集丛枝枝条作为组织培养材料,获得的枣疯病和泡桐丛枝病组培苗皆表现典型的丛枝症状。其中感染植原体的赞皇大枣组培苗(Ft)和扁核酸组培苗(HPD)在未加任何激素的MS培养基和其它培养基交替继代培养1a以上仍能维持丛枝苗生长;而发病梨枣(LD)除产生丛枝外,还出现叶片黄化和植株矮化、枯梢等衰退症状。泡桐丛枝病植原体可在不同无性系组培苗上通过各种培养基交替和单纯的MS培养基继代培养,并已在实验室内连续保藏达10a,其引致丛枝症状的能力无明显的改变。用枣树Ft染病材料作接穗,以健康冬枣(DJ)和抗病婆枣(W14)砧木进行组培苗间嫁接传病试验,可使部分DJ和W14发病;而嫁接未发病的砧木多数像健苗一样正常生长。用感染山东泡桐丛枝病植原体ZD株系丛枝组培苗为接穗,嫁接健康泡桐无性系组培苗致使无性系MB33、TY2T和C125发病。用植原体16SrDNA通用引物进行PCR,确证了泡桐和枣树发病苗和嫁接发病组培苗体内存在植原体。用DAPI荧光显微镜技术比较组培苗韧皮部筛管中的植原体浓度,结果显示,Ft和嫁接发病冬枣(DJ Ft)筛管中植原体浓度相对较高,但仍低于各泡桐无性系染病丛枝组培苗;

龙眼鬼帚病的研究 Ⅱ.传病途径

龙眼鬼帚病可经种子、接穗、昆虫和菟丝子传播,花粉可能带毒,但不能通过汁液摩擦传染。1985—1989年的多次虫传试验结果证明,荔枝蝽和龙眼角颊木虱均能传播鬼帚病,这一发现为揭示本病在果园内的传播蔓延和确立治虫防病的原则提供有力的证据。种子和接穗均有不同程度带毒,对生产危害很大,不仅可直接引起实生苗和嫁接苗发病,而且还会导致本病随带毒的种子、接穗和苗木的调运而向无病区或新区传开。应实行检疫、培育和种植无病苗以及防治介体昆虫媒等措施,以防止龙眼鬼帚病的扩展蔓延。

橡胶树丛枝病病原的抗血清制备与应用

以感染橡胶树丛枝病病原的长春花为材料，制备得到橡胶丛枝病病原物抽提液，以抽提液为抗原免疫家兔，制备抗血清，经微量沉淀测定，抗血清效价为1：2048。应用橡胶丛枝病抗血清检测橡胶褐皮病，无症苗木检出率达30％～37％；可疑的褐皮病树检出率达85．7％。

云南烟草丛枝症病害研究 V传染途径

在隔离环境中，按植物病毒学的标准程序，测试云南烟草丛枝症病害的传染途径，结果表明：云南烟草丛枝症病害具有广泛的传染途径，可以通过机械传染（嫁接、摩擦）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播．

云南烟草丛枝症病害研究 VI综合防治技术的研究与示范推广

１９９４至１９９８年，在云南烟草丛枝症病害的重病区进行药剂治疗和治虫防病等研究，并进行大面积综合防治技术示范（３１１５ｈｍ２）和推广工作（６４０３２ｈｍ２），结果表明：抗生素类药剂和抗病毒制剂无治疗效果，单纯治虫防病的效果也不理想，采用以网罩隔离育苗培育无毒苗、药剂控制传媒昆虫、淘汰和更换病苗、保健栽培为技术核心的综合防治措施，能够有效地控制病害的发生和流行，防治效果在９５％以上．

云南烟草丛枝症病害研究I田间发病规律

系统地调查云南烟草丛枝症病害的田间自然发病情况和介体发生情况，并实验测定烟草品种的抗病性，结果表明：烟草丛枝症病害在病区常年均有发生，最早发病时间在４月下旬，保山市１９９４，１９９５和１９９７年属一般年份，１９９３，１９９６和１９９８年属流行年份，导致病害流行的主要因素是苗期和移栽初期的两次蚜虫迁飞期高峰，以网罩隔离培育无毒烟苗、避开蚜虫迁飞高峰期移栽并同时施药是最有效的防治方法．目前生产上审定推广的品种全为高感品种，测定３１个烤烟和１４５个晒晾烟品种未发现抗病品种．

泡桐丛枝病发生与叶片酚和氨基酸变化关系研究

通过对不同种泡桐叶片内总酚和氨基酸含量变化的研究 ,发现健康植株叶片的酚含量皆比感病植株叶片内的高 ,其变化水平随植物种类不同而有一定的差异 ;在所分析的台湾泡桐和楸叶泡桐氨基酸中 ,只有胱氨酸和苯丙氨酸表现出随叶片感病程度的加深 ,呈现出的变化趋势相同 ,即胱氨酸的含量随叶片感病程度的加深逐渐增多 ,而苯丙氨酸的含量则逐渐减少。这些变化可能与泡桐丛枝病的发生有某种联系。

泡桐微茎尖培养脱除泡桐丛枝病原（MLO）的研究

以感染丛枝病原（ＭＬＯ）的泡桐组培苗为试材，大量切取长度在０．３ｍｍ～０．５ｍｍ范围内的微茎尖，在ＭＳ和附加０．１ｍｇ／ＬＩＢＡ和１～７ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的培养基上进行脱毒试验。根据外植体培养过程的病状有无．病源ＭＬＯ的ＤＡＰＩ荧光显微镜和电子显微镜检查结果，证明微茎炎培养能够获得脱除泡桐丛枝病原ＭＬＯ的试管苗，其脱毒率在１４．２９～２８．５７％之间。脱毒的两个无性系试管苗经连续继代培养一年以上，其生长性状正常且稳定。试验还显示了微茎炎培养脱毒率受采用的茎尖大小、切割技术、培养基中的激素比例及无性系的不同等因素的影响较大。

云南烟草丛枝症病害研究 II细胞的超微病变

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织，并抽提试验材料的总核酸电泳检测，结果表明：病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，切片中未观察到病毒粒子，薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体（ｐｌａｍａｌｅｍｍａｓｏｍｅ）和双层膜泡囊（ｄｏｕｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｖｅｓｉｃｌｅｓ）．质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成，直径约１０００～２０００ｎｍ，结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体．双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊，直径约１００～２００ｎｍ，结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｖｅｓｉｃｌｅｓ）和植原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ），但因其广泛分布于寄主细胞中，不能认为是植原体．文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征，初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害，发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征，此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量ＲＮＡ可能有密切关系．

柿树带化和刺槐丛枝的PCR检测

根据植物菌原体１６ＳｒＲＮＡ基因序列，合成一对寡核苷酸引物，用ＳＤＳＣＴＡＢ改进法直接提取田间发病的柿树带化病、刺槐丛枝病树和健康树皮层的ＤＮＡ，用ＰＣＲ方法成功地从病树ＤＮＡ模板中扩增出约１．１７ｋｂ的特异产物，经酶切进一步证实为植物菌原体１６ＳｒＤＮＡ．此项研究表明用特异合成的引物Ｆ１６／Ｒ１６，经ＰＣＲ扩增可以快速灵敏地检测植物菌原体．

龙眼鬼帚病的研究 Ⅲ．病毒病原的确认

应用５００、１５００单位人体注射用的盐酸四环素和青霉素Ｇ钾浸渍处理龙眼鬼帚病苗，均无抑制病状表现，表明本病不是由ＭＬＯ和ＢＬＯ引起的；电镜观察仅在病叶组织筛管细胞内见到成束分布在细胞质内的线状病毒粒体；通过Ａ蛋白。免疫电镜检测，亦可在龙眼鬼帚病介体昆虫荔枝蝽（ＴｅｓｓａｒａｔｏｍａｐａｐｉｌｌｏｓａＤｒｕｒｙ）、龙眼角颊木虱（ＣａｒｎｅｇｅｎａｐｓｙｌｌａｓｉｎｉｃａＹａｎｇｅｔＬｉ）唾液腺内捕获到与病叶组织相同的病毒粒体，从而进一步肯定本病病原的病毒性质。

植物丛枝症病害病毒病原研究概况

对引起植物丛枝病害病毒的的分类地位、生物学特性、抗原特性、电镜观察和基因组成作了综合论述。

云南烟草丛枝症病害研究 I病害的症状学及其病程

以云南烟草丛枝症病株为毒源，通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株，观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．研究表明：云南烟草丛枝症病害的病程可分为４个阶段：潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期，烟株从感染到表现丛枝要经过约１个月；蚜虫接种后约１周，在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑，继而产生强烈的过敏反应，即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑，叶片上布满坏死斑纹，有典型的环纹和蚀纹，严重的烟株叶片破裂，细脉坏死；随后进入缩顶期，烟株生长缓慢，叶间距明显缩短，顶部几乎成为一个平面，叶色稍黄，大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢，萎缩成为僵苗，不表现丛枝症状，也不会开花结实；感染约４周后，摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生，生长速度加快，几天后便表现为典型的黄化丛枝症状，叶黄化且变圆，能够开花结实．其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，初步认为是１种未见记载的新病害，建议称之为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．文中附病程症状图２版．

云南烟草丛枝症病害研究 IV建立标准毒株

以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养，连续培育３代，以第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株，提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳．结果表明：第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症，并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存，成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株．

长春花感染橡胶丛枝病原后几项生理参数的变化

长春花（Ｖｉｎｃａｒｏｓｃａ）感染橡胶丛枝病原后，叶片的生理参数发生变化：（１）蛋白质、氨基酸、叶绿素和类胡萝卜素含量下降；（２）光合速率下降、呼吸速率上升；（３）脯氨酸含量下降。纤维素酶活性上升；（４）过氧化物酶活性下降。同工酶谱发生变化；（５）相对透性增加；（６）蛋白质凝胶电泳谱带发生变化，其中染色最深的一个主要谱带，推测是催化ＣＯ＿２固定的二磷酸核酮糖羧化酶（ＲｕＢｐｃａｓｅ）蛋白带，随病情加重而明显减弱。

注射传播泡桐丛枝病类菌原体的初步研究

以泡桐丛枝病类菌原体的敏感指示植物长春花苗为材料,用叶柄注射法注入感病泡桐叶汁液进行接种试验,结果表明,有1/4供试植株感病,其症状与泡桐丛枝病相一致,将感病植株叶脉切片镜检,发现有类菌原体,其形态、大小及结构,均与泡桐丛枝病类菌原体相同。为该病病原的传播及回接提供了一条简便的途径。