流体切应力对成骨细胞Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响

背景:力学刺激对Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路对成骨细胞的分化,增殖和凋亡有重要作用。Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响是近年来研究的热点。目的:探讨流体切应力对Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响在促进骨细胞骨形成和修复中的作用。方法:应用计算机检索CNKI期刊全文数据库和PubMed数据库(1990-01/2009-12)与流体切应力对成骨细胞Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路影响有关的文章,纳入43篇符合标准的文献进行综述。结果与结论:力学负荷刺激Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路可提高LRP5G171V鼠骨细胞骨形成敏感性,导致骨量增多,密度增大。体内和体外力学实验都支持Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路是力学刺激的正常反应通路,Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路在力学刺激作用下能提高成骨或骨细胞的成骨敏感性。

研究揭示Wnt/β-连锁蛋白信号传导控制FOXC2表达的机制

淋巴管系统通过将问质液返回血液循环来调节体液稳态，这对身体的正常运作至关重要。由淋巴管的缺陷引起的淋巴水肿，目前尚无法治愈。淋巴管内皮细胞（LECs）是整个淋巴管系统的基石。LEC起源于胚胎静脉的同质细胞群，并逐步发生变化成为淋巴毛细血管、瓣膜等。

川芎嗪调控Wnt/β-连环蛋白信号通路对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨川芎嗪调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路对冠心病(CHD)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:选择成年雄性SD大鼠50只,分为对照组、模型组、川芎嗪低、中、高剂量组,各10只。采用高脂饲料喂养加脂肪乳剂灌胃建立CHD大鼠模型,对照组和模型组大鼠尾静脉注射等体积生理盐水,川芎嗪低、中、高剂量腹腔注射川芎嗪,各组均连续治疗3周。干预后检测各组大鼠心功能和血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,采用HE染色观察心肌组织结构,TUNEL检测心肌细胞凋亡情况,RT-qPCR、Western blot法检测心肌组织Wnt3a、β-cateninmRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠心功能低于对照组和川芎嗪低、中、高剂量组(均P<0.05)。模型组大鼠血清LDH、CK、CK-MB水平高于对照组和川芎嗪低、中、高剂量组(均P<0.05)。对照组心肌细胞大小均等,心肌纤维无肿胀、排列紧密,模型组心肌纤维呈现明显肿胀、断裂,细胞排列无规则,并有大量炎症细胞浸润,川芎嗪低、中、高剂量组心肌损伤逐渐改善,细胞水肿变性减少,仅少量炎性细胞浸润。川芎嗪高剂量组心肌组织中Wnt3a、β-cateninmRNA和蛋白表达低于低、中剂量组(均P<0.05)。结论:川芎嗪能改善大鼠心肌细胞的凋亡,减轻细胞损伤,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达有关。

松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响

目的探究松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将48只7周龄雄性ApoE-/-小鼠采用随机数字表法分为6组,每组8只:分别为模型组,松果菊苷(ECH)12.5、25、50 mg/kg组,辛伐他汀片(Sta)组和对照组,依据不同分组建模及给药。观察小鼠主动脉组织形态学变化,检测小鼠血清中生化指标水平,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉组织β-连环蛋白(β-catenin)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测小鼠主动脉组织β-catenin、Wnt3a、LDL受体相关蛋白5(LRP5)及骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平,采用免疫组化法检测小鼠主动脉组织LRP5蛋白表达水平。结果ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉中膜较模型组明显变薄,弹力纤维排列整齐,斑块明显缩小。ECH 25、50 mg/kg组和Sta组TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组和Sta组HDL-C水平均高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型组小鼠主动脉β-cateninmRNA表达水平高于对照组,ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组β-cateninmRNA表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠模型组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平高于对照组,ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠主动脉LRP5蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组LRP5蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论ECH可以有效改善小鼠动脉粥样硬化血管钙化的发生与发展,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

氯化两面针碱通过Wnt/mTOR信号通路缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低

【目的】探究氯化两面针碱(Nitidine chloride,NitC)对热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的影响,为实际生产中缓解热应激对水牛乳品质的负面影响提供理论依据。【方法】记录非热应激季节和热应激季节牛舍温湿度指数(Temperature-humidity index,THI),检测水牛呼吸频率和直肠温度以判断水牛是否处于热应激状态;采集奶样进行乳成分分析以探究热应激对水牛奶β-酪蛋白含量的影响;以水牛乳腺上皮细胞为研究对象,经40.5℃处理24 h建立细胞热应激模型,使用LiCl和LGK974分别激活和抑制Wnt通路,检测水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的表达水平,探究氯化两面针碱缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的作用机制。【结果】与非热应激季节相比,热应激季节牛舍THI升高并超过水牛热应激阈值,水牛呼吸频率和直肠温度显著升高(P<0.05,下同),水牛奶β-酪蛋白含量显著降低;细胞试验结果表明,40.5℃处理24 h能显著降低水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量;而氯化两面针碱处理能有效缓解热应激对水牛乳腺上皮细胞的影响,显著提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量。【结论】热应激降低了水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的相对表达量,氯化两面针碱则通过Wnt/mTOR信号通路提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量,以缓解热应激造成的水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低。

针刺通过调节Wnt/β-联蛋白信号通路治疗脑梗死的研究进展

Wnt信号通路对干细胞的增殖分化有决定性作用,针刺在治疗缺血性脑卒中的研究越来越充分、确切、多样,Wnt/β-联蛋白信号通路是针刺改善脑卒中损伤的重要机制之一。本文总结了针刺通过该信号通路改善梗死后损伤的现有研究,阐明了相关机制和靶点,为脑卒中的治疗提供了新的思路。

X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和GIST细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1重组质粒染进GIST-882细胞,以构建高表达XAF1的GIST-882细胞。GIST-882细胞分为对照组、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与Beclin1蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1及其活化形式cleaved-Caspase-1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果:与RGM-1细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1组、对照组(P<0.05)。与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05)。结论:XAF1在GIST细胞中表达下降,提高XAF1表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用。

沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)中CDC20 mRNA及蛋白表达水平,选择RL95-2细胞用于后续实验。将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中,分为对照组、sh-NC组(感染阴性对照慢病毒)、sh-CDC20组(感染CDC20 shRNA干扰慢病毒)、sh-NC+SM04690组(感染阴性对照慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48h)和sh-CDC20+SM04690组(感染CDC20shRNA干扰慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) SM04690干预48 h)。RT-qPCR法和Western blotting法检测不同细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率,流式细胞术检测各组G2/M期细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平。结果:与T-HESC细胞比较,KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),其中RL95-2细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平最高。与sh-NC组比较,sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与sh-CDC20组比较,sh-CDC20+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:EC细胞中CDC20呈高表达,沉默CDC20可能通过调控Wnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G2/M期阻滞,抑制细胞增殖。

利多卡因调控Wnt/β-连环蛋白轴对胃癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨利多卡因调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)轴对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法将对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901接种于96孔板中,用不同浓度利多卡因(0、10、50、100、150、200μmol/L)处理24 h,比较不同浓度下的细胞活力。将对数生长期SGC-7901细胞分为对照组(Control组)、顺铂组(Cisplatin组)、利多卡因低浓度组(Lido-L组)、利多卡因中浓度组(Lido-M组)、利多卡因高浓度组(Lido-H组)、利多卡因高浓度+Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001组(Lido-H+SKL2001组),通过5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测、Transwell法和划痕愈合实验分别比较各组细胞增殖、侵袭和迁移能力,使用TUNEL试剂盒检测各组细胞凋亡情况,并检测各组细胞凋亡、上皮-间质转化、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达情况。结果与0μmol/L利多卡因相比,50、100、150、200μmol/L利多卡因处理的SGC-7901细胞活力均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Control组相比,Cisplatin组EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率和波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、B细胞淋巴瘤相关蛋白-2(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、散乱蛋白2(DVL2)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)表达降低,细胞凋亡率升高,E-钙黏蛋白(E-cadherin)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、裂解半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase-3)表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Cisplatin组相比,Lido-L组、Lido-M组、Lido-H组EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率和Vimentin、N-cadherin、Bcl-2、Cyclin Dl、DVL2、Wnt3a、β-catenin表达逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,E-cadherin、Bax、Cleaved-caspase-3表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Lido-H组相比,Lido-H+SKL2001组EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率和Vimentin、N-cadherin、Bcl-2、Cyclin Dl、DVL2、Wnt3a、β-catenin表达升高,细胞凋亡率和E-cadherin、Bax、Cleaved-caspase-3表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利多卡因可能通过抑制Wnt/β-catenin轴的激活而增强胃癌细胞化疗敏感性。

薄型子宫内膜不孕症患者Wnt/β-链蛋白信号通路相关基因水平及临床意义

目的分析薄型子宫内膜不孕症患者Wnt/β-链蛋白信号通路相关基因水平及临床意义。方法选取2020年4月至2021年4月在本院接受治疗的46例薄型子宫内膜不孕症患者作为观察组。同期选择非薄型子宫内膜造成不孕症患者46例作为对照组。采用腹部超声观察两组患者子宫内膜厚度及形态。采用多普勒超声检查子宫螺旋动脉收缩期峰值流速(PSV)、搏动指数(PI)与阻力指数(RI)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平和促卵泡成熟激素(FSH)。Western Blot检测内膜组织血管内皮生成分子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)、E-钙粘蛋白、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-链蛋白水平。结果观察组子宫内膜厚度明显小于对照组(P<0.05);观察组A型子宫内膜比例明显低于对照组,C型子宫内膜比例明显高于对照组(P<0.05)。观察组患者血清E2、P水平明显低于对照组,FSH水平明显高于对照组(P<0.05)。观察组患者PSV明显低于对照组,PI和RI明显高于对照组(P<0.05)。观察组VEGF、LIF蛋白水平明显低于对照组,E-钙粘蛋白、MMP-9、β-链蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。结论薄型子宫内膜不孕症患者子宫内膜容受性较差,血流量较差,Wnt/β-链蛋白可能参与调节患者子宫内膜的生长发育。

Wnt/β-连环蛋白信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展

缺血再灌注损伤是发生在许多器官和疾病中的病理过程,主要包括两个阶段,一是缺血期缺氧诱导的细胞损伤,二是血流恢复后所引起的一系列级联反应。缺血再灌注损伤可加重细胞和组织损伤。Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在细胞增殖、分化、凋亡过程中起重要作用,是一个高度保守的信号级联通路。越来越多的研究发现,激活Wnt/β-catenin信号通路可减轻缺血再灌注损伤。本文就Wnt/β-catenin信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展进行综述。

KRT6A介导Wnt/β-catenin信号通路调节上皮-间质转化促进非小细胞肺癌A549细胞抗辐射

目的 探讨KRT6A对非小细胞肺癌A549细胞抗辐射的促进作用,并阐明其作用机制。方法 诱导并建立抗辐射A549(A549-RR)细胞,通过CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术验证细胞构建成功。Western blotting检测A549和A549-RR细胞中KRT6A表达情况。将A549-RR细胞分为敲减对照组(sh-NC组)和敲减KRT6A组(sh-KRT6A组),Western blotting检测KRT6A、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug)以及β-catenin的表达;采用CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡情况。将A549-RR细胞分为sh-NC组、sh-KRT6A组、敲减KRT6A和过表达对照(shKRT6A+ov-NC组)以及敲减KRT6A和过表达β-catenin (sh-KRT6A+ov-β-catenin组),Western blotting检测β-catenin以及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug的表达;采用CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡情况。结果 成功建立了A549-RR细胞,A549-RR细胞中KRT6A表达上调。敲减KRT6A降低A549-RR细胞增殖活性和克隆形成能力,增加细胞凋亡率,上调E-cadherin蛋白表达并下调N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和β-catenin蛋白表达;过表达β-catenin可逆转此作用。结论 KRT6A在A549-RR细胞中表达上调,敲减KRT6A可降低A549-RR细胞的抗辐射能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路诱导的EMT有关。

基于Wnt/β-catenin信号通路治疗阿尔茨海默病的中医药研究进展

阿尔茨海默病(AD)是导致痴呆最主要的原因,其病理机制较复杂,治疗难度大,是全球范围内重大公共健康问题。发病机制复杂,迄今尚未完全阐明其发病机制,目前认为其主要病理特征包括细胞凋亡、氧化应激、神经炎症、自噬功能障碍、线粒体功能障碍、tau蛋白过度磷酸化和淀粉样蛋白斑块沉积等,临床表现为记忆力减退、认知障碍以及人格改变等,给患者本身、家庭、社会造成严重影响。目前临床上西药常用乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗AD,但存在临床疗效欠佳、价高高昂等诸多缺点。研究显示,中医药治疗AD具有临床疗效显著、不良反应少、价格低廉等诸多优势,越来越多的研究者使用中医药治疗AD,取得一定进展。Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路属于保守信号通路,对生命发生发展起重要作用。研究证明,Wnt/β-catenin信号通路对治疗AD有重要作用。通过大量查阅文献,对Wnt/β-catenin信号通路概况及其在AD中的作用,中药单体及单味中药提取物和中药复方通过减少Aβ沉积、神经元损伤及神经毒性等方式来治疗AD的研究现状进行综述,以期为中医药治疗AD提供新的方法和思路。

组织Wnt/β-catenin通路蛋白表达水平与卵巢子宫内膜异位症组织恶变的关系分析

目的探讨组织Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达水平与卵巢子宫内膜异位症(OE)组织恶变的关系。方法选取2016年10月至2018年10月在郑州人民医院就诊的46例子宫内膜异位症相关性卵巢癌(EAOC,即OE恶变)患者为EAOC组,另取同期入院的34例OE患者为OE组,采用免疫组化法检测两组患者组织中β-catenin和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,分析组织中β-catenin和MMP-9表达水平与临床病理特征的关系以及与预后的关系。结果EAOC组β-catenin阳性表达率为63.04%,高于OE组的23.53%,MMP-9阳性表达率为69.57%,高于OE组的44.12%(P<0.05);β-catenin的阳性表达率在不同分化程度、淋巴结转移、临床分期、铂敏感性的EAOC组织中比较,差异具有统计学意义(P<0.05);MMP-9的阳性表达率在不同分化程度、淋巴结转移、临床分期EAOC组织中比较,差异具有统计学意义(P<0.05);β-catenin阴、阳性患者3年生存率分别是68.97%(20/29)、35.29%(6/17),差异有统计学意义(χ^(2)=4.945,P=0.026),MMP-9阴、阳性患者3年生存率分别是68.75%(22/32)、28.57%(4/14),差异有统计学意义(χ^(2)=6.398,P=0.011)。结论Wnt/β-catenin信号通路可能是OE恶变的重要途径,其中,β-catenin和MMP-9均与OE恶变密切相关,这两个指标的阳性表达可以提示EAOC患者预后不良。

内异止痛方诊治子宫内膜异位症及Wnt/β-联蛋白信号通路调控研究

目的:明确内异止痛方对子宫内膜异位症(EMs)的诊疗效果及客观评价其作用机制。方法:采用自体移植法构建EMs模型,将40只造模成功的EMs大鼠按随机数字表法分为4组,另设假手术组8只。并分别给予不同浓度的中药985.3 mg/(kg·d)和245.8 mg/(kg·d)灌胃,西药采用达那唑7.2 mg/(kg·d)灌胃,模型组及假手术组给予生理盐水2 mL/d灌胃,用药4周后观察大鼠异位病灶生长情况,并测量治疗前后体积大小;采用酶联免疫吸附试验法及蛋白质印迹法对各指标进行检测;结果:各观察组异位病灶体积明显缩小(P<0.01),模型组无明显变化(P>0.05);与模型组比较,在血清中内异止痛方组可明显降低基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、升高组织基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)及E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的表达水平,且中药高剂量组优于中药低剂量组(P<0.05);在组织匀浆中内异止痛方组能降低MMP-9和血管内皮生长因子(VEGF)、β-联蛋白(β-catenin)、升高E-cadherin的表达水平,且中药高剂量组优于低剂量组(P<0.05)。结论:内异止痛方具有抑制异位内膜生长、缩小异位病灶体积作用,同时通过调控Wnt/β-catenin信号通路的关键调节蛋白和下游靶基因使通路处于关闭状态,阻断EMs的发生及进展。

血清胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1及dickkopfWNT信号通路抑制剂1对食管癌的诊断价值

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)及dickkopf WNT信号通路抑制剂1(DKK1)对食管癌的诊断价值。方法选取62例食管癌患者作为食管癌组,59例健康体检者作为对照组。对比两组受试者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,对比不同分期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,分析TK1、CYFRA21-1、DKK1单独及联合检测对食管癌的诊断价值。结果食管癌组患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TK1+CYFRA21-1+DKK1联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度分别为88.50%、79.10%,曲线下面积为0.779(95%CI:0.695~0.864),均高于三者单独检测。结论TK1、CYFRA21-1、DKK1联合检测有利于提高食管癌的诊断效能,防止误诊漏诊,三者对其病情评估具有一定参考价值。

苓桂术甘汤对心梗后慢性心衰模型大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt1/β-catenin信号通路蛋白表达的影响

目的:观察苓桂术甘汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用和可能机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法复制心肌梗死后慢性心衰大鼠模型;造模24 h后,连续干预4 w。采用小动物彩色多普勒超声成像系统检测大鼠LVIDd、LVIDs、LVEF、LVFS;HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnT及心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ水平;Western Blot检测大鼠心肌组织Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著升高,LVEF、LVFS水平显著降低(P<0.01),心肌组织出现明显的心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及间质纤维化等病理变化,血清CK-MB、cTnT和心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ含量及CollagenⅠ/CollagenⅢ比值显著升高,心肌组织细胞质GSK-3β蛋白表达显著降低,心肌组织α-SMA蛋白及细胞质Wnt1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白和细胞核β-catenin表达显著升高,心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤干预4 w后,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:苓桂术甘汤能减轻心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌损伤并抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠心功能,其作用机制与其抑制心肌组织Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

基于Wnt/β-catenin信号通路探索芪蛭通络方对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用机制

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨芪蛭通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠予高糖高脂饲料及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作DKD模型,取50只造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(每日14 mg/kg)和芪蛭通络方低、中、高剂量组(每日1.215 g/kg、2.430 g/kg、4.860 g/kg),每组10只。同时取10只SD大鼠予普通饲料和腹腔注射柠檬酸缓冲液,作为正常组。造模成功后,各给药组每日予相应药物灌胃,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,各组均连续灌胃8周。收集处死前1 d各组大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);处死前尾静脉取血,测血糖(GLU);末次给药后5 h,各组大鼠予异氟烷吸入麻醉,腹主动脉取血,分离血清测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);取双肾,采用苏木素-伊红(HE)染色法、马松(Masson)染色法观察各组大鼠肾脏组织病理变化;分别采用免疫组化(IHC)法、蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组大鼠肾组织Wnt1、β-catenin、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达。结果:模型组大鼠GLU、Scr、BUN、24 h-UTP水平均明显高于正常组(P<0.01),各给药组大鼠上述指标均明显低于模型组(P<0.01),芪蛭通络方高剂量组上述指标均明显低于厄贝沙坦组(P<0.01),芪蛭通络方对上述指标的改善作用表现出一定的剂量依赖性。病理图片显示,模型组大鼠肾小球结构遭到破坏,炎性改变明显,肾小管扩张,肾间质纤维化明显,肾组织蓝色胶原分泌增多且伴病理损伤;各给药组大鼠肾组织病理改变均有不同程度的改善,以芪蛭通络方高剂量组改善最为显著。免疫组化法及蛋白免疫印迹法结果显示,模型组大鼠Wnt1、β-catenin、CTGF、GSK-3β蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化法结果显示,芪蛭通络方高剂量组上述蛋白表达均明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01);蛋白免疫印迹法结果显示,芪蛭通络方高剂量组Wnt1、GSK-3β蛋白表达明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01),β-catenin、CTGF蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P>0.05)。芪蛭通络方对上述蛋白的表达表现出一定的剂量依赖性。结论:芪蛭通络方可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,在一定程度上延缓肾间质纤维化,从而起到保护肾功能的作用。

Wnt/β联蛋白信号通路在纤维化疾病中的研究进展

纤维化疾病涉及肝脏、肺、皮肤、肾脏、心脏等器官,以器官组织内纤维结缔组织增多、实质细胞减少为主要病理改变,持续进展可致器官结构破坏和功能减退,甚至导致器官衰竭,严重威胁人类生命健康。近年认为,Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路可能在多种组织纤维化进展过程中发挥调控作用,因此调控Wnt/β-catenin信号通路可能有助于减缓纤维化疾病进展或逆转纤维化进程,但目前其具体作用机制尚不清楚。未来,深入研究Wnt/β-catenin信号通路在纤维化疾病中的作用机制及其调控靶点将为纤维化疾病的临床治疗提供新策略。

坚骨胶囊调控Wnt/β-联蛋白信号通路对骨质疏松症模型大鼠的作用及机制

目的 基于Wnt/β-联蛋白(β-catenin)信号通路探讨坚骨胶囊对骨质疏松症模型大鼠的作用及机制。方法 将50只Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,坚骨胶囊高、中、低剂量组[2 184,1 092,546 mg/(kg·d)],各10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均灌胃100 mg/kg维甲酸复制骨质疏松症模型,每天1次,连续30 d。坚骨胶囊高、中、低剂量组大鼠灌胃相应剂量药物,正常对照组和模型对照组大鼠均灌胃纯化水8 mL/kg,每天1次,连续30 d。检测各组大鼠血清的生化指标Ca2+、Mg2+、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)水平;利用Micro-CT仪记录骨微结构,并检测大鼠股骨微结构指标[远心端感兴趣区结构模型指数(SMI)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面与骨体积比(BS/BV)、骨小梁数量(TbN)、骨小梁厚度(TbTh)、骨小梁分离度(TbSp)];采用免疫印迹(Western blot)法检测股骨组织中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、β-catenin、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)、淋巴增强因子(LEF)的蛋白表达水平。结果 MicroCT仪检测结果显示,坚骨胶囊高剂量组大鼠骨小梁结构最完整,与正常对照组股骨远心端骨小梁多呈板状、致密均匀接近。与模型对照组比较,坚骨胶囊中、高剂量组大鼠血清中MDA,GSH-Px,SOD水平均明显升高(P <0.05),ALP水平均明显降低(P <0.05);坚骨胶囊高剂量组大鼠股骨微结构中BMD,BV/TV,BS/BV,TbN,TbTh均明显升高,SMI和TbSp均明显降低(P <0.05);坚骨胶囊高剂量组大鼠股骨组织中LRP5,β-catenin,LEF,CyclinD1蛋白表达均明显上调(P <0.05)。结论 坚骨胶囊能预防维甲酸诱导的大鼠骨质疏松,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路及其基因蛋白表达有关。