WNT信号通路抑制因子-1和β连环蛋白在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨WNT信号通路抑制因子-1(WIF-1)和β连环蛋白(β-catenin)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其与肾癌临床分期、病理分级的相关性。方法选取2010年2月—2015年6月中国医科大学附属盛京医院第二泌尿外科行根治性手术切除的ccRCC患者102例为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测102例肾细胞癌组织及相对应的癌旁正常肾脏组织中WIF-1、β-catenin表达情况。结果 WIF-1在ccRCC组织及正常组织中的表达差异有统计学意义(59.7±19.6 vs.112.2±18.6,t=3.104,P<0.05);β-catenin在ccRCC组织及正常组织中的表达差异亦有统计学意义(157.1±17.2 vs.102.1±18.7,t=4.015,P<0.05)。WIF-1的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=-0.542,P<0.05)、病理分级(r=-0.476,P<0.05)呈负相关;β-catenin的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=0.511,P<0.05)、病理分级(r=0.562,P<0.05)呈正相关.;WIF-1与β-catenin在肾癌中的表达呈负相关(r=-0.425,P<0.01)。结论 WIF-1表达降低和β-catenin表达升高与肾癌的病理分级和临床分期有关,对ccRCC预后评价有一定参考意义,也可为其治疗提供一种可能的靶向治疗途径。

苓桂术甘汤对心梗后慢性心衰模型大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt1/β-catenin信号通路蛋白表达的影响

目的:观察苓桂术甘汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用和可能机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法复制心肌梗死后慢性心衰大鼠模型;造模24 h后,连续干预4 w。采用小动物彩色多普勒超声成像系统检测大鼠LVIDd、LVIDs、LVEF、LVFS;HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnT及心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ水平;Western Blot检测大鼠心肌组织Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著升高,LVEF、LVFS水平显著降低(P<0.01),心肌组织出现明显的心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及间质纤维化等病理变化,血清CK-MB、cTnT和心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ含量及CollagenⅠ/CollagenⅢ比值显著升高,心肌组织细胞质GSK-3β蛋白表达显著降低,心肌组织α-SMA蛋白及细胞质Wnt1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白和细胞核β-catenin表达显著升高,心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤干预4 w后,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:苓桂术甘汤能减轻心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌损伤并抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠心功能,其作用机制与其抑制心肌组织Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变。目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白的影响。方法:将SD大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素1β诱导软骨细胞退变,取第2代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8d后,采用RT-PCR检测2组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达。结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象。说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成β-连环蛋白和Wnt4蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达。

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的:探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2(Frat2)通过Wnt/β连环蛋白(β-catenin)信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法:选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-Time RT-qPCR)法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4μmol·L^-1 Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、c-myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3(pGSK-3β)蛋白表达水平。结果:与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05);空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低(P<0.05),G 0/G 1期细胞百分率升高(P<0.05),S期和G 2/M期细胞百分率降低(P<0.05),PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低(P<0.05),G 0/G 1期细胞百分率升高(P<0.05),S期和G 2/M期细胞百分率降低(P<0.05),PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

沉默牛磺酸上调基因1通过Wnt/CTNNB1信号通路提高胃癌细胞对顺铂和5-氟尿嘧啶的敏感性

目的探讨牛磺酸上调基因1(TUG1)调控胃癌细胞对顺铂(CDDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的作用效果及机制。方法实时定量PCR法检测TUG1在CDDP和5-FU耐药的胃癌组织和细胞系(SGC7901/R)中的表达。应用增强型CCK8法检测细胞的增殖活力,并计算CDDP和5-FU的半抑制浓度(IC50)。双荧光素酶实验检测Wnt/CTNNB1信号通路活性。Western boltting检测CTNNB1蛋白的表达。结果与对照组胃癌组织和细胞系(SGC7901)相比,TUG1在CDDP和5-FU耐药的胃癌组织和细胞系(SGC7901/R)中高表达。TUG1沉默上调了SGC7901/R细胞中CDDP和5-FU的IC50,提高了化疗敏感性。TUG1沉默降低了SGC7901/R细胞中Wnt/CTNNB1信号通路的活性,并抑制了CTNNB1蛋白的表达。CTNNB1过表达激活了SGC7901/R细胞中Wnt/CTNNB1信号通路,逆转了TUG1沉默对CDDP和5-FU化疗敏感性的促进作用。结论TUG1与胃癌的化疗不敏感相关,沉默TUG1通过Wnt/CTNNB1信号通路提高胃癌细胞对CDDP和5-FU的敏感性。

沉默lncRNA ST7-AS1通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的实验研究

目的:探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)致癌性抑制基因7反义RNA1(ST7-AS1)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:肝癌细胞系HCCLM3分成Control组、Vector组、ST7-AS1组、sh-NC组、sh-ST7-AS1组和sh-ST7-AS1+Wnt/β-catenin通路激动剂(SKL2001)组。结果:与Control组比较,ST7-AS1组HCCLM3细胞的吸光度(A570)值及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vemintin)、Wnt1和β-catenin的表达升高,克隆数量和迁移、侵袭数目增多,上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和GSK-3β的表达降低(P<0.05)。Wnt/β-catenin通路激动剂SKL2001可部分逆转沉默ST7-AS1对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭的影响(P<0.05)。结论:沉默ST7-AS1可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

β-连环蛋白与细胞周期蛋白D1在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的观察宫颈鳞癌组织中β-连环蛋白(β-catenin)与细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达,探讨它们在宫颈鳞癌发生、发展过程中的作用。方法应用免疫组织化学法检测宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、正常宫颈组织中β-catenin与cyclinD1的表达特点,结合临床病理资料进行分析。结果 (1)β-catenin在正常宫颈组织(n=8)、CIN(n=20)及宫颈鳞癌(n=42)中的异常表达率分别是0、35.0%及64.3%,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05);β-catenin在宫颈鳞癌不同分级组织中阳性表达分别为Ⅰ级25.0%、Ⅱ级63.6%、Ⅲ级91.7%,不同分级组织中差异有统计学意义(P<0.01)。宫颈鳞癌淋巴结阳性组的β-catenin异位阳性表达率与淋巴结阴性组间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)cyclinD1在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌组织中的阳性表达率则分别是0、30.0%和61.9%,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌不同分级组织中cyclinD1的表达分别为Ⅰ级37.5%、Ⅱ级54.6%、Ⅲ级91.7%,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05),cyclinD1在宫颈鳞癌淋巴结阳性组与阴性组的阳性表达率分别为70.0%和59.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)β-catenin异常表达与cyclinD1的阳性表达呈正相关(r=0.885,P<0.05)。结论 (1)宫颈鳞癌中存在β-catenin和cyclinD1的异常表达,随着正常宫颈组织向CIN再向宫颈鳞癌的进展,β-catenin及cyclinD1的异常表达呈递增趋势且两者存在明显的相关性。提示Wnt/β-catenin信号通路在宫颈鳞癌的发生发展中可能起重要的作用。(2)β-catenin异位表达及cy-clinD1阳性表达均与宫颈鳞癌分化相关,但与淋巴结是否转移无关。

β-连环蛋白与细胞周期素D1在CIN及宫颈鳞癌中的表达

目的通过观察宫颈鳞癌组织中β-连环蛋白(β-catenin)与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,探讨它们在宫颈癌发生、发展过程中的作用。方法应用免疫组织化学法观察宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、正常宫颈组织中β-catenin与cyclin D1的表达特点,结合临床病理资料进行统计学分析。结果 (1)β-catenin在正常宫颈组织(n=8)、宫颈上皮内瘤样病变(n=20)及宫颈鳞癌(n=42)中的异常表达率分别是0、35.0%及64.3%,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05);β-catenin在宫颈鳞癌不同组织分级中异位阳性表达分别为:Ⅰ级25.0%;Ⅱ级63.6%;Ⅲ级91.7%(P<0.01)。在宫颈鳞癌淋巴结阳性组,β-catenin异位阳性表达率高于淋巴结阴性组(P>0.05)。(2)cyclin D1在三组中的阳性表达率则分别是0、30.0%和61.9%,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05);cyclin D1的过度表达也与宫颈癌组织分级相关,Ⅰ级:37.5%;Ⅱ级:54.6%;Ⅲ:91.7%,三组间相比差异有统计学意义(P<0.05),cyclin D1在宫颈鳞癌淋巴结阳性组与阴性组的阳性表达率分别为70.0%和59.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)β-catenin异常表达与cyclin D1的阳性表达呈正相关(r=7.885)。结论 (1)宫颈癌中存在β-catenin和cyclin D1的异常表达,随着正常宫颈组织→CIN→宫颈鳞癌的进展,β-catenin及cyclin D1的异常表达呈递增趋势且两者存在明显的相关性。提示Wnt/β-catenin信号通路在宫颈鳞癌的发生发展中可能起重要的作用。(2)β-catenin异位表达及cyclin D1阳性表达均与宫颈鳞癌分化相关,但均与淋巴结是否转移无关。

转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路

目的 探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法 以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果 ①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的?

外源性神经生长因子对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节

目的：探讨外源性神经生长因子（NGF）对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节.方法：鼻腔给予小鼠NGF治疗14周,应用免疫组织化学检测小鼠脑内β淀粉样蛋白（Aβ）老年斑的分布,应用免疫印迹检测小鼠脑内糖原合酶激酶3β（GSK3β）、p-GSK3β、β-连环蛋白（β-catenin）和p-β-catenin的表达.结果：Aβ免疫组织化学显色结果显示,与对照组小鼠大脑内的Aβ老年斑相比较,NGF治疗组转基因小鼠大脑内的Aβ老年斑数量减少了30.22％,沉积减少了35.85％,差异有统计学意义.免疫印迹结果显示,外源性NGF减少APP/PS1转基因小鼠脑内GSK3β的表达,增加β-catenin的表达.结论：外源性NGF可能通过抑制GSK3β的活性和增加β-catenin的活性,激活Wnt/β-catenin信号通路,对神经元起保护作用.

通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠Wnt信号通路DKK1、β-catenin表达的影响

目的:观察通痹颗粒对胶原性关节炎(CIA)大鼠Wnt信号通路Dickkopf1(DKK1)和β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法:将40只健康SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组和通痹颗粒组。除空白组外,其余各组用牛Ⅱ型胶原诱导CIA大鼠模型。造模成功后,通痹颗粒组每日予通痹颗粒20g/kg灌胃,阳性药物组每日予雷公藤多苷片2.4mg/kg灌胃,其余组灌胃等量生理盐水,各组均每日灌胃1次,连续用药14d。比较各组大鼠治疗前后关节炎指数、关节肿胀度变化,治疗后滑膜病理学改变和血清DKK1、β-catenin表达情况。结果:治疗前和治疗第7、14天,与空白组大鼠比较,其余各组大鼠关节炎指数和关节肿胀度均显著增加(P<0.01,P<0.05)。治疗第7、14天,各治疗组关节炎指数和关节肿胀度均显著低于本组治疗前和模型组治疗同时期(P<0.05),且治疗第14天时数值低于第7天(P<0.05,P<0.05)。空白组滑膜组织未增厚,滑膜细胞整齐排列,未观察到血管增生和炎症细胞浸润;模型组滑膜组织明显增厚,细胞排列紊乱,血管明显增生,大量炎症细胞浸润;各治疗组滑膜组织略微增厚,细胞排列较整齐,少量炎症细胞浸润,其中阳性药物组观察到血管轻度增生。与空白组比较,其余各组大鼠血清DKK1和β-catenin均显著升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠血清DKK1和β-catenin水平明显降低(P<0.05)。结论:通痹颗粒可以显著改善CIA大鼠关节滑膜的炎症反应,提示通过Wnt/β-catenin信号通路下调DKK1和β-catenin表达,从而防止异常血管增生及滑膜的炎症细胞浸润,可能是通痹颗粒治疗CIA的机制之一。

下调LRH1对骨肉瘤细胞生长和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨下调肝受体类似物1(LRH1)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用RT-qPCR和Western blot分别检测人骨肉瘤细胞U2OS和成骨细胞hFOB1.19中LRH1 mRNA和蛋白表达差异;将体外培养的U2OS细胞分为对照组(Ctrl)、阴性对照(NC)-siRNA组和LRH1-siRNA组,RT-qPCR检测各组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达,MTT、流式细胞术、Transwell小室和划痕实验分别检测各组U2OS细胞增殖活力、细胞周期分布情况、穿膜细胞数和划痕愈合率,Western blot检测各组U2OS细胞中LRH1和Wnt/β连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期素D1(CyclinD1)、c-Myc、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果:与hFOB1.19细胞相比,U2OS细胞中LRH1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05);与NC-siRNA组相比,LRH1-siRNA组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达、细胞增殖活力、S期细胞占比、穿膜细胞数、划痕愈合率和LRH1、β-catenin、CyclinD1、c-Myc、MMP-9蛋白表达明显降低,而G0/G1期细胞占比明显升高(P<0.05);NC-siRNA组和Ctrl组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:骨肉瘤U2OS细胞中LRH1表达上调,下调其表达可通过诱导细胞周期阻滞抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖、减弱U2OS细胞侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

下调S100A2表达对结肠癌细胞增殖、侵袭迁移和Wnt信号通路的影响

目的 探讨S100钙结合蛋白A2(S100A2)在结肠癌增殖和侵袭迁移中的作用及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测S100A2在结肠癌组织和细胞系中的表达情况。选择SW480细胞并分为3组:对照组、siRNA-NC组(阴性对照)和siRNA-S100A2组(下调S100A2表达)。采用MTT、划痕实验和Transwell小室实验探究S100A2在结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移过程中的作用,qPCR和Western blotting检测干扰S100A2对Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。结果 与癌旁组织(1.00±0.05)或正常结肠上皮细胞株NCM460(1.00±0.07)比较,S100A2在结肠癌组织(1.66±0.07)和细胞SW620(1.38±0.10)、HT29(1.62±0.13)、LoVo(1.94±0.14)和SW480(2.03±0.08)中均高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-S100A2组的细胞活力及Wnt1、β-catenin和基质金属蛋白酶7水平低于对照组和siRNA-NC组(P<0.05);siRNA-S100A2组细胞划痕愈合率和穿膜细胞数为(34.94±3.11)%和(115.65±15.24)个,少于siRNA-NC组的(80.66±5.86)%和(358.88±24.60)个及对照组的(78.54±4.61)%和(371.39±18.90)个,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 S100A2促进结肠癌细胞的增殖和迁移侵袭,可能与Wnt1/β-catenin信号轴的激活有关。

转化生长因子-β1通过诱导Wnt/β-连环蛋白信号通路调节肝癌细胞上皮-间充质转化的研究

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝癌细胞对Wnt信号通路的调节作用。方法对肝癌细胞株HepG2细胞使用5、10、20μg/LTGF-β1重组蛋白诱导,48h后细胞计数检测肝癌细胞增殖。蛋白质印迹法(Western blot)方法检测上述各组上皮-间充质转化(EMT)标志蛋白及Wnt通路中相关蛋白表达。对肝癌细胞进行β-连环蛋白(β-catenin)小干扰RNA(siRNA)沉默,及β-cateninsiRNA沉默加TGF-β1重组蛋白诱导,分别检测EMT标志蛋白及Wnt通路中相关蛋白表达,并进行对比分析。实验数据以SPSS18.0软件进行统计分析,实验图片采用ImageJ软件进行灰度分析,目的蛋白相对表达量以目的蛋白/内参蛋白的比值表示。结果TGF-β1可促进肝癌细胞体外增殖,且与TGF-β1处理浓度呈明显相关(5μg/L实验组P<0.01,10μg/L实验组P<0.01,20μg/L实验组P<0.01)。TGF-β1处理组的肝癌细胞上皮细胞标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达下调;间质标志蛋白波形蛋白(Vimentin)和β-catenin表达上调,且与TGF-β1处理浓度呈明显相关(E-cadherin对照组:1.000±0.058;5μg/L实验组:0.937±0.049,P>0.05;10μg/L实验组:0.490±0.046,P<0.01;20μg/L实验组:0.520±0.035,P<0.01。Vimentin对照组:1.000±0.058;5μg/L实验组:1.097±0.042,P>0.05;10μg/L实验组:2.217±0.169,P<0.01;20μg/L实验组:2.467±0.088,P<0.01。β-catenin对照组:1.000±0.115;5μg/L实验组:1.893±0.116,P<0.01;10μg/L实验组:2.327±0.104,P<0.01;20μg/L实验组:2.633±0.078,P<0.01)。β-catenin沉默组上皮标志物E-cadherin的表达上调,间质标志物Vimentin和β-catenin表达下调;而加入TGF-β1可以使β-catenin沉默的肝癌细胞中的E-cadherin的表达降低且Vimentin和β-catenin表达上调(E-cadherin对照组:1.000±0.068;β-cateninsiRNA沉默组:2.420±0.095,P<0.01;β-cateninsiRNA沉默+TGF-β1组:1.187±0.038,P<0.01。Vimentin对照组:1.000±0.113;β-cateninsiRNA沉默组:0.450±0.052,P<0.01;β-cateninsiRNA沉默+TGF-β1组:1.353±0.088,P<0.01。β-catenin对照组:1.000±0.058;β-cateninsiRNA沉默组:0.597±0.038,P<0.01;β-cateninsiRNA沉默+TGF-β1组:0.917±0.033,P<0.01)。结论TGF-β1可促进肝癌细胞体外增殖,且与TGF-β1处理浓度呈明显相关。TGF-β1可诱导肝癌细胞发生EMT样改变,且与TGF-β1处理浓度呈明显相关。TGF-β1可通过Wnt信号通路诱导肝癌细胞发生EMT过程。

基于Wnt1/β-catenin信号通路探讨补阳还五汤含药血清抑制人肺动脉内皮细胞内皮间质转化的机制

目的:探讨Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在补阳还五汤(BYHWT)含药血清干预人肺动脉内皮细胞(HPAECs)内皮间质转化(EndMT)过程中的作用及其相关机制。方法:常法煎煮BYHWT,分别以53.36 g·kg^(-1)·d^(-1) BYHWT和等体积生理盐水灌胃新西兰兔制备含药血清和空白血清。体外培养HPAECs,采用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立EndMT模型。设立空白组(10%空白血清)、模型组(TGF-β1+10%空白血清)、BYHWT低剂量组(TGF-β1+2.5%含药血清+7.5%空白血清)、BYHWT中剂量组(TGF-β1+5%含药血清+5%空白血清)和BYHWT高剂量组(TGF-β1+10%含药血清)5个组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Wnt1、β-catenin和糖原合成激酶-3β(GSK-3β)蛋白的表达。为进一步明确Wnt1/β-catenin信号通路在BYHWT含药血清干预EndMT过程中的机制,构建β-catenin过表达质粒转染至HPAECs,经聚合酶链式反应确认β-catenin过表达后,采用前期研究效果最优的10%含药血清进行干预,另设空白组(10%空白血清)、模型组(TGF-β1+10%空白血清)、BYHWT组(TGF-β1+10%含药血清)、BYHWT+过表达质粒组(TGF-β1+10%含药血清+空白质粒)和BYHWT+β-catenin过表达质粒组(TGF-β1+10%含药血清+β-catenin)5个组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell法共同检测细胞迁移能力,免疫荧光法检测血小板内皮细胞黏附分子(CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与空白组比较,模型组Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著升高(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,BYHWT高剂量组Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著降低(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著升高(P<0.01);BYHWT中剂量组β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著升高(P<0.01);而BYHWT低剂量组差异无统计学意义。与空白组比较,模型组细胞增殖和迁移能力显著增强(P<0.01),CD31和VE-cadherin荧光强度降低,FSP1和α-SMA荧光强度增加。与模型组比较,BYHWT组细胞增殖和迁移能力受到抑制(P<0.01),CD31和VE-cadherin荧光强度增加,FSP1和α-SMA荧光强度降低,而BYHWT+β-catenin过表达质粒组以上指标变化趋势均与模型组一致。同时,与BYHWT+过表达质粒组比较,BYHWT+β-catenin过表达质粒组细胞增殖和迁移能力显著增强(P<0.01),CD31和VE-cadherin荧光强度降低,FSP1和α-SMA荧光强度增加。结论:BYHWT含药血清可以抑制HPAECs发生EndMT,这一过程与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

XAV939对胃癌细胞株MKN-45的增殖及Wnt/β-连环蛋白信号通路的抑制作用

目的 观察XAV939对胃癌细胞株MKN-45增殖及Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路的作用.方法 检测XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测β-catenin和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1） mRNA表达,Western blot法检测Axin 1、β-catenin、磷酸化β-catenin（p-β-catenin）和Cyclin D1的表达.结果 不同浓度的XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞增殖的抑制率分别是22.5％、39.1％、52.5％、62.1％（P＜0.05）;不同浓度的XAV-939处理组的β-catenin、Cyclin D1 mRNA表达下降（分别为0.727±0.031、0.467±0.051、0.353±0.035、0.293±0.031,P ＜0.05;0.690 ±0.161、0.487±0.231、0.360±0.257、0.216±0.197,P ＜0.05）,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达下降而Axin 1和p-β-catenin蛋白表达上升.结论 XAV-939可抑制以胃癌细胞株MKN-45的增殖,机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路.

LEF1-AS1通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨淋巴增强结合因子1反义RNA 1(LEF1-AS1)通过调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测胃癌细胞和正常胃黏膜细胞GES-1中LEF1-AS1的表达情况。BGC-823细胞分为阴性对照组、LEF1-AS1干扰组和LEF1-AS1干扰+Wnt激动剂组。CCK-8法检测细胞活力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;qPCR和Western blot检测Wnt1、β-catenin和Survivin表达。结果LEF1-AS1在胃癌细胞中的相对表达量高于GES-1细胞(P<0.05)。与阴性对照组比较,LEF1-AS1干扰组BGC-823细胞的增殖和迁移侵袭能力均下降(P<0.05)。LEF1-AS1干扰组Wnt1和β-catenin表达水平低于阴性对照组(P<0.05)。LEF1-AS1干扰+Wnt激动剂组BGC-823细胞的增殖和迁移侵袭能力均强于LEF1-AS1干扰组(P<0.05),且β-catenin和Survivin水平较LEF1-AS1干扰组升高(P<0.05)。结论LEF1-AS1沉默通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化来负调控胃癌细胞的生物学行为,该因子有作为胃癌治疗靶点的潜能。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨环黄芪醇对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的作用

目的:本研究旨在探讨环黄芪醇对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及其作用机制。方法:受试动物设正常对照组、模型对照组、环黄芪醇20 mg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+IWR-1(Wnt通路抑制剂)8.2μg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+STF-31(GLUT1抑制剂)5.8 mg/kg组。除正常对照组外,其余大鼠经腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,剪去大鼠背部标记区域的皮肤和皮下组织建立皮肤溃疡模型。大鼠按分组灌胃给药14 d,并在给药第5、10、14 d测定大鼠创面愈合率;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量;HE染色检测创面组织的病理变化;免疫组化法检测创面组织中血管内皮生长因子A(VEGFA)和内皮型一氧化氮合酶(ENOS)的表达情况;细胞划痕法检测环黄芪醇对脐静脉内皮细胞(HUVEC)在LPS诱导的炎症状态下迁移率的影响;Western blot法检测给药第10 d的创面组织和LPS诱导后的HUVEC细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、特异性顶部盘状底板反应蛋白-3(RSPO3)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白的表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药第5、10 d时创面愈合率显著降低(P<0.01),创面组织中ENOS的表达和血清SOD活力明显降低(P<0.05或P<0.01),血清MDA含量明显升高(P<0.05或P<0.01);在给药第10 d时,β-catenin、Cyclin D1和MMP2蛋白的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇20 mg/kg组大鼠在给药第10 d时创面愈合率显著升高(P<0.01),在给药第5、10 d时血清中SOD活力和创面组织中ENOS的蛋白表达显著升高(P<0.01),β-catenin、cyclin D1和MMP2蛋白的表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组细胞的迁移率明显降低(P<0.05或P<0.01),Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇25μg/m L组细胞的迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01),Cyclin D1和MMP9蛋白的表达显著上调(P<0.01)。结论:环黄芪醇能促进糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠的创面愈合,其作用机制涉及Wnt/β-catenin信号通路的激活。

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Wnt3a/β-catenin表达的影响

目的研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Wnt通路相关蛋白Wnt3a、Wnt1诱导的信号通路蛋白1(WISP1)和β-连环蛋白(β-catenin)的调控作用。方法采用盐酸博莱霉素皮下注射法复制系统性硬皮病小鼠模型后,给予受试药乳膏冶疗8周。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠皮肤组织Wnt3a和WISP1的浓度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测小鼠皮肤组织β-catenin mRNA的表达,免疫组织化学法检测小鼠皮肤组织β-catenin蛋白表达。结果刺山柑总生物碱450mg/kg可降低Wnt3a的浓度;450mg/kg和900mg/kg可降低β-catenin mRNA和蛋白表达(P<0.05),对WISP1浓度无影响(P>0.05)。结论刺山柑总生物碱可抑制系统性硬皮病小鼠皮肤组织Wnt3a和β-catenin的异常表达,对系统性硬皮病Wnt/β-catenin通路的过度激活有一定抑制作用。

骨代谢分子信号通路研究进展

骨代谢异常可引起骨质疏松、佩吉特症、骨硬化症、骨折等疾病;其病因复杂,机理不明。骨代谢过程包括骨形成及骨吸收,其具体的分子调节通路不明。现代研究表明,在骨代谢过程中至少存在WNT/β-连环蛋白通路、NFAT通路、胰岛素信号通路、Sema4D-Plexin-B1通路、PI3K-AKT通路及MAPK通路等。通过分子信号通路,可有效促进骨代谢研究,并开发具有治疗骨代谢异常疾病的新药。