蛋白质类医用高分子微生物合成的研究进展

蛋白质类医用高分子是一类重要的功能高分子材料,在生物医学领域有着广泛的应用。随着现代生物技术特别是分子生物学技术的发展,微生物合成医用高分子材料已成为可能。微生物合成除了大规模、低成本的特点外,还可对蛋白质高分子进行分子设计,从而赋予其新的材料性能,以满足不同的需要。该文综述了蛋白质类医用高分子(胶原与明胶、弹性蛋白、丝蛋白)微生物合成的研究进展,指出微生物合成的原理方法及应用现状,并对其发展前景进行了展望。

蓝萼甲素在体外对DNA,RNA和蛋白质生物合成的影响

本实验采用3H—TdR、2H—udR、3H—Leucine在体外掺入S180腹水癌细胞的放射性同位素示踪法,探讨蓝萼甲素对DNA、RNA和蛋白质合成的抑制作用,抑制程度呈剂量相关性。对DNA、RNA的抑制发生较早,恢复较快,对蛋白质作用持久、且均为可逆性抑制。蓝萼甲素（glaucocclyxinA）为唇形科,香茶菜属植物蓝萼香茶菜（Isodom glaucocalyx kudo）的一种二萜类成份,经药理实验证明:蓝萼甲素具有细胞毒作用,对艾氏腹水癌有一定抑制作用,体内对S180实体瘤实验抑制率达30.4％（10mg/kg×7d）,

人类肝癌发生过程中cyclinD1和CDK4及p16蛋白的表达

目的研究肝细胞癌(HCC)发生过程中细胞周期调控因子cyclinD1、CDK4和p16蛋白表达及其意义。方法应用免疫组织化学SP染色法检测正常肝组织、慢性肝炎、肝硬化、癌周肝硬化和肝癌组织中cyclinD1、CDK4和p16蛋白表达。对免疫组化结果进行计算机图象定量分析。结果cyclinD1、CDK4和p16蛋白的阳性单位(positive unit,PU)和面数密度(area number density,NA)从慢性肝炎(PU分别为39.4、41.0和33.3;NA分别为236.7、272.7和237.4)、肝硬化(PU分别为40.8、45.2和43.6;NA分别为313.8、354.6和322.9)、癌周肝硬化(PU分别为55.5、59.4和54.4;NA分别为481.9、488.9和432.6)到肝癌(PU分别为59.6、63.7和58.1;NA分别为549.2、587.7和451.3)表达逐渐增强。癌周肝硬化和肝癌组织中cyclinD1、CDK4、p16的表达明显高于慢性肝炎和肝硬化(P值分别为0.034、0.020、0.030、0.007、0.003和0.005),但癌周肝硬化和肝癌组织之间差异无统计学意义,P值分别为0.433、0.535和0.447。慢性肝炎和肝硬化中cy-clinD1、CDK4、p16阳性信号主要定位于胞核,而癌周肝硬化和HCC中主要定位于胞质。p16与HCC的分化程度有关,但未发现cyclinD1、CDK4与肿瘤分化程度之间有相关性。结论cyclin-细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)-细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKIs)调控网络中,相关调控因子的异常可能参与了HCC的发生、发展。cyclinD1、CDK4的过度表达可能是肝癌发生过程中的早期事件。在HCC的发生过程中p16高表达可能是细胞周期正反馈调控的结果,在HCC的发生中可能属于早期事件,而p16表达下降或缺失可能是肝癌发生过程中的晚期事件。

人类pygo1基因的生物信息学分析

目的：对人类pygo1基因编码蛋白质进行结构和功能预测。方法：利用生物信息学方法和工具对PYGO1蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构、亲（疏）水性进行分析。结果：PYGO1蛋白氨基酸残基组成中脯氨酸含量最高，分子式C1943H2937N577O635S18,相对分子质量45，等电点6．38；可能为非跨膜的亲水性蛋白；α-螺旋和无规卷曲为其主要结构元件，含有一个植物同源结构域。结论：人类pygo1基因可能作为转录因子与其他蛋白共同作用调节心脏发育及心脏病的发生过程。

PML蛋白参与三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的分子生物学机制研究

PML蛋白作为一种肿瘤抑制因子,在三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的过程中发挥重要作用。绝大多数APL患者的典型特征是细胞内PML基因和RARα基因发生融合,该融合基因所表达的PML-RARα融合蛋白是APL发病的主要原因。三氧化二砷作为临床治疗APL的一线药物,通过直接作用于PML-RARα融合蛋白的PML部分,诱导相关蛋白多聚化,并招募多种功能蛋白,促进PML核小体重构,使PML-RARα蛋白发生小泛素修饰蛋白(SUMO)化和泛素化,最终经蛋白酶体途径降解,达到治疗APL的目的。PML蛋白发生点突变会导致APL复发及三氧化二砷耐药。本文阐述了PML蛋白的结构和功能、PMLRARα融合蛋白诱导APL发病的机制、PML蛋白参与三氧化二砷治疗APL的分子机制以及PML蛋白发生突变导致APL患者发生三氧化二砷耐药的现象,以期为目前治疗方案的优化及针对耐药患者有效治疗手段的开发提供理论指导。

HSA/IL1ra融合蛋白的纯化及生物学活性研究

目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用。结论:获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性。

从脆性X染色体痴呆症的分子机制展望蛋白合成在学习记忆过程中的功能(英文)

外界环境所激发的学习与记忆是由繁复的分子机制所调控的。关于脆性X染色体综合征蛋白 (FMRP)的研究表明 ,蛋白合成的调节在学习记忆过程中起着重要的作用。脆性X染色体综合征是世界上最常见的遗传性痴呆病。这种疾病起源于FMRP缺失所导致的大脑神经元突触发育障碍 ,从而造成学习记忆能力低下。体外实验结果表明 ,FMRP是蛋白翻译的抑制因子。在大脑神经元中 ,FMRP高度表达 ,并选择性作用于其靶基因的信使核糖核酸 (mRNA) ,从而进一步与执行翻译功能的核糖体结合 ,对其靶基因的蛋白合成起调控作用。近期研究使用基因芯片技术鉴定了小鼠脑中FMRP的靶基因mRNA ,并进一步证实这些mRNA在患者细胞中呈现翻译功能失调。以上研究提示FMRP是影响学习记忆过程中调控蛋白合成的关键因子 。

放射线照射的肺成纤维细胞对人脐带间充质干细胞中经典Wnt/β-catenin通路的影响

目的：体外研究放射线照射后的人肺成纤维细胞（ HLFs ）对人脐带间充质干细胞（HUMSCs）中经典Wnt／β-catenin信号通路的影响。方法：实验细胞分为共培养组和单纯 HUMSCs 组，共培养组为5 Gy X 射线照射后的 HLFs 通过Transwell系统与HUMSCs共培养。细胞培养3d后，蛋白质印迹法检测HUMSCs中GSK-3β、p-GSK-3β、FRAT1和胞核内β-catenin蛋白表达，酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中WISP-1蛋白表达。结果：共培养组HUMSCs 中p-GSK-3β／GSK-3β相对比值（0.15±0.05）和FRAT1表达水平（0.48±0.07）较单纯HUMSCs组（0.55±0.05和1.16±0.13）明显下降，共培养组 HUMSCs 胞核内β-catenin （0.50±0.07）也较单纯HUMSCs组（2.39±0.15）明显下降；共培养组HUMSCs培养上清液中 WISP-1蛋白表达[（602.23±161.47） ng／mL ]较单纯 HUMSCs 组[（977.77±110.56）ng／mL]明显下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论：放射线照射后的HLFs对HUMSCs中经典Wnt／β-catenin通路具有抑制作用。

蛾类性信息素研究进展

蛾类是昆虫性信息素中研究较多的类群,已有565种的性信息素成份被鉴定,其相关研究在害虫监测和防治上得到实际应用的同时,已涉及到生态、生化、遗传等诸多方面,特别是在物种多样性的化学表达及物种的生殖隔离现象的分子水平的表达上,提供了研究的典范。本文将介绍蛾类性信息素的多样性、性信息素化学结构鉴定、微量成分的作用、合成性信息素的利用、性信息素生物合成酶、性信息素生产的调节机制及性信息素的感受机制等方面的研究现状和存在的问题。

大肠癌组织中HSP27和bcl-2及p53蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨热休克蛋白27(heatshockprotein,HSP27)、bcl-2和p53蛋白在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:运用免疫组织化学SP方法检测HSP27、bcl-2和p53在72例大肠癌组织中的表达,并运用多因素COX比例风险模型分析患者的预后。结果:HSP27在大肠癌组织中的阳性率为69·44%(50/72),bcl-2为54·17%(39/72),p53为59·72%(43/72)。HSP27在高分化腺癌组的表达率为84·85%,显著高于低分化组的28·57%,χ2=29·614,P=0·000。bcl-2和p53在高分化腺癌组的表达率也高于低分化腺癌组,χ2=5·771,P=0·016;χ2=4·714,P=0·030。HSP27和bcl-2在大肠癌中的表达具有相关性,r=0·380,P=0·001。COX回归分析提示,HSP27表达与生存期呈负相关。结论:HSP27和bcl-2及p53与大肠癌耐药有关;联合检测对临床制定合理的化疗方案具有指导意义;HSP27可作为判断大肠癌预后的一个独立预测指标。

血浆硫氧还蛋白还原酶在肺癌中表达的初步研究

目的探讨血浆硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)在肺癌中的活性表达及临床意义。方法酶联免疫分析方法检测50例肺癌患者及50例健康体检者血浆中TrxR的活性表达,并作相关分析。结果肺癌患者血浆中TrxR活性高于健康体检者,且差异有统计学意义(P<0.05);肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌患者血浆TrxR活性均值分别为(3.96±5.22)U/mL、(6.31±6.20)U/mL、(6.98±7.04)U/mL,各组间TrxR活性水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TrxR活性表达与肺癌密切相关。TrxR活性表达在肺癌不同组织学分型间相同。

p73和p63蛋白在胰腺癌组织中过表达的意义

目的:探讨p53家族新成员p73和p63蛋白在胰腺癌组织中过表达的意义。方法:应用免疫组化LSAB法检测75例人胰腺癌组织中p73和p63蛋白的过表达。结果:p73和p63蛋白在人胰腺癌中的过表达率分别为46·7%(35/75)和42·7%(32/75),p73蛋白在胰腺囊腺癌中的过表达率88·9%(8/9)明显高于导管腺癌41·8%(23/55),P=0·009,且p73蛋白过表达与胰腺癌淋巴结转移、肿瘤大小、神经侵犯和p53表达呈显著负相关性,P<0·05;在腺鳞癌或腺癌伴鳞状上皮化生中p63蛋白的过表达率(100%,13/13)明显高于导管腺癌(40·0%,22/55),P=0·007,但p63蛋白过表达与胰腺癌临床病理学指标及p53和增殖细胞核抗原(pro-liferatingcellnuclearantigen,PCNA)表达间无明显相关性。结论:p73蛋白低表达可能在胰腺癌发生中起重要作用;p63蛋白过表达与腺鳞癌或腺癌鳞化有关。

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:探讨非降脂剂量的辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子(CTGF)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组),糖尿病组(D组),糖尿病辛伐他汀干预组(DS组)。模型建立后,第6周及第12周时各组处死大鼠10只,称取体重、肾重,测定血糖(Glu)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、肌酐(SCr),留取尿液测定24 h尿白蛋白排泄量(UAE),并用免疫组化方法检测肾间质结缔组织CTGF、α-SMA。结果:6周及12周时各组间SCr、LDL、HDL及TG相比无显著性差异(P>0.05);6周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但与C组相比无显著性差异(P>0.05)。12周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但高于C组(P<0.05)。结论:非降脂剂量的辛伐他汀可能通过抑制CTGF的表达和减少肾间质肌成纤维细胞的数量延缓肾小管间质纤维化进展。

转化生长因子β1和雌激素调节蛋白PS2在乳腺癌中的表达及其对预后的意义

目的研究转化生长因子β1(transform ing grow th factor-β1,TGF-β1)和雌激素诱导蛋白PS2在乳腺癌中的表达及其与转移复发和预后的关系。方法应用TGFβ1及PS2抗体免疫组化法对110例有完整随访资料的乳腺癌进行检测。结果TGFβ1和PS2在110例乳腺癌中阳性率分别为56.4%、44.5%;乳腺癌组织中TGFβ1蛋白的表达与组织学分级(χ2=4.503,P<0.05)、淋巴结转移(χ2=8.959,P<0.01)均相关,而在各组织学类型中表达差异无显著性。PS2表达则与临床病理指标均无显著相关性;乳腺癌中PS2蛋白和TGFβ1蛋白的表达与ER、PR分别呈正相关(P<0.05)和显著负相关(P<0.01);除PS2蛋白,TGFβ1、ER及PR阳性表达组转移和复发的发生率与阴性组存在显著差异(P<0.05);作为预后不良的指标,TGFβ1阴性者平均生存时间为(109.25±34.438)个月,5年生存率为97.9%,明显高于阳性者,PS2则无此差异。将TGFβ1和PS2与年龄、淋巴结转移、组织学分级、组织学类型等预后相关指标进行COX多因素分析,结果显示TGF-β1是相对独立的预后因子。结论与PS2相比,TGFβ1与乳腺癌发生发展的关系更加密切。TGFβ1可以作为预测乳腺癌转移和复发独立的预后指标。

hBMP_7基因转染对兔骨髓间充质干细胞增殖及胶原合成的影响

使用含hBMP7基因的重组逆转录病毒液感染兔骨髓间充质干细胞 (BMSc) ,MTT法检测细胞增殖能力 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,3 H脯氨酸掺入法检测Ⅰ型胶原合成和表达情况。结果显示 ,经hBMP7基因转染的BMSc与空载体转染及未转染的BMSc在细胞增殖、细胞周期表现方面无显著性差异 ,经转染的BMSc合成胶原显著高于空载体转染和未转染者。提示采用逆转录病毒介导转染BMSc后能促进细胞的胶原合成 ,对BMSc增殖和细胞周期无显著影响 。

葡萄糖转运蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨葡萄糖转运蛋白(Glucose transporter,Glut)的两种异构体Glut1、Glut3及缺氧诱导因子-1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)的亚基HIF-1α,在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法:选取34例手术切除非小细胞肺癌(包括癌组织和癌旁组织)和17例肺良性病变标本,用免疫组织化学法测定Glut1、Glut3及HIF-1α在肺组织中的表达;用RT-PCR半定量检测Glut1、Glut3及HIF-1α的mRNA表达;用Western Blot检测Glut1、Glut3及HIF-1α蛋白的表达,并测两者相关性。结果:Glut1、Glut3及HIF-1α在肺癌组织中mRNA相对含量为0.689±0.245、0.506±0.246、0.693±0.248,对应癌旁组织为0.338±0.157、0.482±0.238、0.351±0.184,Glut1和HIF-1α在肺癌组织中显著升高(P<0.001),而Glut3差别无显著性(P>0.05)。Glut1、Glut3、HIF-1α在癌组织中蛋白相对含量为0.582±0.247、0.551±0.251、0.525±0.246,癌旁组织为0.288±0.151、0.436±0.224、0.261±0.135,在肺良性病变中为0.291±0.142、0.402±0.206、0.271±0.176,Glut1和HIF-1α在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织(P<0.001)和肺良性病变组织(P<0.001);而Glut3差别无显著性(P>0.05)。Glut1和HIF-1α在低分化组明显高于中高分化组(P<0.05),期明显高于和期(P<0.05),且HIF-1α的表达与Glut1明显相关(r=0.854,P<0.01)。结论:在非小细胞肺癌中,Glut1和HIF-1α存在高表达,其表达与细胞分化程度、TNM分期密切相关,且Glut1和HIF-1α具有相关性。

重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性

目的 :提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性。方法 :利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA ,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区 (HSA D3)的融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。分别对Klenow酶和Klenow HSA融合蛋白进行纯化 ,并进行活性及稳定性的研究。结果 :发现Klenow HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达。体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性 ,其稳定性明显提高。结论 :融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性 。

肝细胞癌热休克蛋白27,70,90_α的表达意义

目的探讨HSP27,HSP70和HSP90α在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义.方法采用免疫组化技术对44例HCC和癌旁组织中HSP27,HSP70和HSP90α的表达进行检测结果 HCC和癌旁组织中HSP27阳性率分别为18％和30％,HSP70阳性率分别为68％和27％,HSP90α阳性率分别为63％,和23％.HCC中HSP70和HSP90α阳性率明显高于癌旁组织(x_1~2=7.3,x_2~2=7.8,P<0.01.而HSP27阳性率变化不大(X^2=1.6,P>0.05).HSP70和HSP90α在分化较好和分化不良的HCC中的阳性率分别为54％,85％和50％,80％,两者相比差异显著(X_1~2=4.5,X_2~2=4.2,P<0.05),但与癌周淋巴细胞浸润(X_1~2=3.2,X_2~2=1.4,P>0.05)和转移(X_1~2=2.3,X_2~2=2. 7,P>0.05)无关结论 HCC是HSP70和HSP90α高表达肿瘤.HSP70和HSP90α与HCC分化有关,在HCC发生和发展中起重要作用.

非小细胞肺癌组织中Skp2的表达及其与p27^(kip1)和Ki-67蛋白表达的关系

目的:探讨Skp2的表达在非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)发生发展中的作用,及其与p27kip1和Ki67蛋白表达的关系。方法:应用免疫组化SP法检测Skp2、p27kip1和Ki67三种蛋白在60例NSCLC和20例正常支气管黏膜上皮组织中的表达。结果:NSCLC组织中Skp2蛋白表达的阳性率为48.33%(29/60),显著高于正常支气管黏膜上皮组织中的表达,P=0.000。Skp2的表达与肿瘤的组织学类型、肿瘤细胞的分化程度、TNM分期、淋巴结转移和患者吸烟与否显著相关,P值分别为0.038、0.005、0.019、0.010和0.002,但与患者的年龄及性别无关,P值分别为0.833和0.281。NSCLC组织中Skp2表达与p27kip1表达呈显著负相关,P=0.001;而与Ki67表达呈显著正相关,P=0.027。结论:Skp2在NSCLC组织中表达是上调的,可能是通过作用于细胞周期调控蛋白p27kip1,加速了对p27kip1泛素化依赖的蛋白降解,使其表达及代谢发生异常,导致细胞周期失控并促进细胞异常增殖,从而参与了NSCLC的发生和发展。

复发转移性胃癌患者HER2基因扩增、蛋白表达及预后的关系

目的探讨复发转移性胃癌肿瘤原发灶HER2基因扩增与蛋白表达的相关性,及与临床病理特征和预后的关系。方法收集237例复发转移性胃或胃食管交界处腺癌肿瘤原发灶标本,分别应用荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测HER2基因扩增和蛋白的表达。结果 FISH检测HER2基因扩增18.1%(43/237);IHC检测HER2蛋白表达-、1+、2+、3+分别为160例(67.5%)、34例(14.3%)、17例(7.2%)和26例(11.0%)。HER2总体阳性率(FISH+或IHC 3+)为19.0%(45/237)。FISH与IHC方法总的符合率较好,达92.4%(219/237),呈显著正相关(r=0.696,P<0.01)。HER2更常见于胃食管交界处腺癌、肠型胃癌及分化较好的胃癌。胃癌HER2阳性表达与肝、肺等广泛的转移相关。对215例接受全身化疗的患者进行生存分析显示,HER2阳性状态与较差的生存时间相关。结论胃癌HER2基因扩增及蛋白表达具有较好的一致性。胃癌HER2的表达与预后差相关。