hnRNPK调控Wnt/β-catenin信号转导通路抑制乳腺癌细胞铁死亡

背景与目的:核内不均一核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNPK)是一种调控基因表达和蛋白翻译的RNA结合蛋白,已被发现与多种肿瘤恶性进展密切相关,但其在乳腺癌中的作用尚未明确。本研究旨在探讨hnRNPK对乳腺癌细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,联合生信分析hnRNPK在乳腺癌组织及正常组织中的表达及与临床预后的关系;采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)、免疫组织化学法检测hnRNPK在乳腺癌细胞及组织中的表达;将乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞进行siRNA转染,设置分组为对照组(control)、空载体组(NC)、干扰载体组(si-hnRNPK),采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖能力;高通量RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)分析hnRNPK富集的生物学功能及信号转导通路,Western blot及活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Fe2+试剂盒检测hnRNPK对铁死亡表型的影响,并利用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)检测敲低hnRNPK对铁死亡的回复作用;通过Western blot检测hnRNPK对Wnt/β-catenin通路蛋白表达的影响。结果:数据库结合生物信息学分析结果显示,hnRNPK在乳腺癌组织中表达上调(P<0.01),hnRNPK高表达组患者总生存期OS低于hnRNPK低表达组(P<0.05);hnRNPK在乳腺癌组织及细胞中呈高表达,敲低hnRNPK后乳腺癌细胞增殖能力减弱(P<0.05);RNA-seq分析发现hnRNPK显著富集铁死亡、凋亡、Wnt/β-catenin信号转导通路;敲低hnRNPK通过促进脂质ROS和MDA产生、Fe2+富集促进乳腺癌细胞铁死亡(P<0.05),且联合Fer-1有效抑制敲低hnRNPK对铁死亡的促进作用(P<0.05);hnRNPK下调导致Wnt/β-catenin信号转导通路中β-catenin、c-Myc表达降低,CK1α、APC、GSK-3β复合物表达升高(P<0.05)。结论:hnRNPK在乳腺癌中呈高表达,敲低hnRNPK通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路促进乳腺癌细胞铁死亡,抑制乳腺癌恶性进展。

Wnt/β-catenin信号转导通路与肿瘤关系的研究进展

Wnt/β-catenin信号转导通路在生物发育、细胞转运及细胞凋亡等生命过程中发挥重要作用,其异常活化与肿瘤的发生、发展有关。本文对Wnt/β-catenin信号转导通路及其新的研究进展、与肿瘤的关系和在抗肿瘤治疗中的应用前景作一综述。

不同牵张应力对成骨细胞MC3T3-E1分化及Wnt信号转导通路的影响研究

目的研究不同强度和时间的机械牵张应力刺激对成骨细胞的分化及Wnt信号转导通路的影响。方法采用FlexcellFX5000细胞加力系统,分别采用3%,6%,12%的形变幅度的正弦波对MC3T3细胞进行牵张应力干预,0.5 Hz的频率,时间分别为2,4,8 h。干预结束后分别检测细胞的ALP活性;提取细胞总RNA后采用Real time-PCR分别检测骨钙蛋白(Osteocalcin,OC)、Runx^2、Osterix、Wnt1、β-catenin、DKK-1 m RNA的表达;提取细胞总蛋白后采用Werstern blot法分别检测Wnt1、β-catenin和Phosphor-33/37-β-catenin的蛋白表达量。结果 3%和6%强度牵张干预后,成骨细胞ALP活性升高,OC、Runx^2、Osterix、Wnt1、β-catenin m RNA表达升高,而DKK-1 m RNA表达下降。6%的效应高于3%,且干预4 h后升高幅度最大。12%强度牵张干预后,成骨细胞的ALP活性和OC m RNA表达水平下降。Wnt1、β-catenin和Phosphor-33/37-β-catenin蛋白表达水平与上述m RNA表达水平相符。结论中小强度的牵张刺激可以上调Wnt信号转导通路,促进成骨细胞分化,而大强度及长时间连续干预则无成骨分化作用,甚至有抑制作用。

wnt信号转导通路与肝纤维化

肝纤维化(hepatic fibrosis)是肝脏对各种慢性肝损伤的代偿反应所形成的一种肝脏疤痕组织,并导致细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、细胞群和细胞因子的复杂改变。肝星状细胞(HSC)的激活并转化为肌成纤维细胞(MFB)是肝纤维化发生的中心环节,而HSC的激活需要通过细胞内的信号转导才能实现,研究发现HSC激活过程中存在wnt信号转导通路。近年来,针对wnt信号转导通路在肝纤维化进程中的作用正成为新的研究热点。

姜黄素通过Wnt信号转导通路抑制肺癌细胞A549增殖的研究

目的:从研究Wnt信号通路的关键因子-核蛋白β-catenin入手,探讨姜黄素(Curcumin,Cur)可能存在的抑制肺癌细胞增殖的分子学机制。方法:MTT法检测不同浓度的Cur对肺癌细胞A549的生长抑制情况,分析药物浓度和细胞增殖抑制率之间的关系;Western blot法检测Cur作用后,A549细胞核蛋白β-catenin含量的变化;RT-PCR方法验证Cur对细胞c-myc基因表达的影响;流式细胞仪观察经Cur作用后细胞周期的改变。结果:Cur以浓度依赖方式抑制肺癌细胞A549的增殖,该药物浓度与抑制率之间有明显的线性相关性(r=0.9333)。细胞经Cur干预48h后,核蛋白β-catenin的含量和促癌基因c-myc的表达含量均有所下降。流式细胞仪观察细胞周期的结果提示,Cur能够阻止肺癌细胞A549由G1期进入S期,提高G0/G1期细胞的百分比。结论:Cur能够抑制A549细胞胞浆内β-catenin蛋白进入胞核,阻断Wnt信号转导通路,进而抑制下游靶基因c-myc的表达,阻止肺癌细胞A549由G1期进入S期,有效抑制了A549细胞的增殖。

Wnt信号转导通路与肝纤维化关系的研究现况

Wnt信号转导通路是近年来分子生物学、细胞生物学和肿瘤研究中的一大热点,其参与调控细胞分化、癌变、凋亡及机体免疫、应激等多种病理生理过程.目前许多关于癌症方面的研究均已证实,阻断Wnt信号通路可以诱导癌症细胞的凋亡.肝纤维化的发生与多种信号通路的激活相关,有研究证实Wnt信号通路也参与了肝纤维化的发生,阻断该通路可以抑制HSC增殖及诱导其凋亡.HSC的活化作为肝纤维化发生的关键环节,通过诱导其凋亡有可能成为一种新的肝纤维化治疗方法.研究Wnt信号通路与肝纤维化关系为将来临床应用提供一定的理论基础.

黄芪多糖对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤Wnt基因转导通路的影响

目的观察黄芪多糖对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤Wnt基因转导通路中相关因子β-连环蛋白(β-catenin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法将30只SPF级雌性裸小鼠(BALB/c)随机分为对照组、模型组、黄芪多糖组,每组10只。模型组和黄芪多糖组均经右侧肩胛背部皮下注射人子宫内膜癌细胞系Ishikawa肿瘤细胞悬液制作人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。造模4周后,黄芪多糖组给予黄芪多糖肌肉注射,对照组、模型组注射等量生理盐水,均连续14 d。实验结束后处死各组小鼠,摘取瘤体,计算抑瘤率;采用免疫组化法检测子宫内膜癌组织中β-catenin、E-cadherin蛋白表达情况,RT-PCR法检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达情况。结果黄芪多糖组瘤体积、瘤质量均明显低于模型组(P均<0.05),抑瘤率明显高于模型组(P<0.05);模型组β-catenin蛋白和β-catenin mRNA表达水平均明显高于正常组(P均<0.05),黄芪多糖组均明显低于模型组(P均<0.05);模型组Ecadherin蛋白和E-cadherin mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.05),黄芪多糖组均明显高于模型组(P均<0.05)。结论黄芪多糖可促进E-cadherin蛋白和基因表达,抑制β-catenin蛋白和基因表达,通过调控Wnt基因转导通路而发挥抗肿瘤作用。

跳骨片抑制大鼠膝骨关节炎Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制研究

目的探讨跳骨片对大鼠膝骨关节炎(OA)Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制。方法将30只8周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、跳骨片组,每组10只。空白组不予任何处理,模型组、跳骨片组均采用改良Hulth法建立OA动物模型。建模成功后跳骨片组每天予跳骨片0.32 g/kg灌胃,空白组和模型组每天予等量生理盐水灌胃,干预12周后分别取3组大鼠双侧膝关节股骨髁、关节软骨和滑膜,将股骨髁常规固定、脱钙、包埋及切片,对切片分别进行苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝染色,光镜下观察关节软骨组织形态学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测滑膜中白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;蛋白质免疫印迹检测关节软骨β-catenin、Wnt-4蛋白表达。结果模型组滑膜中,IL-1β表达量明显高于空白组和跳骨片组(P<0.01),MMP-13表达量高于空白组和跳骨片组(P<0.05),TNF-α表达量明显高于空白组(P<0.01)、高于跳骨片组(P<0.05);模型组关节软骨中,β-catenin蛋白表达量明显高于空白组和跳骨片组(P<0.01),Wnt-4蛋白表达量高于空白组和跳骨片组(P<0.05)。HE染色显示跳骨片组软骨破坏程度低于模型组,甲苯胺蓝染色显示跳骨片组软骨细胞蛋白多糖含量高于模型组(P<0.01)。结论跳骨片能抑制关节软骨Wnt/β-catenin信号转导通路,降低滑膜中IL-1β、MMP-13、TNF-α表达,抑制炎症反应介导的软骨基质降解,延缓关节软骨退变。

Wnt/β-catenin信号转导通路异常及其在鼻咽癌发生中的作用

信号转导通路异常在肿瘤发生、发展过程中发挥着作用,其中Wnt/β-catenin信号转导通路在调控细胞的生长和分化、胚胎发育和肿瘤的发生发展起重要作用。Wnt/β-catenin信号转导通路异常主要表现为β连环蛋白(β-catenin)的异常积聚以及其下游靶基因的激活,从而影响细胞周期、细胞凋亡和细胞增殖,使细胞凋亡受阻、过度增殖,导致肿瘤的发生。Wnt/β-catenin信号转导通路的异常与鼻咽癌的发病机制密切相关。

Wnt信号转导通路与间充质干细胞分化

Wnt信号转导通路与细胞生长、分化及老化等密切相关,其异常表达或激活能引起多种疾病。Wnt信号转导通路与成骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞生理功能密切相关,通过调控Wnt信号转导通路影响成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞及其前体间充质干细胞生物学行为,可作为临床治疗骨骼疾病的策略。该文就Wnt信号转导通路调控间充质干细胞向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化研究进展作一综述。

Wnt/β-catenin信号转导通路与肺纤维化的关系

Wnt信号转导通路是与哺乳动物发育以及细胞分化、增殖密切相关的信号通路。经典Wnt通路中,β-连环蛋白为其下游的关键调控因子。众多研究表明,在肺纤维化的发生发展中,Wnt/β-catenin信号转导通路起着不可替代的调控作用。本文就Wnt/β-catenin信号转导通路与肺纤维化的关系及其研究进展做一综述,旨在探讨此通路在肺纤维化治疗中存在的潜在靶点。

Wnt信号转导通路蛋白在尖锐湿疣皮损中的表达

目的:检测Wnt基因信号转导通路相关蛋白在尖锐湿疣(CA)皮损中的表达,探讨Wnt信号转导通路在CA皮损上皮细胞过度增殖中的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测Wnt信号转导通路相关蛋白Wnt-1、β-连环素(β-catenin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)在CA皮损中的表达。结果:Wnt-1蛋白在CA皮损中的表达水平显著高于对照组;β-catenin蛋白呈异常表达,且异常表达率显著高于对照组;E-cadherin蛋白在CA皮损中的表达则显著低于对照组。结论:Wnt信号转导通路可能在尖锐湿疣皮损上皮细胞过度增殖中起着重要作用,且与HPV的分型有关。

Wnt信号转导通路和肿瘤防治

Wnt信号转导途径可以分为决定细胞命运的经典途径和控制细胞运动及组织极性的非经典途径。经典WNT信号转导通路是Wnt蛋白通过与Frizzled(FZD)家族特异受体和LRP5/LRP6辅助受体结合,触发细胞内的信号转导,使β-连环蛋白(β-catenin)聚集的级联反应过程。非经典的Wnt信号被转导是通过Frizzled家族受体和ROR2/RYK联合受体结合到Dishevelled依赖(Rho family GTPases和c-junNH2-terminal kinase)或Ca2+依赖的信号级联反应。Wnt通路及其有关的其他通路在胚胎发育和肿瘤发生中起重要作用。在许多种人类癌病中,Wnt通路的负性调节基因突变失活。经优化选择分离出的择靶向作用于WNT信号途径的小分子复合物和人类单克隆抗体可以用于癌症的治疗。

Wnt信号转导通路在心肌肥厚中作用的研究进展

Wnt信号转导通路在细胞的生长与分化、胚胎正常发育、血管形成以及肿瘤发生发展等过程中发挥重要作用。Wnt信号转导通路的异常激活与多种心脏疾病(心肌肥厚、心肌纤维化、高血压、心力衰竭和心肌梗死等)及心脏病理状态(心律失常)相关。心肌细胞肥大是心肌肥厚的基础细胞形态学改变,Wnt信号转导通路中各分子信号参与调节心肌细胞肥大的发生并相互调控,对心肌细胞肥大的发生有重要意义,其中经典Wnt/β联蛋白信号转导通路的作用最显著。

锂介导的Wnt/β-catenin信号转导通路对骨髓间充质干细胞的影响

人类骨髓间充质干细胞来源于胚胎时期的中胚层,存在于骨髓、脂肪、皮肤等组织中,具有自我更新能力及多向分化潜能。研究表明,锂剂可激活Wnt/β-catenin信号转导通路而对骨髓间充质干细胞增殖、分化等产生影响。该文就锂介导的Wnt/β-catenin信号转导通路对骨髓间充质干细胞的影响作一综述。

Wnt信号转导通路与细胞凋亡

细胞信号转导是各类信号通过细胞膜或细胞内信使分子引起基因表达或物质代谢改变的过程。因此,细胞信号转导过程发生障碍或异常,必然会导致细胞生长、分化、代谢及生物学行为异常,从而引起各种疾病甚至肿瘤。Wnt信号转导通路是一个由多种分子参与、相互影响、相互制约和协同作用的复杂体系;是胚胎发育、调控细胞生长增殖的关键途径。由于基因突变或稳定性增加引起该途径异常激活可以启动c-myc、cyclin、MMP-7、Survivin等下游靶基因表达异常,导致细胞增殖,抑制细胞凋亡,肿瘤形成等。Wnt信号通路作为细胞信号转导系统之一,参与肿瘤发生的机制涉及信号转导、细胞周期、细胞增殖、迁移和分化、细胞凋亡,介导细胞的黏附等多方面。

Wnt/β-catenin信号转导通路对骨肉瘤癌干细胞的调节作用

部分骨肉瘤患者对化疗缺乏有效反应,其耐药机理目前尚不明确。骨肉瘤的难治性、复发转移和抗药性与癌干细胞有关。癌干细胞可通过细胞表面特异性标记物、侧群细胞、细胞球形成等进行辨别。多项研究发现,骨肉瘤中存在Wnt/β-catenin信号转导通路的异常表达。通过调控该信号转导通路可改变骨肉瘤癌干细胞的特性,抑制骨肉瘤的增殖、复发和远处转移。该文对Wnt/β-catenin信号转导通路对骨肉瘤癌干细胞的调节作用及治疗前景作一综述。

Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩形成中的作用机制研究

目的了解Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩原代成纤维细胞中关键蛋白和m RNA水平,探讨其在瘢痕疙瘩形机制中的作用。方法采用组织块培养法进行原代成纤维细胞培养,通过Western Blot和RT-PCR法分别检测正常皮肤以及瘢痕疙瘩成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号转导通路中相关信号分子Wnt5a、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白和Wnt5a、β-catenin、GSK-3βm RNA水平,比较两者之间差异。结果与正常皮肤相比,瘢痕疙瘩成纤维细胞中Wnt5a、β-catenin、p-GSK-3β蛋白及Wnt5a、β-catenin m RAN水平增高(P<0.05),GSK-3β蛋白及m RNA表达水平无明显变化。结论在瘢痕疙瘩形成过程中,Wnt5a、β-catenin m RAN上调并导致Wnt5a、β-catenin蛋白水平增高以及GSK-3β蛋白磷酸化导致p-GSK-3β增高可能在瘢痕疙瘩的形成机制中起着重要作用。

Wnt/β-catenin信号转导通路与病理性瘢痕形成研究进展

前言：病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,形成于皮肤异常纤维伤口愈合过程中,是组织修复和调节机制失控的结果,成纤维细胞过度增殖、合成并大量分泌Ⅰ,Ⅲ胶原而导致细胞外基质（extracellular matrixe,ECM）过度沉积[1]。有研究认为瘢痕形成过程的关键效应细胞是成纤维细胞,Wnt/β-catenin信号转导通路在其中起关键作用[2]。

经典Wnt信号通路与肝脏关系的研究进展

经典Wnt信号转导通路的暂时激活在肝脏发育、出生后肝脏正常生长、肝细胞再生、肝小叶分带、肝脏代谢和氧化应激反应过程中发挥着重要作用,研究显示这条通路异常持续激活与多种慢性肝病的进展显著相关.近年来针对经典的Wnt信号通路在肝脏病理生理过程中的作用作了大量的研究,并取得一些进展,本文对此作一综述.