WNT3A结合并稳定FZD2激活Wnt通路促进成骨细胞增殖和分化的分子机制研究

目的:探讨配体WNT3A通过稳定和激活FZD2(Frizzled2)增加成骨细胞骨形成的活性及其分子机制。方法:24只雌性6~8周龄C57BL/6J小鼠随机分为4组,对照(Control)组,假手术(Sham)组,双侧卵巢摘除术(ovariectomy,OVX)诱导骨质疏松症(Osteoporosis,OP)小鼠模型组(OVX组),OVX+雌二醇治疗组(OVX+E2 Treatment组),每组6只小鼠。建立OVX小鼠模型。Western blot法测定小鼠后肢胫骨组织中WNT3A、FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2以及磷酸化(p-)STAT3、STAT3、p-JAK2和JAK2的表达水平。CCK-8测定小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的增殖能力。腺病毒-shRNA-FZD2介导敲低MC3T3-E1细胞中的FZD2。免疫共沉淀(co-Immunoprecipitation,co-IP)法测定WNT3A处理MC3T3-E1细胞前后FZD2与泛素(ubiquitin,Ub)的直接结合情况。结果:与OVX组相比,OVX+E2 Treatment组小鼠胫骨组织中WNT3A、FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2的表达水平均被上调(P<0.05)。与Control组相比,WNT3A Treatment组MC3T3-E1细胞中FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2的表达水平均升高(P<0.05);细胞增殖能力增强(P<0.05)。与WNT3A Treatment组相比,WNT3A Treatment+Adv-shRNA-FZD2组FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2的表达水平均降低(P<0.05);p-STAT3和p-JAK2的磷酸化水平均降低(P<0.05);增殖能力降低(P<0.05);而2组细胞中STAT3和JAK2的表达水平无统计学差异(P>0.05)。在IP:Ub组中,与WNT3A处理(-)的细胞相比,WNT3A处理(+)的细胞中FZD2的表达水平升高(P<0.05)。结论:WNT3A的促骨合成代谢活性是通过结合并稳定FZD2激活Wnt/β-Catenin信号通路实现的。

基于Wnt通路治疗心肌纤维化的药物研究

Wnt通路是一条在生物体内发挥关键作用的信号传导途径,调节细胞增殖、发育、分化、再生和胚胎发育,对维持组织正常功能至关重要,也是疾病发展中起关键作用的信号传导通路。过去几十年来,通过对Wnt通路的深入研究,对其机制有更多的了解,在诸多领域中显示出重要的影响力。心肌纤维化是由心肌缺血缺氧导致的一种缺血性心肌病,是各种心脏疾病所表现出的共同病理特征。随着对心肌纤维化的机制的深入研究,已发现Wnt通路在心肌纤维化中起重要作用。近年来大量实验也证实许多临床药物通过Wnt通路可以改善心肌纤维化。了解Wnt通路的基本原理、调控机制以及中药、西药通过Wnt通路对心肌纤维化作用的总结,有助于对许多重要问题的进一步认识,为疾病的治疗与预防提供新的线索。

补肾活血复方调控Wnt通路抑制心力衰竭心肌损伤及细胞凋亡的机制研究

目的 研究补肾活血复方通过抑制Wnt信号通路(Wingless)抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡的分子机制。方法 将45只斯泼累格·多雷(Sprague-Dawley, SD)大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组。采用结扎冠状动脉配合力竭式游泳构建心力衰竭模型。造模成功后按照实验分组利用补肾活血复方或赖诺普利给予大鼠持续灌胃4周。治疗结束后,采用彩色超声多普勒心动图评价大鼠心功能,称取体质量(body weight, BM)及左心室湿质量(left ventricular wet mass, LVM),计算左心室质量指数(left ventricular mass index, LVMI),苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色检测心肌病理组织学损伤,蛋白质印迹(Western blot)检测BCL2凋亡调节器(BCL2 apoptosis regulator, Bcl-2)、BCL2相关X,凋亡调节器(BCL2 associated X,apoptosis regulator, Bax)、活化半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)、Wnt家族成员3A(wnt family member 3A,Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测Bcl-2、Bax、半胱天冬酶3(Caspase-3)、Wnt3a、β-catenin mRNA表达。结果 与假手术组比,模型组的左心室舒张末内径(left ventricular end diastolic diameter, LVEDD)及左心室收缩末内径(left ventricular end systolic diameter, LVESD)、LVMI、Bax、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著上调,左室短轴缩短率(left ventricular short axis shortening rate, LVFS)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)、Bcl-2蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比,补肾活血复方组及赖诺普利组LVEDD、LVESD、LVMI、Bax、cleaved-caspase-3、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达显著下调,LVFS、LVEF、Bcl-2蛋白及mRNA表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组心肌细胞形态正常,肌纤维排列整齐,结构清晰;模型组心肌纤维紊乱,存在炎性细胞浸润;赖诺普利组及补肾活血复方组心肌损伤及炎症浸润明显改善。结论 补肾活血复方可通过抑制Wnt信号通路抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡。

基于Wnt通路研究补肾活血复方对心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化的影响

目的探讨补肾活血复方能否通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。方法将45只SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组,按照实验分组采用结扎左冠状动脉前降支配合力竭式游泳造成慢性心力衰竭模型,在结扎冠状动脉前后进行超声心电图检测,判断手术结扎成功后进行力竭式游泳,并行超声心动图检查,当左室射血分数(LVEF)<45%为造模成功。模型建立完成后采用补肾活血复方或赖诺普利或0.9%氯化钠溶液持续灌胃4周。治疗结束后,称取体质量(BM)、全心质量(HM)和左心室质量(LVM),计算全心质量指数(HWI)和左心室质量指数(LVMI),判断心肌肥厚程度;ELISA检测大鼠中脑钠肽(BNP)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)含量;马松染色检测心肌纤维化情况,并测定心肌间质胶原容积分数(CVF)、心肌细胞横截面积(CSA)、血管周围胶原面积(PVCA)变化;Western blot检测心肌组织中Ⅰ型胶原(Col I)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、蓬乱蛋白1(Dvl1)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达;Real-time PCR检测心肌组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA表达。结果与结扎前比,结扎后大鼠心电图显示T波倒置或低平,ST段较术前明显抬高(绝对值≥0.1 mV)。与假手术组相比,模型组、赖诺普利组及补肾活血复方组的LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均上调,模型组与赖诺普利组HWI升高,差异有统计学意义(P<0.05),补肾活血复方组HWI升高,差异无统计学意义。与模型组相比,赖诺普利组及补肾活血复方组的HWI、LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.01),赖诺普利组与补肾活血复方组比差异无统计学意义。马松染色检测结果显示,假手术组心肌细胞呈红色,结构完整,心肌纤维排列完整,心肌间质可见少量胶原蓝染;模型组心肌细胞数量变少,心肌间质排列松散且无规则,出现大量胶原纤维的增生,呈波状;与模型组相比,赖诺普利及补肾活血复方组心肌细胞排列相对整齐,心肌间质内胶原纤维增生减少。结论补肾活血复方通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。

从肿瘤干细胞Wnt通路探讨固本清源方药联合雄激素剥夺治疗控制去势抵抗性前列腺癌

目的从肿瘤干细胞Wnt通路探讨固本清源方药联合雄激素剥夺治疗控制去势抵抗性前列腺癌的作用机制。方法采用流式细胞术从前列腺癌PC-3细胞中分选出CD44+CD133+PC-3细胞并验证其肿瘤干细胞特性。将36只雄性裸鼠随机分为A~F组,每组6只,除A组接种前列腺癌PC-3细胞外,其他各组接种前列腺癌干细胞;除A、B组均给予氯化钠溶液外,其余组均给予醋酸戈舍瑞林缓释植入剂0.36 mg·kg^(-1),腹腔注射1次/25 d;比卡鲁胺片5 mg·kg^(-1),灌胃1次/d;其中D-F组在上述基础上进一步分别给予2.5 g·kg^(-1)、25 g·kg^(-1)、50 g·kg^(-1)固本清源方药,灌胃2次/d;观察荷瘤小鼠肿瘤的生长情况,连续给药32 d后剥离瘤组织,计算肿瘤抑制率;采用Western blot法分别检测肿瘤组织中Wnt、β-catenin的蛋白表达。结果从PC-3细胞中分选出的CD44+CD133+PC-3细胞亚群具有前列腺癌干细胞特性;低、中、高剂量固本清源方联合雄激素剥夺治疗对前列腺癌干细胞荷瘤小鼠的抑瘤率分别为24.58%,36.67%,40.24%,与单纯雄激素剥夺治疗组比较差异具有统计学意义(P<0.05),进一步研究显示低、中、高剂量固本清源方联合雄激素剥夺治疗能下调Wnt、β-catenin的蛋白表达水平,与雄激素剥夺治疗组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论固本清源方联合雄激素剥夺治疗能够抑制前列腺癌干细胞荷瘤小鼠肿瘤生长,其作用机制与调控前列腺癌干细胞Wnt/β-catenin信号通路有关。

非经典Wnt通路在卵巢癌中的作用与潜在治疗意义研究进展

卵巢癌是病死率最高的女性生殖系统恶性肿瘤,其发生发展过程涉及多种信号通路的异常调控。Wnt信号通路是一种高度保守的分子信号通路,在胚胎发育、组织稳态以及肿瘤发生发展等生理及病理过程中发挥重要作用。Wnt信号通路包括经典的Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路以及不依赖β-catenin转录活性的非经典Wnt通路,后者主要包括Wnt/平面细胞极性(Wnt/planar cell polarity,Wnt/PCP)通路和Wnt/Ca^(2+)通路。以往研究主要集中于经典Wnt通路与肿瘤进展的关系,但近年来非经典Wnt通路逐渐受到重视,相关研究丰富了其在组织发育及肿瘤发生等生理及病理过程中的认知。现有研究提示,非经典Wnt通路在卵巢癌中受到异常调控,并与卵巢癌的分期及预后密切相关。非经典Wnt通路在卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭等多种生物学过程发挥重要作用,且该通路的变化与卵巢癌化学治疗(化疗)耐药也具有一定相关性。该文从上述多个角度对非经典Wnt通路在卵巢癌中的作用进行综述,并讨论基于非经典Wnt通路的卵巢癌靶向治疗研究进展,为开发新型靶向药物提供新的思路。

黄芩苷对宫颈癌细胞免疫逃逸、HPVE6/7水平及Wnt通路的影响

目的:探讨黄芩苷对宫颈癌细胞免疫逃逸、HPVE6/7水平及Wnt通路的影响。方法:将Hela细胞分为模型组、低剂量黄芩苷组、中剂量黄芩苷组及高剂量黄芩苷组。低、中及高剂量黄芩苷组分别加入20、40、80μg/mL黄芩苷共培养。采用MTT检测24、48、72及96 h各组细胞活性;qPCR检测HPVE6/7 mRNA;免疫印迹检测PD-1、PD-L1及Wnt1、β-Catenin表达。结果:与模型组相比,黄芩苷组24、48、72及96 h的Hela细胞活性均降低(P<0.05),与低剂量黄芩苷组相比,中、高剂量黄芩苷组24、48、72及96 h的Hela细胞活性均降低,且高剂量黄芩苷组活性低于中剂量黄芩苷组(P<0.05);与模型组相比,黄芩苷组HPVE6、HPVE7 mRNA、PD-1、PD-L1及Wnt1、β-Catenin降低(P<0.05),与低剂量黄芩苷组相比,中、高剂量黄芩苷组HPVE6、HPVE7 mRNA、PD-1、PD-L1及Wnt1、β-Catenin降低,且高剂量黄芩苷组HPVE6、HPVE7 mRNA、PD-1、PD-L1及Wnt1、β-Catenin低于中剂量黄芩苷组(P<0.05)。结论:黄芩苷可下调宫颈癌细胞活性,降低HPVE6/7基因表达及改善免疫逃逸,机制可能与抑制Wnt1、β-Catenin表达相关。

经典Wnt通路与胶质瘤

脑胶质瘤(glioma)源于胶质细胞的胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤。由于中国的胶质瘤患者预后差,死亡率高,在人群中进行有效的胶质瘤筛查和危险因素研究是实现早期诊断和治疗的有效手段。胶质瘤细胞中经典的Wnt通路的异常激活使Wnt/β相关蛋白通路被用作精确治疗胶质瘤的目标。经典的Wnt通路是调控胶质瘤细胞增殖和凋亡的关键通路,也是调控胶质瘤发病机制的重要通路。因此,研究经典的Wnt通路在胶质瘤中的机制对该疾病的诊断、治疗和预后具有重要的临床意义。

儿童急性淋巴细胞白血病中Wnt通路抑制因子-1基因甲基化研究

目的探讨Wnt通路抑制因子-1(Wif-1)表达及其甲基化状态在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的意义。方法选取徐州医科大学附属医院2017年6月至2022年2月新确诊的43例ALL患儿为试验组,20名骨髓移植供者为对照组。留取试验组、对照组骨髓血各3~5 ml,实时荧光定量聚合链反应法检测Wif-1 mRNA表达;Western blot法检测Wif-1蛋白表达;甲基化特异性聚合酶链反应法检测Wif-1基因甲基化状态。结果试验组Wif-1 mRNA及蛋白相对表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组Wif-1基因甲基化阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童ALL存在Wif-1基因高甲基化。

胃癌患者Wnt通路RNF43基因及蛋白水平的表达情况及临床意义分析

目的探究胃癌患者Wnt通路环指蛋白43(RNF43)基因及蛋白水平的表达情况及临床意义分析。方法前瞻性选取2020年1月至2021年3月在石家庄市人民医院接受治疗的胃癌患者110例。根据患者的临床就诊资料记录其临床病理特征;对所有的患者进行为期2年的跟踪随访调查,记录其生存情况。其中37例死亡患者纳入死亡组,73例存活患者记为存活组。患者入院即刻(治疗前),采用qRT-PCR法检测癌组织中RNF43 mRNA相对表达量,采用蛋白质印迹法检测RNF43蛋白表达水平,对比不同临床特征患者RNF43基因和蛋白的表达水平。结果不同性别、年龄段、肿瘤大小、胃癌原发病灶、T分期、N分期患者的RNF43 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);弥漫型胃癌患者RNF43 mRNA、蛋白表达分别为0.460±0.084、0.041±0.006,均低于肠型癌(0.539±0.140、0.064±0.090)、混合型(0.765±0.101、0.064±0.090)患者,美国癌症协会分期(AJCC)Ⅲ期患者RNF43 mRNA、蛋白表达分别为0.519±0.113、0.043±0.007,Ⅳ期分别为0.478±0.097、0.042±0.011,均低于Ⅰ期(0.660±0.017、0.075±0.012)、Ⅱ期(0.629±0.058、0.067±0.012),存在腹膜转移患者的RNF43 mRNA、蛋白表达分别为0.531±0.109、0.051±0.010,均低于无腹膜转移(0.828±0.097、0.087±0.009),差异均有统计学意义(P<0.05)。2年内死亡组患者RNF43 mRNA、蛋白表达分别为0.319±0.081、0.039±0.011,均低于存活组(0.728±0.029、0.068±0.009),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌患者Wnt通路RNF43基因及蛋白水平的表达与其性别、年龄、最大肿瘤直径、肿瘤部位无关,不同T分期、N分期患者间表达水平也无显著差异,但Lauren分型、AJCC分期以及是否存在腹膜转移影响其表达,RNF43 mRNA、蛋白表达偏低者预后可能不佳。

HER-2对胃癌细胞生物学行为及EMT、Wnt通路的影响

目的探讨人表皮生长因子受体-2(HER-2)的表达对胃癌细胞粘附、迁移等生物学行为的影响,并探讨其表达与上皮间质转化(EMT)及Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法利用小干扰RNA技术,在SGC-7901胃癌细胞中沉默HER-2表达;采用实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blotting法验证HER-2的沉默效果,并将实验分为空白组、空载体组和HER-2沉默组;采用MTT比色法检测细胞粘附能力,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力;qPCR和Western blotting法检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail及Wnt/β-catenin信号通路GSK-3β、β-catenin、c-Myc的mRNA和蛋白表达情况。结果HER-2沉默组中HER-2 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空载体组(P<0.001),而空白组和空载体组的差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组和空载体组比较,HER-2沉默组胃癌细胞的粘附能力、迁移能力和侵袭能力均显著下降(P<0.001)。HER-2沉默组胃癌细胞Vimentin和Snail的mRNA和蛋白表达均降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.001)。与空白组和空载体组比较,HER-2沉默组胃癌细胞β-catenin和c-Myc的mRNA和蛋白表达均降低,GSK-3β的mRNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论HER-2表达影响胃癌细胞的生物学行为,其可能通过促进EMT及影响Wnt/β-catenin信号通路,从而增强胃癌细胞的粘附、迁移及侵袭能力。

Dickkopf-1调控Wnt通路在缺氧诱导的晶状体上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨缺氧条件下Wnt/β-catenin通路在晶状体上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用,分析Dickkopf-1(DKK-1)的表达对晶状体上皮细胞EMT的影响。方法:将体外培养人晶状体上皮细胞(HLEB3细胞)分为正常氧培养组(加入含10%FBS的DMEM培养液)和缺氧培养组(加入含100μmol/L CoCl 2溶液的培养液进行缺氧处理6、12、24、48h)。利用免疫荧光染色法检测Wnt3a和DKK-1蛋白的表达及β-catenin蛋白的表达和定位;利用qRT-PCR法检测DKK-1 mRNA的表达。结果:免疫荧光染色结果显示,随着缺氧时间的延长,HLEB3细胞中Wnt3a和DKK-1蛋白表达水平明显上调,β-catenin蛋白在细胞核内积聚逐渐增多。qRT-PCR检测结果显示,与正常氧培养组相比较,缺氧培养6h组细胞中DKK-1 mRNA无显著差异(P>0.05),而缺氧培养12、24、48h组细胞中DKK-1 mRNA表达明显增加(P<0.001)。结论:缺氧可以激活晶状体上皮细胞Wnt/β-catenin通路,并诱导Dickkopf-1的表达,参与调控Wnt/β-catenin通路,影响EMT进程。

益气活血方基于miR-124调控Wnt通路促进神经再生

目的探讨益气活血方(脑络欣通)对MCAO-R气虚血瘀证大鼠神经再生的影响及可能的作用机制。方法随机数字表法将大鼠分成4组:正常组、模型组、脑络欣通组、通心络组,其中脑络欣通组和通心络组分别用脑络欣通溶液、通心络溶液灌胃。观察各组大鼠生命状态并进行神经功能缺损、气虚证和血瘀证评分,运用激光多普勒仪动态监测局部脑血流量(r CBF),TTC染色检测脑梗死体积,免疫组化结合免疫荧光染色检测脑组织Nestin和Brd U表达,荧光定量PCR检测mi RNA-124水平,Western blotting检测Wnt3a、GSK3β和β-catenin蛋白表达水平。结果脑络欣通和通心络都能改善模型大鼠神经功能,降低气虚证和血瘀证评分,减少脑梗死体积,r CBF提高(P<0.01);脑络欣通和通心络组Brd U表达增强,与正常组比较,其他3组阳性细胞数明显增多(P<0.01),与模型组比较,脑络欣通和通心络组显著增多,Nestin表达明显增强(P<0.01)。脑络欣通能抑制模型大鼠脑组织mi RNA-124和Wnt3a应激性的高表达,同时提高β-catenin的表达水平(P<0.01)。但脑络欣通和通心络对模型大鼠GSK3β蛋白表达均无明显影响(P>0.05)。结论脑络欣通可能通过影响脑组织mi RNA-124的表达而激活Wnt通路,从而发挥对气虚血瘀型脑缺血的神经保护以及神经再生的作用。

微小RNA-138调控Wnt通路对体外人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-138调控Wnt信号通路对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响。方法 选取脑胶质瘤细胞系U-87MG、U251,将其随机分为空白组、miR对照组(miR-NC)、miR-138模拟物组(miR-138 mimics)和miR-138抑制剂组(miR-138 inhibitor)。采用Real-time PCR检测各组细胞中miR-138表达;采用MTT、流式细胞术、Transwell实验及划痕实验分别对各组细胞的增殖、凋亡、侵袭以及迁移能力进行检测,采用Western blotting检测各组细胞Wnt通路相关蛋白表达。结果 MiR-138 mimics组miR-138表达水平较其余3组高,miR-138 inhibitor组低于空白组和miR-NC组(P<0.05);与空白组相比,miR-138 mimics组细胞增殖率较低,miR-138 inhibitor组较高,且成时间依赖性(P<0.05);MiR-138 mimics组细胞凋亡率高于空白组、miR-NC组和miR-138 inhibitor组,而miR-138 inhibitor组细胞凋亡率均低于其余组(P<0.05);MiR-138 mimics组侵袭细胞数低于空白组、miR-NC组和miR-138 inhibitor组,而miR-138 inhibitor组均高于其余3组(P<0.05);MiR-138 mimics组细胞迁移率低于空白组、miR-NC组和miR-138 inhibitor组,而miR-138 inhibitor组均高于其余3组(P<0.05);MiR-138 mimics组Wnt3a、Wnt1、糖原合成激酶3β(GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达低于空白组、miR-NC组和miR-138 inhibitor组;而miR-138 inhibitor组均高于其余3组(P<0.05)。结论 MiR-138过表达可有效抑制脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡,可能是通过抑制Wnt信号通路而实现。

Wnt通路中部分基因在绒山羊胚胎皮肤毛囊中的表达

已知绒山羊毛囊的发育受Wnt等信号通路控制,但Wnt通路相关基因在绒山羊胚胎毛囊启动和生长发育过程中的表达及作用机制尚不清楚。本文采用RNA-Seq技术对45 d,55 d和65 d的绒山羊胚胎体侧皮肤进行了转录组测序,鉴定Wnt通路相关基因的表达。RNA-Seq技术结合blast搜索,将转录组有效测序数据与云南黑山羊参考基因组序列(http://goat.kiz.ac.cn/GGD/download.htm)比对,获得了已知的Wnt通路(pathway hsa04310)中的123个相关基因(86.0%)。进而采用实时荧光定量PCR技术检测,验证了差异表达的Sfrp4、Wnt3、Wnt10a(上调)和Apc2(下调)基因在绒山羊胚胎不同时期皮肤中的表达量,初步探索了绒山羊毛囊在胚胎期启动、发育过程中,Wnt通路部分基因的表达模式,为进一步研究Wnt通路部分基因在绒山羊胚胎毛囊启动、发育过程中的作用机制提供了有意义的线索。

神经营养因子-3通过Wnt通路促进人骨髓间充质干细胞生长和成骨分化的研究

目的阐明神经营养因子-3(NT-3)促进人骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的能力,并分析Wnt通路的作用机制。方法正常培养的人骨髓间充质干细胞为对照组;NT-3刺激的人骨髓间充质干细胞为NT-3组;加入ICG-001作用30 min后,用NT-3刺激者为Wnt抑制剂组,每组进行成骨诱导实验。利用噻唑蓝细胞增殖、酶联免疫吸附试验、Western blot检测、茜素红染色等实验分别检测各组人骨髓间充质干细胞增殖、细胞凋亡、碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白-1(BMP-1)等蛋白表达及钙结节形成能力。结果与对照组比较,NT-3组间充质干细胞(MSC)增殖吸光度值增高(P<0.01);NT-3组碱性磷酸酶活性、BMP-1等蛋白表达或茜素红染色效果均高于对照组(P<0.01);与NT-3组比较,Wnt抑制剂组MSC增殖吸光度值降低(P<0.01);而Wnt抑制剂组的碱性磷酸酶活性、BMP-1等蛋白表达均低于NT-3组(P<0.01)。结论 NT-3通过Wnt通路,促进人骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化。

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响。方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平。结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达。结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达。

腹腔镜下射频消融联合静脉化疗对PTEN通路和Wnt通路介导肝癌细胞生长的影响

目的探讨腹腔镜下射频消融术(LRFA)联合静脉化疗对PTEN通路、Wnt通路介导肝癌细胞生长的影响。方法收集2013年5月-2016年6月该院收治的肝细胞癌患者90例,按照随机数表法分为观察组(n=45)及对照组(n=45)。观察组患者接受LRFA联合静脉化疗,对照组患者仅接受静脉化疗。术后1周取两组患者的肝脏病灶组织标本,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测其中PTEN信号通路、Wnt信号通路相关基因m RNA表达量;采用放射免疫法检测血清肿瘤标志物含量。结果治疗1周后,观察组患者的病灶组织PTEN通路相关基因PTEN mRNA表达量高于对照组患者,缺氧诱导因子-1(HIF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达量低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的病灶组织Wnt通路相关基因β-链蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、c-myc和基质金属蛋白酶7(MMP-7)mRNA表达量低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的血清肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)、γ-谷胺酰转肽酶同工酶Ⅱ(GGT-Ⅱ)、胰岛素样生长因子-2(IGF-2)、糖类抗原19-9(CA19-9)含量低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LRFA联合静脉化疗可通过PTEN通路、Wnt通路抑制肝癌细胞生长,具有积极的临床意义。

Wnt通路抑制剂XAV-939对牙髓干细胞成脂分化的影响

目的通过体外实验探讨Wnt通路抑制剂XAV-939对牙髓干细胞增殖及成脂分化的影响。方法酶消化法培养牙髓干细胞,鉴定后采用CCK8试剂盒检测XAV-939对牙髓干细胞增殖的影响,油红O染色检测XAV-939对牙髓干细胞成脂分化的影响,q RT-PCR检测成脂分化过程中,XAV-939对Wnt通路相关基因糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)和β-catenin以及成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(peroxisome proliferator activated receptor-γ2,PPARγ2)和CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)的影响。结果牙髓干细胞成脂诱导14 d后,XAV-939上调GSK3β、PPARγ2和C/EBPα的表达,同时下调β-catenin的表达。结论 XAV-939可以通过抑制Wnt通路促进牙髓干细胞的成脂分化。

人参皂苷Rh1通过Wnt通路抑制肺腺癌A549细胞增殖的机制探讨

目的:探讨人参皂苷Rh1通过Wnt通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖的机制。方法:体外培养A549细胞,加入Rh1(5、10和20μmol/L)诱导后,采用MTT法检测A549细胞存活率,采用Western blot测定Wnt通路相关蛋白GSK-3β和β-catenin表达情况;利用β-catenin(S37A)慢病毒转染建立Wnt通路激活型A549细胞,进一步研究A549细胞中Wnt通路持续激活对Rh1抗增殖作用的影响。结果:Rh1可以剂量和时间依赖性地抑制A549细胞的增殖,同时Rh1可以剂量依赖性地显著降低A549细胞中的GSK-3β(Ser9)及β-catenin的表达水平。Wnt通路激活型的A549细胞部分抵消了Rh1的抗增殖作用。结论:Rh1可能通过抑制Wnt信号通路来抑制A549细胞的增殖。