Wnt-1或Wnt/beta-catenin信号通路在恶性肿瘤中的研究进展

Wnt-1或Wnt/beta-catenin信号通路最初在鼠乳腺癌病毒诱导的乳腺癌发现的。大量研究发现,该通路异常导致人类各种肿瘤发生、发展,采用siRNA或Wnt-1抗体等手段调控该通路,显示出抗肿瘤效应。提示以Wnt-1或Wnt/beta-catenin为靶向的抗肿瘤治疗,值得进一步研究。

胃癌组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系

目的研究胃癌组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达水平与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路和预后的关系。方法选取2019年2~10月行胃癌根治术的113例胃癌患者,术中取其胃癌组织与癌旁组织。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌组织与癌旁组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量及Wnt/β-catenin信号通路相关指标[Wnt3a、Wnt5a、β-catenin、细胞周期素D1(cyclin D1)、原癌基因(c-myc)]信使RNA(mRNA)表达量。采用Pearson相关性法分析LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与Wnt/β-catenin信号通路相关指标mRNA表达量的相关性。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析胃癌患者术后3年生存情况。结果胃癌组织LncRNA NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量均高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson法分析显示,Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量与LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量呈正相关(P<0.05)。LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与胃癌患者的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。患者随访3年,随访中位时间为27.90个月。Kaplan-Meier生存曲线显示,LncRNANCK1-AS1高表达组3年生存率52.31%(34/65)低于LncRNANCK1-AS1低表达组的77.08%(37/48)(P<0.05),LncRNA TP73-AS1高表达组3年生存率52.78%(38/72)低于LncRNATP73-AS1低表达组80.49%(33/41)(P<0.05)。结论LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1在胃癌组织中表达上调,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌发生、发展,还可导致不良预后,有望作为辅助评估胃癌患者预后的生物标志物。

lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:检测人甲状腺滤泡上皮正常细胞和甲状腺癌细胞中FER1L4的表达水平。将SW579细胞分为control组、si-NC组、si-FER1L4组、LiCl+si-FER1L4组;检测各转染组细胞FER1L4的表达水平,细胞增殖,细胞凋亡率,细胞迁移和侵袭;检测细胞Cleaved caspase3、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平。结果:SW579细胞中FER1L4表达水平最显著;干扰FER1L4后,其细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著升高(P<0.05);与si-FER1L4组相比,LiCl+si-FER1L4组细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著降低(P<0.05)。结论:干扰FER1L4的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制甲状腺癌恶性发展。

UHRF1通过WNT/MMP9信号通路抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移

目的探索UHRF1基因与结直肠癌(CRC)患者临床病理特性的关系,慢病毒转染过表达和敲减UHRF1对CRC细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能的信号通路。方法免疫组织化学和RT-PCR法检测112例CRC癌组织与癌旁组织UHRF1的表达。构建慢病毒转染过表达和敲减UHRF1载体,分别转染SW480和HCT116细胞株,RT-PCR和Western blot检测转染前后及IWP-2(WNT拮抗剂)和HLY78(WNT活化剂)干预前后的UHRF1、WNT信号通路关键分子和MMP9的表达。EDU检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果(1)TCGA数据库和临床数据中,癌组织中UHRF1 m RNA和蛋白表达均高于正常组织。UHRF1表达量与TNM分期、N和M分期密切相关。TCGA中UHRF1低表达患者有更长的5年OS和疾病相关存活时间(DSS),UHRF1预测1、3和5年OS的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.634、0.652和0.771;在临床数据中3年OS也有相同生存获益,UHRF1高表达是CRC不良预后因素。(2)过表达UHRF1后,SW480中WNT3a、GSK3β和MMP9分子表达明显升高,p-β-catenin表达下降(P<0.05);敲减UHRF1后,HCT116细胞中WNT3a、GSK3β、MMP9表达下降,而p-β-catenin表达升高(P<0.05);分别用IWP-2和HLY78进行“拯救”实验,能够获得一致结果。(3)过表达组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组;IWP-2处理后,细胞增殖、迁移及侵袭能力则受到抑制。敲减实验呈现与过表达实验相反的结果。结论UHRF1在CRC发生发展中可能具有重要作用,UHRF1高表达可能是CRC不良预后因素,UHRF1可能通过WNT/MMP9信号通路来影响CRC的增殖、迁移和侵袭。

血清胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1及dickkopfWNT信号通路抑制剂1对食管癌的诊断价值

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)及dickkopf WNT信号通路抑制剂1(DKK1)对食管癌的诊断价值。方法选取62例食管癌患者作为食管癌组,59例健康体检者作为对照组。对比两组受试者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,对比不同分期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,分析TK1、CYFRA21-1、DKK1单独及联合检测对食管癌的诊断价值。结果食管癌组患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TK1+CYFRA21-1+DKK1联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度分别为88.50%、79.10%,曲线下面积为0.779(95%CI:0.695~0.864),均高于三者单独检测。结论TK1、CYFRA21-1、DKK1联合检测有利于提高食管癌的诊断效能,防止误诊漏诊,三者对其病情评估具有一定参考价值。

Sfrp-1通过下调Wnt信号对血管紧张素Ⅱ相关心肌损伤的影响

目的观察分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)调控无翼相关整合位点(Wnt)信号通路对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的体外心肌细胞损伤的影响。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,设置空白对照组(control组)、9型腺相关病毒载体组(aav9-Sfrp1组)和无Sfrp1基因组(aav9-NC组);control组仅进行常规培养,aav9-Sfrp1组和aav9-NC细胞分别转染aav9-Sfrp1和aav9-NC后,使用AngⅡ诱导心肌肥大模型。采用细胞计数试剂盒-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光对心肌细胞内LC3进行染色,蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白(Sfrp1、p62、atg5、Beclin1、LC3)和Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、Dvl-1、Wisp1)表达。结果:aav9-Sfrp1组Sfrp1 mRNA表达水平高于aav9-NC组(P<0.01)。aav9-NC组细胞存活率低于control组,aav9-Sfrp1组细胞存活率高于aav9-NC组(P<0.01)。aav9-NC组细胞凋亡率高于control组,aav9-Sfrp1组细胞凋亡率低于aav9-NC组(P<0.01)。aav9-NC组LC3荧光染色强度低于control组,aav9-Sfrp1组LC3荧光染色强度高于aav9-NC组。aav9-NC组p62、LC3Ⅰ/Ⅱ表达高于control组,atg5、Beclin1表达低于control组(P<0.05);aav9-Sfrp1组p62、LC3Ⅰ/Ⅱ表达低于aav9-NC组,atg5、Beclin1表达高于aav9-NC组(P<0.01)。aav9-NC组β-catenin、Dvl-1和Wisp1表达高于control组(P<0.001),aav9-Sfrp1组β-catenin、Dvl-1和Wisp1表达低于aav9-NC组(P<0.001)。结论:Sfrp1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,诱导细胞自噬,减轻心肌肥大,发挥保护心肌损伤的作用。

转录因子Foxq1通过WNT/β-catenin信号通路影响绒山羊毛囊干细胞增殖的研究

旨在探究陕北白绒山羊毛囊诱导期(E 66)和分化期(E 120)皮肤组织差异表达基因Foxq 1在绒山羊毛囊干细胞(HFSCs)中的功能。本研究选择年龄、体重基本一致的6只健康妊娠陕北白绒山羊母羊,在胚胎期E 66(n=3)和E 120(n=3)分别采集胎儿背部皮肤组织。将pAd-Foxq1和pAd-Blank过表达腺病毒分别侵染HFSCs,利用EdU、MTT及流式细胞等方法检测Foxq 1对HFSCs增殖的影响;利用qPCR和免疫荧光试验检测Wnt信号通路激活的标记因子CTNNB 1及Wnt信号通路下游基因的表达情况。qPCR结果表明,Foxq 1在绒山羊E 66和E 120皮肤组织差异表达(P<0.001),与测序数据一致;荧光显微镜下观察到彗星尾状荧光出现,表明Foxq 1腺病毒包装成功,且qPCR结果显示Foxq 1的过表达效率高达40000多倍(P<0.0001)。EdU和MTT结果表明,过表达Foxq 1后,毛囊干细胞的活力显著增强(P<0.05),EdU阳性细胞数量显著升高(P<0.01)。流式细胞周期结果显示,过表达Foxq 1后S期细胞比率显著升高。qPCR结果表明,过表达Foxq 1后CTNNB1、TCF 3及CYCLIND 1基因的mRNA表达量显著升高(P<0.05),免疫荧光进一步证明过表达Foxq 1后CTNNB1、TCF3及CYCLIND1蛋白水平的表达量显著升高。本研究发现,Foxq 1能够激活Wnt/β-catenin信号通路从而促进HFSCs的增殖,揭示了Foxq 1通过WNT/β-catenin信号通路影响绒山羊毛囊干细胞增殖的分子机理。

苓桂术甘汤对心梗后慢性心衰模型大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt1/β-catenin信号通路蛋白表达的影响

目的:观察苓桂术甘汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用和可能机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法复制心肌梗死后慢性心衰大鼠模型;造模24 h后,连续干预4 w。采用小动物彩色多普勒超声成像系统检测大鼠LVIDd、LVIDs、LVEF、LVFS;HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnT及心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ水平;Western Blot检测大鼠心肌组织Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著升高,LVEF、LVFS水平显著降低(P<0.01),心肌组织出现明显的心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及间质纤维化等病理变化,血清CK-MB、cTnT和心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ含量及CollagenⅠ/CollagenⅢ比值显著升高,心肌组织细胞质GSK-3β蛋白表达显著降低,心肌组织α-SMA蛋白及细胞质Wnt1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白和细胞核β-catenin表达显著升高,心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤干预4 w后,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:苓桂术甘汤能减轻心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌损伤并抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠心功能,其作用机制与其抑制心肌组织Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

NKD1调控Wnt/β-catenin信号通路影响结直肠肿瘤细胞周期的机制研究

目的探讨NKD1调控Wnt/β-catenin信号通路影响结直肠肿瘤细胞周期的作用机制。方法利用免疫组化和RT-PCR方法,检测NKD1在结直肠肿瘤癌组织和癌旁组织中的表达。选择人结直肠癌细胞SW620和HT29,分别转染NKD1干扰(NKD1 siRNA)慢病毒载体,RT-PCR和Western blot检测转染效果;定量蛋白质组学联合生信分析筛选NKD1富集的生物学功能及信号通路;CCK8、平板克隆实验检测NKD1对细胞增殖能力的影响;RT-PCR和Western blot检测NKD1对细胞周期标志物表达的影响;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路核心分子的蛋白表达。结果NKD1在结直肠癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.05);下调NKD1导致SW620和HT29细胞中NKD1 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05);定量蛋白质组学联合生信分析显示,下调NKD1差异蛋白主要富集细胞增殖和细胞周期生物过程,且显著富集细胞周期信号通路;相比对照组(Control组和NC组),siNKD1组SW620和HT29细胞增殖能力明显下降(P<0.05),细胞周期标志物CyclinD1、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。下调NKD1促进Wnt/β-catenin信号通路核心分子β-catenin、GSK3β、Axin2、c-Jun蛋白表达升高(P<0.05)。结论NKD1异常表达与结直肠癌发病机制相关,NKD1通过负向调控Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌细胞增殖和细胞周期。

缺氧诱导因子1α调控wnt/β-catenin信号通路对常氧条件下大鼠髓核细胞衰老的作用及机制

目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)调控wnt/β-catenin信号通路对常氧培养下大鼠髓核细胞衰老的影响及作用机制.方法:取5只4周龄雌性SD大鼠,提取鼠尾髓核原代细胞进行研究.(1)将髓核细胞分为5组:转染对照组[用磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理髓核细胞]、空载腺病毒组(用空载腺病毒处理髓核细胞)、过表达HIF-1α组(用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞)、空载siRNA组(用空载siRNA处理髓核细胞)、敲减HIF-1α组(用siRNA敲减HIF-1α处理髓核细胞),在常氧下培养48h后,免疫蛋白印迹(western blot,WB)检测HIF-1α和衰老相关基因p53、p21、p16,β-gal染色检测细胞衰老,评估常氧条件下HIF-1α对于髓核细胞衰老的影响.(2)取髓核细胞,分为空载腺病毒组、过表达HIF-1α组、空载siRNA组、敲减HIF-1α组,处理方式同前,在常氧下培养48h后,WB检测HIF-1α、GSK-3β和β-catenin通路的表达.取髓核细胞,分为对照组(用PBS处理髓核细胞)、过表达HIF-1α组(用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞)、XAV-939组(用XAV-939处理髓核细胞)、XAV-939+过表达HIF-1α组(用XAV-939+载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞),WB检测HIF-1α、p53、p21、p16和wnt/β-catenin的表达,β-gal染色检测细胞衰老,以检测HIF-1α与wnt/β-catenin信号通路的关系以及对髓核细胞衰老的影响.结果:(1)腺病毒转染HIF-1α后,与转染对照组和空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加(P<0.05).小干扰RNA转染HIF-1α后,与转染对照组和空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低(P<0.05).WB结果显示,与空载腺病毒组相比过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加(P<0.05),而p53、p21和p16表达降低(P<0.05),与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低(P<0.05),而p53和p16表达增加(P<0.05).β-gal染色显示,在常氧条件下培养48h,与空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组衰老细胞降低(P<0.05),与空载siRNA组相比,敲减HIF-1α组衰老细胞数量则增加(P<0.001).(2)与空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组β-catenin表达升高(P<0.01),同时GSK-3β表达降低(P<0.05).与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组β-catenin表达降低(P<0.0001),同时GSK-3β表达升高(P<0.05).与对照组相比,XAV-939组β-catenin表达降低(P<0.001),p53、p21和p16的表达升高,XAV-939+过表达HIF-1α组β-catenin表达降低(P<0.05),p21表达升高(P<0.05).与过表达HIF-1α组相比XAV-939+过表达HIF-1α组衰老细胞数增加(P<0.001),与对照组相比过表达HIF-1α组的细胞核内β-catenin表达更多,而XAV-939组和XAV-939+过表达HIF-1α组则相对较少(P<0.05).结论:HIF-1α通过激活wnt/β-catenin信号通路抑制常氧条件培养下大鼠髓核细胞的衰老.

基于KAI1/CD82探讨补正活血汤对胃癌大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的研究旨在探讨基于抗癌基因1(kang ai1,KAI1)/分化抗原簇82(cluster of differentiation 82,CD82)探讨补正活血汤对胃癌大鼠Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路的影响。方法60只清洁级(specific pathogen free,SPF)级雄性BALB/c裸鼠,6周龄,随机将60只大鼠分为模型组、顺铂组、补正活血汤低、中、高剂量组,每组12只;各组均制备成大鼠胃癌模型。各组裸鼠接种9~25 d开始给予对应药物治疗。模型组给予蒸馏水灌胃,1 mL/只;顺铂组将顺铂用生理盐水稀释至0.2 g/L,1 mL/只;补正活血汤低、中、高剂量组分别给予1 mL/只。2次/d,连续服药10 d,结果各组大鼠在制备模型过程中未见死亡。模型组毛松蓬乱集,色黄无泽,活动量明显减少,精神萎靡,饮食减少,粪便便溏。顺铂组大鼠毛紧贴,饮食减少,活动减少,粪便便溏;补正活血汤低剂量组毛稍密集,活动量较小,精神稍差,饮食明显减少,粪便溏稀;补正活血汤中剂量组毛密集,活动量较接近正常,精神尚可,饮食稍减少,粪便快成型;补正活血汤高剂量组毛密集,活动量几乎正常,精神渐佳,饮食与正常接近,粪便成型。顺铂组、补正活血汤低剂量组、补正活血汤中剂量组及补正活血汤高剂量组移植瘤质量明显低于模型组,顺铂组移植瘤质量低于补正活血汤低剂量组、补正活血汤中剂量组及补正活血汤高剂量组,抑瘤率高于补正活血汤低剂量组、补正活血汤中剂量组及补正活血汤高剂量组,补正活血汤中剂量组及补正活血汤高剂量组移植瘤质量低于补正活血汤低剂量组,抑瘤率高于补正活血汤低剂量组,补正活血汤高剂量组移植瘤质量低于补正活血汤中剂量组,抑瘤率高于补正活血汤中剂量组,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组肿瘤细胞密集形态不一,细胞核浆比例增大,存在明显的核分裂,个别腺体存在囊状扩张。顺铂组肿瘤细胞形态较均匀,腺管和腺上皮分界清楚,偶伴淋巴细胞浸润,固有腺体排列整齐紧密;补正活血汤低剂量组可见少量中性粒细胞和嗜酸性粒细胞与核深染,间质内有淋巴细胞浸润,可见水肿、充血与上皮坏死细胞脱落;补正活血汤中剂量组及补正活血汤高剂量组可见部分腺体萎缩,腺管和腺上皮分界清楚,细胞形态较均匀,腺体排列相对整齐,两组组间比较无显著差异(P>0.05)。连续服药10 d后,补正活血汤高剂量组、补正活血汤中剂量组、顺铂组KAI1/CD82蛋白表达水平高于补正活血汤低剂量组,β-catenin蛋白表达水平低于补正活血汤低剂量组,补正活血汤高剂量组、顺铂组β-catenin蛋白低于补正活血汤中剂量组,β-catenin蛋白表达水平低于补正活血汤中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。连续服药10 d后,补正活血汤高剂量组、补正活血汤中剂量组、顺铂组KAI1/CD82 mRNA表达水平高于补正活血汤低剂量组,β-catenin mRNA表达水平低于补正活血汤低剂量组,补正活血汤高剂量组、顺铂组β-catenin mRNA低于补正活血汤中剂量组,β-catenin mRNA表达水平低于补正活血汤中剂量组,差异无统计学意义(P<0.05)。结论补正活血汤能够有效治疗胃癌,其机制可能是与KAI1/CD82能够调节Wnt/β-catenin信号通路相关。

阻断Wnt-1信号通路对云南肺癌细胞株的影响

目的初步探讨个旧肺癌细胞株中是否存在功能性的Wnt-1信号通路的激活,以及阻断该信号通路后,观察个旧肺癌细胞株的增殖和生长情况.为云南肺癌研究提供新的切入点.为临床对肺癌的早期诊断、预后判断提供依据,为肺癌的分子病理分期和靶向治疗提供理论基础.方法应用免疫组织化学的方法检测个旧肺癌细胞株中Wnt-1蛋白的表达.以及按计划加入Wnt-1抗体,抑制Wnt-1蛋白和胞膜受体结合,引起Wnt通路下游蛋白的改变,从而阻断该信号通路的传导,应用MTT法检测肺癌细胞增殖和生长情况.结果 (1)Wnt-1蛋白阳性染色主要定位于细胞浆和细胞膜,为粗细不一的棕黄色颗粒.在肺癌组中的阳性表达率为75.40%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001);(2)Wnt-1抗体浓度为0.01 mg/m L时能极显著抑制细胞增殖和生长(P<0.01);0.005 mg/m L时能显著抑制细胞增殖和生长(P<0.05).而过于稀释抗体浓度组则不能抑制细胞增殖和生长.IC50计算结果显示抑制率50%的时候抗体浓度为0.003 mg/m L.结论 (1)个旧肺癌细胞株中存在功能性的Wnt-1信号通路;(2)Wnt-1抗体能极显著抑制个旧肺癌细胞增殖和生长,且与抗体浓度成正比;(3)抑制率50%的时候抗体的浓度0.003 mg/m L.

青娥丸调控Wnt1/β-catenin信号通路治疗糖尿病性骨质疏松症

目的探究青娥丸对糖尿病性骨质疏松症(diabetic osteoporosis,DOP)小鼠模型Wnt/β-catenin通路的影响。方法采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲菌素建立DOP小鼠模型,对小鼠进行药物干预,分为空白组、模型组、青娥丸低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组,进行一般状态观察,股骨组织进行HE染色,验证造模成功情况。生化检测各组小鼠碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、天冬氨酸转氨酶(AST)的水平,免疫组化检测股骨Wnt/β-catenin信号传导通路中相关蛋白Wnt1、β-catenin、Runx2表达水平,HE染色观察各组股骨组织细胞形态,qPCR检测股骨组织中GSK-3β、低密度脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、COL1A1 mRNA水平。结果与对照组相比,模型组小鼠骨小梁间隔增大,骨小梁之间连接减少,小鼠多饮多尿少动,尾静脉血糖值增加(P<0.01),血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3βmRNA水平均增加(P<0.01),体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平下调(P<0.01),Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白呈少量阳性表达(P<0.01)。与模型组相比,青娥丸组和阿仑膦酸钠组骨小梁间隔变小,骨小梁间的连接增多,尾静脉血糖值下降(P<0.01),血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3βmRNA水平均减少(P<0.01),体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平上调(P<0.01),Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白阳性表达增多(P<0.01)。结论青娥丸可增强DOP小鼠骨组织的修复作用,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路的激活有关。

CDK5RAP1通过Wnt/β-Catenin信号通路调控结直肠癌发生和进展的研究

目的探讨周期素依赖性激酶5激活结合蛋白1(CDK5RAP1)通过Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)信号通路对结直肠癌(CRC)发生和进展的影响。方法选取2020年6月至2022年9月在贵阳市第一人民医院被首诊为CRC的72例患者的CRC组织和癌旁组织,检测组织中CDK5RAP1的表达水平。选取人CRC细胞系HCT-116、SW480、HT29、SW620、Caco-2及人正常结直肠上皮细胞系NCM460,检测各细胞中CDK5RAP1的表达水平。分别将si-NC和si-CDK5RAP1转染至HCT-116细胞中,分别将pc-NC和pc-CDK5RAP1转染至SW480细胞中,将SW480细胞分为SW480-CON组(正常培养细胞)、SW480-pc-NC组(阴性对照细胞)、SW480-pc-CDK5RAP1组(CDK5RAP1过表达细胞)和SW480-HLY78组(SW480-pc-CDK5RAP1+20μmol/L Wnt激活剂HLY78),将HCT-116细胞分为HCT-116-CON组(正常培养细胞)、HCT-116-si-NC组(阴性对照细胞)、HCT-116-si-CDK5RAP1组(CDK5RAP1低表达细胞)和HCT-116-HLY78组(HCT-116-si-CDK5RAP1+20μmol/L HLY78)。检测各组CRC细胞中CDK5RAP1的表达水平、CRC细胞存活率(增殖能力)、克隆、侵袭、迁移情况,以及CRC细胞成球率(细胞干性)。检测各组CRC细胞中β-Catenin、Axin1、c-Myc、CD133、CD44、SOX2蛋白的表达水平。选取18只BALB/C裸鼠随机分为CON组、si-NC组和si-CDK5RAP1组,每组6只,分别在各组裸鼠右前肢腋下注射对应的HCT-116细胞悬液,5周后处死裸鼠,剥离移植瘤并称重比较。结果CRC组织及细胞中CDK5RAP1的表达水平均显著高于癌旁组织和人正常结直肠上皮细胞(P均<0.05),且CDK5RAP1在HCT-116细胞中表达水平最高,在SW480细胞中表达水平最低,故分别使用HCT-116细胞和SW480细胞构建CDK5RAP1敲低和过表达的慢病毒载体转染细胞株。与SW480-CON组和SW480-pc-NC组比较,SW480-pc-CDK5RAP1组细胞的CDK5RAP1表达水平、细胞存活率、细胞克隆率、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数量、细胞成球率及β-Catenin、c-Myc、CD133、CD44、SOX2蛋白表达水平均显著升高,Axin1蛋白表达水平显著降低(P均<0.05)。与HCT-116-CON组和HCT-116-si-NC组比较,HCT-116-si-CDK5RAP1组细胞的CDK5RAP1表达水平、细胞存活率、细胞克隆率、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数量、细胞成球率及β-Catenin、c-Myc、CD133、CD44、SOX2蛋白表达水平均显著降低,Axin1蛋白表达水平显著升高(P均<0.05)。HLY78可促进过表达CDK5RAP1的SW80细胞的增殖、迁移、侵袭及干性,也可逆转CDK5RAP1低表达对HCT-116细胞增殖、迁移、侵袭和干性的抑制。si-CDK5RAP1组裸鼠移植瘤的质量较CON组和si-NC组均显著降低(P均<0.05),体积也显著缩小。结论CDK5RAP1靶向Wnt/β-catenin信号通路参与CRC的发生和进展。敲低CDK5RAP1表达可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭和干性。

TBL1XR1通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭

目的探讨转导蛋白(β)样1 X连锁受体1(TBL1XR1)通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭的机制。方法使用基因表达谱交互分析工具(GEPIA 2.0)、免疫组化和Western blotting评估TBL1XR1在卵巢癌和正常卵巢组织中的差异表达;评估TCGA数据库中TBL1XR1与卵巢癌患者总生存期的相关性,对TBL1XR1高、低表达组之间的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析;分别采用伤口愈合实验、Transwell基质胶侵袭实验检测TBL1XR1对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测敲低或过表达TBL1XR1后Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达水平的变化;TOP/FOP荧光素酶报告基因检测TBL1XR1对Wnt/β-catenin信号通路活性变化的影响。结果卵巢癌组织中TBL1XR1表达水平高于正常卵巢组织,低表达组卵巢癌患者总生存期长于高表达组;GO和KEGG分析结果提示,TBL1XR1的生物学功能与激素转运、激素分泌、激素分泌的调节及肽转运、神经活性配体-受体相互作用相关;敲低TBL1XR1可显著抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭,且Wnt3a能逆转这一效应,过表达TBL1XR1可显著提高卵巢癌细胞迁移和侵袭能力;下调TBL1XR1表达可显著降低Wnt/β-catenin信号通路的活性及蛋白表达水平。结论TBL1XR1在卵巢癌中高表达且与卵巢癌患者不良预后相关,TBL1XR1能够通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,可能作为促癌因子在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用。

转录因子TEAD4调控WNK1表达介导Wnt/β-catenin信号通路促进结肠癌增殖和迁移

目的探究转录因子TEA结构域转录因子(TEAD)4通过调控赖氨酸缺乏激酶(WNK)1表达介导Wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路促进结肠癌的增殖和迁移。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TEAD4在正常人结肠上皮细胞NCM-460和人结肠癌细胞系SW620、SW480、LOVO、HCT 116中的表达情况。构建低表达TEAD4和WNK1的SW620和LOVO细胞,并通过平板克隆实验和细胞划痕实验评估TEAD4和WNK1对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响。通过生物分析找到TEAD4与WNK1启动子之间的结合位点序列,运用染色质免疫沉淀技术(ChIP)-qPCR验证TEAD4与WNK1启动子的结合情况。在沉默TEAD4的细胞中进一步过表达WNK1检测细胞增殖、迁移和Wnt/β-catenin信号通路的变化。结果TEAD4在结肠癌细胞中显著高表达(P<0.05)。敲低TEAD4显著抑制结肠癌细胞的增殖和迁移(P<0.01)。沉默TEAD4能显著抑制WNK1的表达(P<0.01)。通过抑制Wnt/β-catenin信号通路显著减弱结肠癌细胞的增殖和迁移(P<0.01)。在沉默TEAD4的细胞中进一步过表达WNK1,部分回调细胞的增殖、迁移能力,显著激活Wnt/β-catenin信号通路(P<0.05)。结论转录因子TEAD4促进WNK1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进结肠癌的增殖和迁移。

沉默lncRNA ST7-AS1通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的实验研究

目的:探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)致癌性抑制基因7反义RNA1(ST7-AS1)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:肝癌细胞系HCCLM3分成Control组、Vector组、ST7-AS1组、sh-NC组、sh-ST7-AS1组和sh-ST7-AS1+Wnt/β-catenin通路激动剂(SKL2001)组。结果:与Control组比较,ST7-AS1组HCCLM3细胞的吸光度(A570)值及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vemintin)、Wnt1和β-catenin的表达升高,克隆数量和迁移、侵袭数目增多,上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和GSK-3β的表达降低(P<0.05)。Wnt/β-catenin通路激动剂SKL2001可部分逆转沉默ST7-AS1对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭的影响(P<0.05)。结论:沉默ST7-AS1可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

丹参多酚酸盐抑制Wnt/β-catenin和TGF-β_(1)/Smad3信号通路激活抗纤维化及肾脏保护机制研究

目的:本研究探讨丹参多酚酸盐对慢性肾脏病(CKD)肾脏保护作用,并探讨其对肾脏纤维化的作用及分子机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为四组,每组6只,随机分为:(1)假手术组(Sham);(2)5/6肾切除组(CKD);(3)5/6肾切除+丹参多酚酸盐组100 mg/kg(CKD+Salvianolate);(4)5/6肾切除+吡非尼酮组(250 mg/kg)(CKD+Pirfenidone)。建立5/6肾脏切除的CKD大鼠模型,分别给予丹参多酚酸盐以及吡非尼酮进行干预,检查肾脏功能、肾脏损伤和纤维化指标。免疫组化和western-blot检测大鼠肾脏中Wnt/β-catenin和TGF-β_(1)/Smad3以及α-SMA和E-cadherin的表达水平。结果:丹参多酚酸盐改善CKD肾功能,降低血清肌酐(Scr),血尿素氮(BUN)水平。组织病理显示丹参多酚酸盐减轻肾小管损伤和细胞外基质(ECM)成分的沉积。丹参多酚酸盐能显著抑制上皮-间质转化(EMT)的标志蛋白α-SMA的表达,促使E-cadherin恢复。Wnt/β-catenin和TGF-β_(1)/Smad3在慢性肾脏病大鼠模型明显活化,丹参多酚酸盐治疗能明显抑制Wnt/β-catenin和TGF-β_(1)/Smad3的表达。结论:丹参多酚酸盐治疗可以改善肾脏功能,抑制肾脏纤维化发挥肾脏保护作用与Wnt/β-catenin和TGF-β_(1)/Smad3信号通路激活抑制有关,是肾脏纤维化的一种新型治疗策略。

红细胞沉降率、血清白蛋白及dickkopf WNT信号通路抑制剂1在多发性骨髓瘤中的表达及对预后的预测价值分析

目的探讨红细胞沉降率(ESR)、血清白蛋白(ALB)、dickkopf WNT信号通路抑制剂1(DKK1)在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及对预后的预测价值。方法选取106例MM患者作为MM组,另选取同期100例健康体检者作为健康对照组,比较两组受试者ESR、ALB、DKK1水平。根据预后情况,将MM患者分为死亡组(n=14)和生存组(n=92),比较两组患者ESR、ALB、DKK1水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ESR、ALB、DKK1单独及联合检测对MM的诊断价值及对MM患者预后的预测价值。结果MM组患者ESR、DKK1均明显高于健康对照组,ALB明显低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。死亡组患者ESR、DKK1均明显高于生存组,ALB明显低于生存组,差异均有统计学意义(P<0.01)。ROC曲线显示,ESR、ALB、DKK1联合检测对MM的诊断价值及对MM患者预后的预测价值均高于任一指标单独检测。结论ESR、DKK1在MM中高表达,ALB在MM中低表达,ESR、ALB、DKK1联合检测对MM具有较好的诊断效能,可作为MM发生发展及预后判断的辅助参考指标,值得临床推广应用。