丹龙醒脑方促进脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞增殖与β-catenin、Wnt-3a表达及其机制的研究

目的探究丹龙醒脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区内源性神经干细胞增殖与β-catenin、Wnt-3a表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组(西药组)、丹龙醒脑方小剂量组(丹小组)、丹龙醒脑方大剂量组(丹大组),线栓法制备局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤模型,再灌注7 d后取大鼠缺血侧脑组织。采用Brd U掺入法记录海马齿状回颗粒下区Brd U阳性细胞数目;采用RT-q PCR法检测海马总β-catenin、Wnt-3a m RNA表达;采用Western Blot法检测海马总β-catenin、胞浆β-catenin、Wnt-3a蛋白表达。结果与假手术组比较,其余各组Brd U阳性细胞数、β-catenin、Wnt-3a蛋白及m RNA的表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,西药组、丹小组、丹大组Brd U阳性细胞数、β-catenin、Wnt-3a蛋白及m RNA表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论丹龙醒脑方可能通过激活β-catenin及Wnt-3a表达促进神经干细胞增殖。

脊髓损伤后Wnt-3a表达对神经干细胞增殖的影响

目的研究大鼠脊髓损伤后Wnt-3a信号蛋白表达及其对脊髓神经干细胞增殖的影响。方法选用30只SD成年雌性大鼠,随机分为A组(正常对照组,n=5)和B组(脊髓损伤组,n=25)。A组不损伤脊髓,B组在大鼠T_(9～10)节段采用Allen打击法造成脊髓损伤,于造模后1、3、7、14、28 d取材。对距离损伤中心5 mm脊髓行免疫组化染色,检测和比较两组Wnt-3a表达动态变化及内源性神经干细胞增殖,并统计分析两者相关性。结果 A组大鼠脊髓中央管周围和外周软膜仅有极少量Wnt-3a表达,BrdU阳性细胞也不明显,白质中几乎没有。B组大鼠损伤1 d后脊髓中央管周围和外周软膜即有BrdU阳性细胞和Wnt-3a表达,3 d后表达明显增多,7 d后达到高峰,14 d后逐渐下降,28 d后仅有少量表达。统计软件分析显示Wnt-3a表达与Brdu表达具有相关性。结论大鼠脊髓损伤后Wnt-3a表达增多,可能促进内源性神经干细胞增殖。

小鼠Wnt-3a基因真核表达载体的构建及其在cos-7细胞中的表达

目的:克隆小鼠胚脑中Wnt-3a基因片段,构建pSecTag2／Hygro B-Wnt3a 真核表达载体,观察其在cos-7细胞中的表达,为基因治疗脊髓损伤提供实验依据。方法:实验于2004-09／2005-03在安徽医科大学分子生物学实验室完成。选取清洁级孕13．5 d的KM小鼠1只,脱颈处死,冰冷条件下迅速取出胚鼠,解剖显微镜下剥离胚脑,在无RNA酶污染的条件下迅速提取胚脑总RNA。利用反转录聚合酶链方法扩增小鼠胚脑Wnt-3a基因片段,将该基因片段克隆入T载体,聚合酶链反应法筛选并测序,双酶切后构建重组真核表达载体pSecTag2／Hygro B-Wnt3a。转染并筛选稳定表达的cos-7细胞,Western blot鉴定重组Wnt-3a蛋白的表达。结果:①反转录聚合酶链反应获得目的基因小鼠Wnt-3a cDNA:自胚鼠脑组织总RNA经反转录聚合酶链反应扩增后,凝胶电泳可见约1．1kb的特异性扩增片段,与预期获得产物大小相符。②pMD18-T/Wnt3a克隆质粒聚合酶链反应初步筛选与测序:测序报告所克隆的Wnt-3a为1 058 bp,通过Blast同源性分析,与GeneBank收录的序列一致,克隆小鼠Wnt-3a 基因获得成功。③真核表达载体pSecTag2／Hygro B-Wnt3a的双酶切及测序:随机挑选10个克隆,聚合酶链反应扩增筛选出阳性克隆5个,经 XhoⅠ和HindⅢ双酶切鉴定、测序及。Blast分析鉴定重组质粒构建成功。④Western Blot鉴定重组小鼠Wnt-3a蛋白在cos-7细胞中的表达:脂质体转染cos-7后48 h,Western Blot鉴定出在细胞内存在Wnt-3a蛋白的表达,转染pSecTag2／Hygro B-Wnt3a的cos-7细胞裂解液在45KD处出现阳性条带,而培养上清中未能检测到蛋白的表达。结论:小鼠胚脑Wnt-3a基因的真核表达载体pSecTag2／Hygro B-Wnt3a 构建成功,转染cos-7细胞后能够表达重组Wnt-3a蛋白。

小鼠Wnt-3a基因在NIH3T3细胞中的表达及其活性的初步分析

目的:表达具备生物活性的重组小鼠Wnt-3a信号蛋白.方法:应用脂质体转染试剂将重组真核表达载体pSecTag2/HygroB-Wnt3a转染并筛选稳定表达的NIH3T3细胞,WesternBlot鉴定重组Wnt-3a蛋白的表达,并对Wnt3a/NIH3T3细胞的融合密度及抗凋亡能力给予检测.结果:Wnt-3a信号蛋白在Wnt3a/NIH3T3细胞中获得稳定表达,Wnt-3a信号蛋白能够明显提高NIH3T3细胞的融合密度及抗凋亡能力.结论:在NIH3T3细胞中表达的重组Wnt-3a信号蛋白具备生物活性.

Wnt-3a/eGFP双表达基因慢病毒载体的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建双表达基因慢病毒载体pLV.EX3d.P/puro-EF1A>Wnt-3a>IRES/eGFP,用携带目的基因Wnt-3a及示踪基因增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的慢病毒转导大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs),建立能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型。方法基于GatewayTM技术构建双表达基因慢病毒载体,经293FT包装并释放出病毒转导rBMSCs,检测Wnt-3a以及β-catenin的表达水平。结果经测序证实目的基因Wnt-3a及示踪基因eGFP片段按正确方向重组入目的载体中。用含Wnt-3a/eGFP的病毒上清转导rBMSCs,转导率超过85%。RT-PCR证实rBMSCs-Wnt3a过表达wnt-3a和β-catenin。结论携带目的基因Wnt-3a及示踪基因eGFP的慢病毒可以稳定转染rBMSCs,构建了能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型。

振荡电场对大鼠损伤脊髓组织中Wnt-3a表达及运动能力的影响

背景:Wnt信号通路能够刺激神经干细胞增殖和分化,促进脊髓损伤的修复,而电场刺激就可以改变Wnt信号通路蛋白的表达。目的:探讨振荡电场刺激对脊髓损伤大鼠局部Wnt-3a蛋白表达以及运动功能恢复的影响。方法:Allen’s打击法建立36只SD大鼠脊髓损伤模型,随机等分为振荡电场刺激组和脊髓损伤组,两组均置入刺激电极,仅振荡电场刺激组施加振荡电场干预。结果与结论:振荡电场刺激组和脊髓损伤组大鼠在造模后3 d时的BBB评分和脊髓中Wnt-3a的表达水平接近,而在造模后7 d和14 d时BBB评分和脊髓中Wnt-3a的表达水平差异有显著性意义,提示振荡电场刺激可以促进脊髓损伤大鼠的运动功能恢复;损伤脊髓组织中Wnt-3a的表达发生变化,提示振荡电场刺激促进Wnt信号蛋白在脊髓损伤的早期被激活,其可能与振荡电场刺激促进脊髓损伤的修复有关。

Wnt-3a和β-catenin在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨Wnt-3a蛋白和β-catenin蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织及宫颈鳞癌(SCC)组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测20例正常宫颈组织(正常组)、24例宫颈上皮内瘤变组织(CIN组)及56例宫颈鳞癌组织(SCC组)中Wnt-3a蛋白和β-catenin蛋白的表达。结果 Wnt-3a和β-catenin在正常宫颈组织、CIN组织及SCC组织中的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01),β-catenin的异常表达与病理分级有关,与临床分期无关,而Wnt-3a与两者均无关。在SCC组织中Wnt-3a与β-catenin的表达有相关性(r=0.181)。结论 Wnt-3a和β-catenin可能参与了宫颈鳞状上皮的恶性转化过程,在由CIN发展到SCC的过程中起了一定的促进作用。

着床前小鼠孤雌囊胚及正常囊胚上Wnt-3a的差异表达研究

为了研究Wnt-3a在小鼠着床前,孤雌囊胚和正常胚胎上的表达差异情况。采用激光扫描共聚焦显微技术和半定量RT-PCR检测方法,对孤雌囊胚和正常囊胚上Wnt-3a的表达以及分布情况进行定性和定量的检测。利用激光扫描共聚焦显微技术检测发现:在着床前的小鼠孤雌囊胚和正常囊胚上都有Wnt-3a蛋白质的表达,且只在滋养层细胞中表达;通过半定量RT-PCR检测发现:着床前小鼠孤雌胚胎与正常胚胎相比,Wnt-3a的转录水平没有显著性差异。所以Wnt-3a在着床前小鼠孤雌胚胎和正常胚胎中都有表达;而且其转录水平在这2种胚胎中没有显著性差异。

Wnt-3 a对Connexin43及相关基因的表达调控

目的探讨信号分子Wnt3a蛋白对缝隙连接蛋白43(connexin43)的表达调控作用,以期揭示Wnt3a与connexin43在心脏发育过程中的特定联系与作用。方法以本室自行构建pCD- NA3．1/wnt-3a真核表达载体转染大鼠心肌细胞系H9c2,在细胞水平通过RT-PCR及Western-blot实验方法研究Wnt-3a对其中Cx43表达及心脏发育相关基因的影响。结果经转染wnt-3a后,H9c2细胞系中connexin43的表达明显上调,同时与心脏发育相关的GATA4,Nkx2．5基因表达也明显上调。结论Wnt3a信号通路对connexin43表达存在影响；并可能对心脏发育存在调控作用。

高压氧促HIBD新生大鼠内源性神经干细胞增殖过程中Wnt-3蛋白的变化

目的近年来的研究已经证实高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)能够促进缺氧缺血性脑损伤(Hy-poxic ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞(Neuralstem cells,NSCs)的增殖,并且发现Wnt信号途径参与神经干细胞的增殖,故本课题将探讨HBO对HIBD新生大鼠脑内源性NSCs增殖分化过程中Wnt-3蛋白的变化的影响及其它们之间的相关性。方法7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为正常对照组(CON),缺氧缺血性脑损伤组(HIBD)及高压氧组(HBO)。采用经典的Rice法制成HIBD模型,HBO组在HIBD后3h内进行HBO治疗(压力为2个绝对大气压,稳压1h,每日1次,连续7d)。采用BrdU/nestin,Wnt-3/nestin免疫荧光双标法,检测HIBD后6h,24h,3d,7d,14d,缺血侧侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)增殖的NSCs及Wnt-3蛋白的动态变化,激光共聚焦显微镜(LSM510,Zeiss)分析细胞内nestin蛋白与Wnt-3蛋白的荧光强度,统计学分析二者相关性。Western blotting法检测缺血侧大脑半球nestin、Wnt-3总蛋白的动态变化。结果SVZ区BrdU+nestin+细胞于HBO治疗后3h开始增加,7d达最高水平,显著高于CON组与HIBD组(P<0.01),14d时BrdU+nestin+细胞数开始下降,但仍多于CON和HIBD两组(P<0.05);NSCs细胞膜表面Wnt-3蛋白于HBO治疗后3h开始增加,3d时达最高水平,并维持较高水平至14d时开始下降;直线回归分析示细胞内Wnt-3蛋白与nestin蛋白呈直线相关(r=0.893,P<0.05);Western blotting分析示缺血侧大脑半球Wnt-3蛋白于HBO后3d,7d一直维持较高水平,显著高于其他各时间点(P<0.05),至14d时表达开始下降;nestin总蛋白水平于HBO治疗后21h开始增加(P<0.05),7d达最高水平,后下降。结论高压氧可以促进HIBD新生大鼠内源性NSCs的增殖,其机制与Wnt信号活化有关。[中国当代儿科杂志,2007,9(3):241-246]

温经通络汤联合针灸治疗风寒湿痹型类风湿关节炎疗效及对血清Wnt-3α、β-catenin、BMP-2的影响

目的观察温经通络汤联合针灸治疗风寒湿痹型类风湿关节炎疗效及对血清分泌型糖蛋白(Wnt)-3α,β-链蛋白(β-catenin)及骨形成蛋白(BMP)-2的影响。方法将140例风寒湿痹型类风湿关节炎患者随机分为2组,对照组70例给予塞来昔布+来氟米特治疗,观察组70例在此基础上加用温经通络汤联合针灸治疗,2组均治疗4周后统计临床疗效和不良反应发生情况,观察2组治疗前后血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、Wnt-3α、β-catenin、BMP-2水平及类风湿关节炎疾病活动性评分(DAS28)、简化疾病活动指数(SDAI)评分、临床疾病活动指数(CDAI)评分、主要证候评分变化情况。结果观察组治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P<0.05);2组治疗后ESR、CRP、RF、Wnt-3α、β-catenin、BMP-2水平及DAS28评分、SDAI评分、CDAI评分和关节晨僵屈伸不利、关节疼痛且痛有定处、关节肿胀、腰膝酸软及肢冷不温评分均显著降低(P均<0.05),观察组治疗后以上指标均显著低于对照组(P均<0.05)。结论温经通络汤联合针灸治疗风寒湿痹型类风湿关节炎可显著缓解关节疼痛,控制病情进展,改善关节功能,下调Wnt-3α、β-catenin及BMP-2水平,且安全性良好。

血管分泌因子Rspondin3调控Wntβ-catenin信号通路促进急性肺损伤组织修复的机制研究

目的:探讨血管分泌因子Rspondin3通过wnt/β-catenin信号通路参与急性肺损伤大鼠模型肺的分子机制。方法:40只SPF级SD大鼠建立急性肺损伤模型,将大鼠分为对照组(n=10)、模型组(n=10),阴性对照(Negative control,NC)组(n=10)和Rspondin3组(n=10),模型组、NC组、Rspondin3组建立LPS诱导的大鼠急性肺损伤模型,NC组和Rspondin3建立模型后分别通过尾静脉注射(Negative control,NC)质粒和Rspondin3过表达质粒,对照组和模型组给与等量生理盐水灌,2周后,HE染色检测各组大鼠病肺组织理病变水平,通过Elisa实验检测各组大鼠大鼠肺组织白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1),白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2),白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平的变化,Western blot检测大鼠肺组织wnt-3a及β-环联蛋白(β-catenin)蛋白表达水平,透射电镜技术检测各组大鼠肺组织超微结构变化。结果:与对照组相比,模型组和NC组组织可见明显肺组织损伤,Rspondin3组大鼠肺组织病理损伤程度相对降低,Elisa结果表明,与对照组相比,模型组、NC组和Rspondin3组大鼠肺组织炎症因子IL-1、IL-2和IL-6表达水平升高,与模型组和NC组相比,Rspondin3组大鼠肺组织炎症因子IL-1、IL-2和IL-6表达水平降低,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。Western blot结果表明,与对照组相比,模型组、NC组大鼠Wnt-3a和β-catenin蛋白表达水平降低,与模型组和NC组相比,Rspondin3组大鼠肺组织中Wnt-3a和β-catenin蛋白表达升高降低,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。透射电镜技术表明,与对照组相比,模型组和NC组组织肺组织结构松散,细胞核崩解,细胞结构不完整,细胞空泡化,而Rspondin3组大鼠肺组超微结构表明细胞结构损伤降低,细胞核崩解缓解,细胞结构相对完整,结论:过表达Rspondin3对大鼠急性肺损伤肺组织具有保护作用,其机制可能与激活Wnt-3a/β-catenin信号通路的激活有关。

基于Wnt3a/β-catenin通路探究下调miR-16对类风湿性关节炎模型大鼠的干预效果

目的 :探究下调miR-16对类风湿性关节炎模型大鼠的干预效果及其作用机制。方法 :将SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、阴性对照组(NC)和实验组。通过全弗氏佐剂(CFA)与Ⅱ型胶原乙酸溶液注射关节构建模型组、NC组与实验组建立大鼠类风湿关节炎模型,造模后NC组和实验组分别经尾静脉注射5 nmol/L NC-antagomiR和miR-16-antagomiR,对照组和模型组给予等量生理盐水,以足趾肿胀度为模型标准。qPCR检测各组大鼠滑膜组织miR-16表达水平,对大鼠膝关节进行H-E染色分析并进行病理评分,ELISA检测大鼠血清白介素1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,免疫印迹检测大鼠滑膜组织Wnt家庭成员3a(Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结果 :qPCR结果显示,与对照组相比,模型组和NC组miR-16显著上调,实验组显著下调。与对照组相比,模型组、NC组、实验组大鼠足趾肿胀度及病理评分均显著升高;与模型组和NC组相比,实验组足趾肿胀度及病理评分显著降低。ELISA结果显示,与对照组相比,模型组、NC组、实验组血清IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α显著升高;与模型组和NC组相比,实验组显著降低,但仍高于对照组。免疫印迹结果显示,与对照组相比,模型组和NC组Wnt3a及β-catenin显著升高,而实验组显著降低。结论 :下调miR-16可抑制类风湿性关节炎模型大鼠炎症因子释放,降低组织炎性损伤,发挥骨保护作用,其机制可能与Wnt3a/β-catenin信号通路的调控相关。

膝骨关节炎中医证型与血清Wnt-3α、BMP-2及炎性因子的相关性

目的探讨膝骨关节炎中医证型与血清分泌型糖蛋白Wnt-3α、骨形成蛋白-2(BMP-2)及炎性因子的关系。方法选取2016年1月-2017年2月在我院治疗的膝骨关节炎患者174例,其中肝肾阴虚患者36例,脾肾阳虚患者52例,气滞血瘀患者44例,风寒湿痹患者42例,采用实时荧光定量PCR检测血清Wnt-3α和BMP-2表达,采用酶联免疫夹心法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP),采用魏氏法检测红细胞沉降率(ESR)。结果风寒湿痹型患者Wnt-3α和BMP-2表达量分别为(1.95±0.64)和(1.82±0.34),明显高于肝肾阴虚型、脾肾阳虚型和气滞血瘀型患者(P<0.05);风寒湿痹型患者TNF-α表达量为(36.11±8.10)pg/m L,明显高于肝肾阴虚型、脾肾阳虚型和气滞血瘀型患者(P<0.05);各中医证型IL-6、CRP和ESR比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论风寒湿痹型患者血清Wnt-3α、BMP-2及TNF-α表达明显升高,而肝肾阴虚型、脾肾阳虚型和气滞血瘀型患者各指标无明显差异。

Wnt3a基因多态性与崇仁麻鸡皮肤毛囊性状相关性研究

旨在基于基因多态性分析Wnt家族成员3a(wnt family member 3a,Wnt3a)基因遗传变异位点与崇仁麻鸡皮肤毛囊密度的相关性。本研究随机选取600只在相同环境和相同管理水平下饲养至上市日龄(120 d),健康且状况良好的崇仁麻鸡,其中原种母鸡200只,公鸡100只和B系母鸡200只,公鸡100只。屠宰后选取背部、胸部和大腿部皮肤相同的位置测量毛囊密度,通过皮肤组织切片HE染色的方法观察毛囊的形态结构并测量毛囊直径和皮肤厚度。采血提DNA用PCR扩增后直接测序的方法筛选Wnt3a基因遗传变异位点,并与鸡皮肤毛囊密度进行相关性分析。通过实时荧光定量PCR技术检测Wnt3a基因在不同皮肤部位的表达量。结果表明:1)原种和B系同性别同皮肤部位相比较,原种母鸡背部毛囊密度极显著高于B系(P<0.01),大腿部毛囊密度显著高于B系(P<0.05),背部和大腿部毛囊直径显著低于B系(P<0.05)。原种公鸡背部皮肤毛囊密度极显著高于B系(P<0.01),胸部毛囊密度极显著低于B系(P<0.01),背部和大腿部毛囊直径显著低于B系(P<0.05)。B系公鸡胸部皮肤厚度显著高于原种(P<0.05),B系公、母鸡大腿皮肤厚度均显著高于原种(P<0.05)。2)Wnt3a基因筛选出的3个SNPs位点与各部位皮肤毛囊密度进行相关性分析后发现,g.2555812 T>C和g.2555377 T>C位点的CC基因型个体背部皮肤毛囊密度显著高于其他基因型个体背部(P<0.05)。3)实时荧光定量PCR结果显示,Wnt3a基因在原种和B系鸡的3个皮肤部位的毛囊组织上都有比较高的表达量,且在原种背部的表达量显著高于在B系背部的表达量(P<0.05)。综上所述,崇仁麻鸡原种皮肤毛孔相较于B系更加细密,Wnt3a基因g.2555812 T>C位点的CC基因型和g.2555377 T>C位点的CC基因型是崇仁麻鸡皮肤毛囊的有利基因型,可选作鸡皮肤毛囊密度性状的分子标记。本研究探讨了作为毛囊生长发育的候选基因Wnt3a的遗传效应及SNPs与皮肤毛囊性状的相关性,以期为优质鸡胴体包装性状的分子标记筛选与标记辅助选择提供参考依据。

WISP-3与肿瘤的研究进展

Wnt-1诱导分泌蛋白3(WISP-3),是CCN家族成员之一,也称CCN6。它与大多数CCN家族成员的结构和功能相似,可编码多种细胞外基质蛋白,参与细胞的增殖分化与凋亡的调控,并可促进神经、血管、骨骼的发育。WISP-3表达水平的不同与多种恶性肿瘤的发生和发展有关,已成为CCN家族的研究热点之一。

WISP-3/CNN6与Caspase-8共结合在高氧诱导肺上皮细胞凋亡中的作用及其机制

目的探讨Wnt-1诱导信号通路蛋白3/调节蛋白6(WISP-3/CNN6)与半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)共结合在高氧诱导肺上皮细胞凋亡中的作用与可能机制.方法利用小干扰RNA和质粒转染实现对人肺上皮Beas-2B细胞中WISP-3/CCN6基因的沉默或过表达,分别将低表达或过表达WISP-3/CCN6的Beas-2B细胞置高氧(95%O2和5%CO2)或空气中处理0、24、48 h,通过蛋白免疫印迹法和流式细胞仪检测各组细胞中Caspase途径凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-3及活性片段cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-3和cleaved多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达量及Caspase-8活性,通过免疫共聚焦和免疫共沉淀检测WISP-3/CCN6与Caspase-8的蛋白相互作用.结果高氧刺激48 h,WISP-3/CCN6沉默的Beas-2B细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-3和cleaved PARP蛋白表达量均比0 h时增加(P均<0.017),且Caspase-8的活性增高(P<0.05);过表达WISP-3/CCN6的Beas-2B细胞中cleaved Caspase-8蛋白表达量比0 h时减少(P<0.017),cleaved Caspase-3和cleaved PARP的蛋白表达量在24 h时比0 h时升高、在48 h时比24 h时下降(P均<0.017).高氧刺激下,Beas-2B细胞中WISP-3/CCN6蛋白和Caspase-8蛋白结合减少.结论WISP-3/CCN6通过Caspase途径参与高氧诱导肺上皮细胞凋亡的调控,其作用可能通过与Caspase-8蛋白结合方式实现.

体外培养毛乳头细胞的versican基因表达变化

目的探讨versican基因及蛋白在体外培养的毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPC)中的表达变化,并研究其对DPC凝集性生长特性的影响。方法利用酶消化法分离培养DPC,并进行体外培养传代,观察不同代次DPC凝集性生长特性的变化。应用Western blot、RT-PCR检测DPC的β-catenin、versican的表达情况,对比研究其与DPC凝集性生长的关系。结果随着DPC由低代向高代分化,其凝集性生长特性逐渐减弱,versican表达水平逐渐降低。Wnt途径上调versican基因的表达,能够使高代DPC表达β-catenin、versican增强。结论versican基因和蛋白水平的表达与DPC凝集性生长呈正相关;versican基因是调控DPC凝集性生长的重要基因,versican的表达对毛囊(hair follicle,HF)的形成起着十分重要的作用,并在维护HF周期中扮演重要角色。

Wnt信号通路对成纤维细胞Rat-1生长及表型的调控

构建Wnt-3a的真核表达载体并稳定转染大鼠成纤维细胞Rat-1,建立Wnt信号通路持续激活的细胞模型,以探讨Wnt信号通路激活对该细胞的生长以及某些表型特征的影响。结果表明:Wnt信号通路持续激活时,Rat-1细胞形态表现为细胞长度的增加,具折光性以及呈绳索状的成束密集排布;MTT以及流式细胞仪检测表明稳定转染后细胞增殖率明显高于正常对照组,进入G2期的细胞增多,细胞增殖分裂能力增强;Transwell小室迁移实验证实转染组的细胞迁移率略高于对照组,但无显著性差异;体外划痕实验表明,稳定转染后的Rat-1细胞在划痕后伤口愈合时间显著缩短。结果提示:体外Wnt信号通路的激活能够引起成纤维细胞某些表型改变,并促进细胞增殖,加速体外伤口的修复。