梅花鹿茸Ⅰ型胶原对骨质疏松大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的研究梅花鹿茸I型胶原(SDC-I)对骨质疏松大鼠Wnt/β-Catenin信号通路的影响,探索SDC-I对骨质疏松大鼠的保护作用机制。方法应用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分成空白组,模型组, SDC-I低、中、高剂量组(0.05、0.1、0.2 g/kg),灌胃给药90 d后取材。应用X线仪及骨骼强度仪检测大鼠股骨密度(BMD)和最大载荷量;采用ELISA法检测大鼠血清中血清骨钙素(BGP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)水平;应用Real Time PCR(RT-PCR)技术检测Wnt/β-Catenin信号通路中β-链蛋白(β-Catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)的mRNA表达水平。结果与模型组相比,SDC-I作用的各组大鼠BMD、最大载荷量显著增高;血清中BGP水平增高而TRACP水平减低;Wnt通路相关β-Catenin、LRP5的mRNA表达水平显著增高。结论 SDC-I可显著提高骨质疏松大鼠的骨密度,其保护机制与上调骨质疏松大鼠骨中β-Catenin、 LRP5的m RNA表达,激活Wnt/β-Catenin信号通路相关。

尖锐湿疣组织中sFRP-1和wnt-1蛋白的检测

目的检测尖锐湿疣(CA)组织中sFRP-1,wnt-1蛋白表达,了解它们在CA发病中的可能作用。方法采用免疫组化法检测20例CA组织和15例正常包皮组织中sFRP-1,wnt-1蛋白表达。结果CA组织中sFRP-1的表达显著弱于正常包皮组织(P<0.001);wnt-1的表达强于正常包皮组织(P<0.05)。结论CA组织中sFRP-1和wnt-1的表达异常,提示sFRP-1/wnt-1信号通路可能参与CA的发病。

RNA干扰pygo2基因对人脑胶质母细胞瘤U251生物学行为及wnt通路的影响

目的研究pygo2在胶质瘤细胞系U251中的表达、功能及作用机制。方法利用反义pygo2转染U251,下调pygo2的表达,应用流式细胞术和MTT法,评价细胞生长、增殖、凋亡及周期变化;细胞克隆形成试验和transwell侵袭试验分析细胞的克隆形成能力和侵袭能力,采用Western印迹法检测通路蛋白的表达变化。结果转染反义pygo2后,pygo2表达降低,MTT结果显示转染反义pygo2后细胞生长受到抑制且凋亡细胞增加;流式细胞术提示G1期到S期阻滞,细胞克隆形成能力下降,侵袭能力均受到抑制,Western结果表明wnt通路相关蛋白c-myc和Cyclin D1在抑制pygo2表达后下降。结论 pygo2可促进人脑胶质瘤细胞生长、增殖,可能是胶质瘤治疗的有效靶点,其发挥作用可能与wnt通路密切相关。

基质细胞衍生因子-1及Wnt信号对肌成纤维细胞生物特性的影响

目的探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及Wnt信号通路对诱导生成的肌成纤维细胞的生物学特性的影响。方法首先体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为肌成纤维细胞(MF),然后改变SDF-1及(或)Wnt信号,通过划痕实验观察MF迁移能力的变化,qRT-PCr检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的改变。结果转化生长因子(TGF-β)及高浓度血清等条件的诱导,可使BMSCs分化为MF。阻断SDF-1或Wnt信号时,会显著抑制MF的迁移及Col-Ⅰ的分泌,阻断Wnt信号可明显抑制BMSCs向MF的分化。结论 SDF-1与Wnt信号参与调节MF的迁移及ColⅠ分泌,Wnt信号对BMSCs向MF分化具有重要作用。

核因子I-C调控人根尖牙乳头干细胞的分化

背景:体外过表达核因子I-C基因可促进人根尖牙乳头干细胞的分化,Wnt/β-catenin信号通路的激活也可促进人根尖牙乳头干细胞的分化,而且核因子I-C对间充质干细胞中Wnt/β-catenin通路具有调节作用。然而,核因子I-C能否通过激活人根尖牙乳头干细胞中Wnt/β-catenin通路进而影响细胞分化,目前尚未见报道。目的:探讨核因子I-C通过Wnt/β-Catenin信号通路调控人根尖牙乳头干细胞分化的作用。方法:玻片覆盖组织块法培养人根尖牙乳头干细胞,慢病毒转染过表达核因子I-C基因。①设置对照组、空载体组和过表达核因子I-C组,Western blot检测β-Catenin、LRP5和TCF7L2的表达。②设置对照组、空载体组、过表达核因子I-C组和过表达核因子I-C+DKK-1(Wnt通路抑制剂)组,细胞成骨诱导7 d后进行碱性磷酸酶染色及活性定量,细胞成骨诱导14 d后qPCR和Western blot检测Runt相关转录因子2、牙本质涎磷蛋白、骨钙素mRNA及蛋白的表达,茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果与结论:①与对照组、空载体组相比,过表达核因子I-C组人根尖牙乳头干细胞中Wnt/β-Catenin通路相关蛋白β-Catenin、LRP5、TCF7L2表达显著升高(P<0.01);②与对照组、空载体组相比,过表达核因子I-C组人根尖牙乳头干细胞中碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.01),Runt相关转录因子2、牙本质涎磷蛋白、骨钙素mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01),矿化结节数量显著增加(P<0.01);③与过表达核因子I-C组相比,过表达核因子I-C+DKK-1组人根尖牙乳头干细胞中碱性磷酸酶活性、Runt相关转录因子2、牙本质涎磷蛋白、骨钙素mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.05),矿化结节数量显著减少(P<0.05)。结果表明:核因子I-C能够激活人根尖牙乳头干细胞中Wnt/β-catenin信号通路,介导人根尖牙乳头干细胞的成骨/成牙分化。

Wnt-1在病理性瘢痕中的表达及意义

目的研究wnt-1在病理性瘢痕中的表达，探讨Wnt/β-catenin信号传导通路在病理性瘢痕发病机制中的作用。方法应用免疫组化技术检测Wnt-1在30例瘢痕疙瘩（A组）、30例增生性瘢痕（B组）及20例正常皮肤（C组）中的表达，并进行统计学分析。结果Wnt-1在A、B组中的表达与C组比较，其差异具有统计学意义（P〈0．05），但A、B组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论wnt．1可能是病理性瘢痕形成的重要机制，其导致的Wnt/β-catenin信号传导通路的激活在病理性瘢痕的形成机制中可能起着重要作用。

TBL1XR1介导上皮-间质转化和干细胞特性调控头颈部鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

[目的]阐明转导素β1X连锁受体蛋白1 (transducin β-like 1 X-linked receptor 1,TBL1XR1)可介导上皮-间质转化和干细胞特性,从而调控头颈鳞癌细胞的迁移、侵袭。[方法]利用UALCAN数据库网站搜索TBL1XR1在头颈鳞癌组织及癌旁组织中的表达情况,应用Cbioprotal在线分析平台分析癌症基因组图集(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中523例头颈鳞癌RNA-SEQ数据。将慢病毒介导的TBL1XR1过表达载体、沉默载体和对应空白载体分别转染头颈鳞癌细胞Tu686。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验评价Tu686细胞的迁移、侵袭能力;Western blot、qRT-PCR检测上皮-间质转化标志物表达;肿瘤球形成实验、qRT-PCR检测干细胞特性;抑制Wnt/β-catenin信号通路后检测TBL1XR1过表达引起的细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化和干细胞特性。[结果] TBL1XR1 mRNA在头颈鳞癌组织中的表达明显高于相应癌旁组织(P<0.001)。过表达TBL1XR1的Tu686细胞划痕愈合能力(90%±4%vs 53%±6%)、Transwell迁移(0.68±0.04 vs 0.32±0.03)、侵袭能力(0.59±0.04 vs 0.26±0.04)较对照组显著性增强(P均<0.05)。TBL1XR1表达被抑制时,细胞划痕愈合能力(70%±4%vs 96%±5%)、Transwell迁移(0.32±0.06 vs 0.63±0.08)、侵袭能力(0.24±0.04 vs 0.52±0.05)较对照组显著性降低(P均<0.05)。TBL1XR1过表达后,Tu686细胞的间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin表达升高,上皮细胞标志物E-cadherin表达降低;肿瘤球形成数较对照组明显增多(41±9 vs 13±4,P<0.05),肿瘤干细胞标志物ALDH1、CD44、CD133表达上调。抑制Wnt/β-catenin信号通路可部分逆转TBL1XR1过表达引起的迁移、侵袭、上皮-间质转化及干细胞特性改变。[结论] TBL1XR1可在体外介导上皮-间质转化和干细胞特性,进而促进头颈鳞癌细胞迁移、侵袭,其调控机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。