Wnt1基因在乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中的表达与多柔比星化疗抵抗关系的研究

目的探讨Wnt1在乳腺癌细胞中的表达及其在多柔比星化疗抵抗中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Wnt1基因在乳腺癌细胞中的表达;双链siRNA转染阻断Wnt1基因,RT-PCR和免疫印迹法(Western blotting)检测基因沉默效果;细胞毒实验(MTT)法检测乳腺癌细胞的生长抑制率。结果对照组、siRNA干扰组、多柔比星处理组,Wnt1沉默MCF-7/ADR+ADM组的细胞存活率分别为(100±5.2)%,(84.3±4.1)%,(68.7±4.7)%和(42.3±3.5)%,其他3组的细胞存活率与对照组比较,差异有统计学意义(F=5.381,P<0.05)。Wnt1沉默MCF-7/ADR+ADM组与其他3组比较细胞的存活率均降低,与对照组、siRNA干扰组和多柔比星处理组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);Wnt1在乳腺癌细胞呈高表达,siRNA沉默Wnt1基因,可以显著下调Wnt1mRNA和蛋白的表达。结论 Wnt1基因在乳腺癌细胞呈高表达,沉默Wnt1基因下调Wnt1基因的转录和翻译,能显著增强乳腺癌细胞对多柔比星的敏感性,部分逆转其对多柔比星的耐药性。

基于CRISPR/Cas9系统分析草地贪夜蛾Wnt1基因的生物学功能

为明确草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda中Wnt1基因的生物学功能,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术检测草地贪夜蛾胚胎发育期Wnt1基因的表达谱,利用CRISPR/Cas9系统对Wnt1基因进行定向敲除,并通过qPCR技术检测草地贪夜蛾Wnt1基因缺失突变体中与昆虫发育相关基因的表达水平。结果显示,Wnt1基因在草地贪夜蛾整个胚胎发育期均有表达,在胚胎发育早期(6 h)表达水平最高。将SfWnt1-sgRNA和Cas9蛋白混合注入草地贪夜蛾卵中,胚胎死亡率明显升高,同时获得了Wnt1基因缺失的草地贪夜蛾突变体。突变率与注射浓度相关,注射浓度越高,突变率越高;当SfWnt1-sgRNA和Cas9蛋白混合后终浓度均为300 ng/μL时,注射的724粒卵中获得体节缺陷突变体52头,附肢缺陷突变体64头,组织特化突变体20头;SfWnt1-sg RNA和Cas9蛋白混合后终浓度均为100 ng/μL时,注射的413粒卵中最终获得体节缺陷突变体14头,附肢缺陷突变体22头,组织特化突变体7头;这些突变体均无法存活至化蛹。草地贪夜蛾Wnt1基因被敲除后,与昆虫发育密切相关的17个基因表达水平均显著下调。表明Wnt1基因在草地贪夜蛾胚胎发育过程中发挥着至关重要的作用。

香连片对小鼠溃疡性结肠炎癌变过程中WIF-1和SFRP-1mRNA表达的影响

目的探讨香连片对小鼠溃疡性结肠炎癌变过程中Wnt抑制因子1（WIF-1）和分泌型卷曲相关蛋白（SFRP-1）的影响。方法将60只BALB／C小鼠随机分为空白组（10只）、模型组（14只）、香连片低剂量组（12只）、香连片高剂量组（12只）和柳氮磺胺嘧啶组（12只）。除空白组外，其余各组采用DMH／DSS复合法诱导小鼠溃疡性结肠炎癌变模型，造模时间为18周。各组于造模前1周给予相应的干预措施，至造模的第10周结束；其中空白组和模型组予等量蒸馏水，各给药组给予相应的药物。用药时间为11周。观察小鼠体质量、粪便、耗食和精神状态等一般情况，结肠肿瘤的形成情况，HE染色镜下病变肠组织形态学改变，并以Real-timePCR检测WIF-1和SFRP-1mRNA的表达。结果在造模后期（第13-18周），模型组小鼠耗食减少，精神委靡，体质量明显减轻，与空白组比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）；而香连片低剂量和高剂量组小鼠体质量下降与模型组比较无明显差异（P〉0．05）。模型组结肠黏膜可见团块状肿块形成，HE染色可见模型组小鼠结肠黏膜腺体增生明显、细胞排列紊乱、核染色加深；香连片低剂量、高剂量组虽可见腺体增生，但细胞分化未见异型性。香连片各剂量组WIF-1mRNA表达上调，与模型组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；香连片各剂量组与模型组比较，SFRP-1mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论香连片IJ以通过减轻小鼠溃疡性结肠炎延缓肠黏膜细胞的不典型增生，其机制与上调WIF-1基因的表达，从而抑制Wnt／13-eatenin信号通路的异常激活有一定的关系。

长链非编码RNA HCG18对人卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(HCG18)对人卵巢癌细胞SKOV3及顺铂耐药细胞SKOV3/DDP耐药性的影响及其作用机制。方法采用RT-PCR检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞中HCG18和miR-449的表达水平。采用HCG18 siRNA转染细胞,经12.5μg/ml顺铂处理48 h后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况及细胞周期,荧光素酶报告基因实验检测HCG18、miR-449和Wnt1基因之间的靶向作用。结果与人正常卵巢上皮细胞NOEC比较,SKOV3中HCG18表达明显增高(P<0.05),而miR-449的表达明显降低(P<0.05)。HCG18 siRNA转染后,顺铂处理后的SKOV3和SKOV3/DDP细胞活性均明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率和G_(2)/M期细胞占比均明显高于对照组(P<0.05)。miR-449 inhibitor转染SKOV3及SKOV3/DDP细胞后,HCG18 siRNA对细胞活性、凋亡和细胞周期的不利影响均被部分逆转(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,HCG18可靶向结合miR-449的3'-UTR区,miR-449可靶向结合Wnt1基因的3'-UTR区。转染HCG18 siRNA可明显上调miR-449的表达水平(P<0.05)。单独转染HCG18 siRNA或miR-449 mimic均可明显下调Wnt1的mRNA表达水平(P<0.05)。结论下调HCG18可通过miR-449/Wnt1信号通路抑制人卵巢癌细胞活性,促进癌细胞凋亡,诱导细胞周期G_(2)/M期阻滞,进而提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。

WISP-1——开辟探究肿瘤形成发展的新途径

Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP-1),是高半胱氨酸蛋白61/结缔组织生长因子/肾母细胞瘤过度表达基因家族成员之一。WISP-1具有促进细胞增殖、介导细胞黏附、刺激细胞转移、促进有丝分裂及细胞外基质的形成等生物学功能。WISP1的表达水平与多种组织恶性肿瘤的发生、进展、浸润、转移及其预后有着密切的联系。在不同的肿瘤组织中,WISP-1的分布及生物学作用不同,WISP-1正向或负向调节的肿瘤发展。WISP-1促进肿瘤的机制及调节途径在肿瘤诊断学及治疗学上有广阔的应用背景。