中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

ADAMDEC1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞的生长和转移

目的:探究敲减解整联蛋白及金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM)结构域样癸蛋白1(ADAM domain-like decysin 1,ADAMDEC1)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:利用GEPIA和UALCAN在线数据库对ADAMDEC1在胰腺癌组织中的表达情况进行分析。Western blot检测人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2和PANC-1)和胰腺导管细胞系(hTERT-HPNE)中ADAMDEC1的蛋白表达水平。采用CCK-8实验、集落形成实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞中迁移、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平的影响。此外,通过恢复性实验,检测Wnt/β-catenin信号通路激动剂CHIR-99021对敲减ADAMDEC1抑制胰腺癌细胞生长和转移作用的影响。结果:(1)ADAMDEC1在胰腺癌中高表达;(2)敲减ADAMDEC1表达后,胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降;(3)敲减ADAMDEC1后,E-cadherin蛋白表达增加,而基质金属蛋白酶9、N-cadherin和vimentin蛋白表达减少,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达亦减少;(4)CHIR-99021与ADAMDEC1小干扰RNA共处理胰腺癌细胞,可逆转敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:ADAMDEC1在胰腺癌中高表达,可通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

右美托咪定通过调控白细胞介素-17及转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

基于磷脂酰肌醇3激酶与苏氨酸蛋白激酶1信号通路小檗碱调节巨噬细胞极化机制研究

目的探究小檗碱对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人髓系白血病单核细胞(THP-1)巨噬细胞极化的影响和可能作用机制。方法采用佛波酯(PMA)将THP-1细胞诱导成巨噬细胞,加入不同浓度的小檗碱,分别为对照组、小檗碱5μmol/L组、小檗碱10μmol/L组、小檗碱20μmol/L组、小檗碱40μmol/L组、小檗碱50μmol/L组,干预24 h或48 h。采用细胞计数8试剂盒检测细胞活力,筛选小檗碱最佳浓度和时间。将PMA诱导的THP-1巨噬细胞分为空白组、模型组、小檗碱组、抑制剂组、小檗碱+抑制剂组。酶联免疫吸附测定检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))的含量;定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、苏氨酸蛋白激酶1(Akt1)mRNA表达情况;Western blot检测Akt1和磷酸化Akt1(p-Akt1)抗体蛋白含量。结果干预24 h时,与对照组比较,小檗碱40μmol/L组和50μmol/L组巨噬细胞活性降低(P<0.05);干预48 h时,小檗碱5μmol/L组、小檗碱10μmol/L组、小檗碱20μmol/L组、小檗碱40μmol/L组、小檗碱50μmol/L组巨噬细胞活性均低于对照组[(0.89±0.02)%、(0.82±0.03)%、(0.71±0.02)%、(0.62±0.03)%、(0.53±0.02)%vs(1.01±0.01)%,P<0.05]。小檗碱20μmol/L组处理24 h时对细胞活力影响不大,作为最佳浓度和时间。与空白组比较,模型组iNOS含量和TNF-αmRNA水平升高,TGF-β_(1)含量、Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,小檗碱组iNOS含量和TNF-αmRNA水平降低,TGF-β_(1)含量、Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平升高(P<0.05);与小檗碱组比较,小檗碱+抑制剂组iNOS含量和TNF-αmRNA水平升高,Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论小檗碱可通过激活PI3K/Akt1通路,抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应,并抑制巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化。

针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB/激活蛋白-1信号通路的影响

目的探讨针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)信号通路的影响。方法将36只SD大鼠随机分为针刺组、模型组和对照组,各12只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核制备脑心综合征大鼠模型,对照组给予等剂量生理盐水向大鼠尾状核注入,手术操作过程同模型组。模型组和假手术组均不予针刺;针刺组选心俞穴、内关穴、风府穴和水沟穴,每日针刺1次,连续3天。采用原位末端凋亡(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)法测定脑组织细胞凋亡情况;神经功能采用Zea-Longa法评估;运用酶联免疫法测定白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;采用Western Blot法测定MAPK、NF-κB、AP-1蛋白表达。结果模型组和针刺组大鼠脑组织细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠脑组织AI低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠神经行为评分高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠神经行为评分低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值低于模型组(P<0.05)。结论脑心综合征大鼠采用针刺可减轻大鼠脑组织细胞凋亡,减轻大鼠炎症因子,且可下调MAPK/NF-κB/AP-1信号通路表达。

瑞马唑仑调节HIF-1α/BNIP3信号通路对OGD/R诱导神经细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨瑞马唑仑对OGD/R诱导的神经细胞自噬和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养小鼠海马神经元细胞(HT22)并进行神经细胞氧糖剥夺/再复氧(OGD/R),筛选实验用瑞马唑仑浓度;将HT22细胞分为对照组、OGD/R组、瑞马唑仑组、2-ME2组、瑞马唑仑+2-ME2组;CCK8法检测5组HT22细胞活力;流式细胞术检测5组HT22细胞凋亡率;透射电子显微镜观察5组HT22细胞自噬小体的形成;Western blot检测5组HT22细胞HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。结果确定实验用瑞马唑仑浓度为50μg/mL;与对照组比较,OGD/R组HT22细胞OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平下调,凋亡率上调(P<0.05);与OGD/R组比较,瑞马唑仑组HT22细胞自噬小体增加,OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平上调,凋亡率下调(P<0.05);2-ME2组HT22细胞OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平下调,凋亡率上调(P<0.05)。与瑞马唑仑组比较,瑞马唑仑+2-ME2组HT22细胞自噬小体数量减少,OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平下调,凋亡率上调(P<0.05);与2-ME2组比较,瑞马唑仑+2-ME2组HT22细胞OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平上调,凋亡率下调(P<0.05)。结论瑞马唑仑可通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路促进OGD/R诱导的神经细胞自噬,抑制细胞凋亡,从而减轻OGD/R诱导的神经细胞损伤。

活血利水复方对自发性高血压大鼠转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路介导下游结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达及血管重塑的影响

目的:基于转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路探讨活血利水中药复方对自发性高血压大鼠血管重塑的保护作用及机制。方法:将自发性高血压大鼠随机分为模型组、卡托普利组、活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组,Wistar大鼠作为空白组,每组10只。给予相应药物灌胃,4周后采用酶联免疫吸附试验方法检测血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量;采用逆转录聚合酶链反应检测大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达,并取冠状动脉组织进行马松三色染色。结果:与空白组比较,模型组血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,各药物组大鼠干预后血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量不同程度降低(P<0.01)。其中,卡托普利组和活血利水复方高剂量组上述3项指标表达最低,与其他组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);卡托普利组和活血利水复方高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠主动脉转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,卡托普利组及活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达不同程度降低(P<0.05或P<0.01)。结论:活血利水中药复方可通过调控转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路及下游结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,降低C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6等炎症因子的表达,抑制炎症反应,从而改善高血压病炎症状态及血管重塑,其机制可能与降低转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白沉积有关。

WNT-1诱导的信号通路蛋白在乳腺癌的生长和发展中的作用

WNT通路存在两类不同的信号转导途径:经典途径由WNT-1类蛋白介导;非经典途径由WNT5a类蛋白介导。1998年,在人类表达WNT-1通路的乳腺上皮细胞系C57MG中,WNT-1诱导的信号通路蛋白1(WISP1)被鉴定为WNT-1通路诱导的下游目标基因。它能调控神经元的生长、血管形成、肿瘤发生及干细胞的增殖[1]。

参榆洗液对痔术后大鼠痛觉敏化及cAMP/PKA信号通路和TRPV1蛋白表达的影响

目的探讨参榆洗液对痔术后大鼠痛觉敏化及环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号通路、香草酸瞬时受体亚型1(TRPV1)蛋白表达的影响。方法取40只雄性SD大鼠,随机选择其中8只作为空白组,其余大鼠采用冰醋酸建立痔术后创面模型。将造模成功大鼠随机分为模型组及参榆洗液低、中、高剂量组,每组8只。自成功造模后的第1天开始,模型组给予高压灭菌水局部熏洗,参榆洗液低、中、高剂量组分别予以参榆洗液0.4 g生药/mL、0.8 g生药/mL、1.6 g生药/mL局部熏洗,均2次/d,每次15 min,2次治疗间隔12 h,连续7 d。记录大鼠第1,4,7天换药刺激后3 min内首次舔舐肛周创面潜伏时间、扭体反应次数以及舔舐肛周创面总时间,观察造模后和干预3,5,7 d后创面情况并记录创面愈合率,HE染色观察干预7 d后创面组织病理学形态,Western blot法检测干预7 d后创面组织中cAMP、PKA蛋白和背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠首次舔舐肛周创面潜伏时间明显缩短(P<0.05),扭体反应次数明显增加(P<0.05),舔舐肛周创面总时间明显延长(P<0.05);创面组织中有大量中性粒细胞与淋巴细胞浸润,组织水肿明显;创面组织中cAMP、PKA蛋白相对表达量及背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,参榆洗液中、高剂量组大鼠首次舔舐肛周创面潜伏时间明显延长(P均<0.05),扭体反应次数明显减少(P均<0.05),舔舐肛周创面总时间明显缩短(P均<0.05);参榆洗液各组干预5,7 d后创面愈合率更高(P均<0.05);参榆洗液各组大鼠创面组织中中性粒细胞、淋巴细胞浸润减少,成纤维细胞、新生血管增多;参榆洗液各组创面组织中cAMP、PKA蛋白相对表达量及背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),且呈剂量依赖性下降(P均<0.05)。结论参榆洗液可呈剂量依赖性改善痔术后大鼠痛觉敏化,促进创面愈合,机制可能与下调cAMP/PKA信号通路相关蛋白及TRPV1蛋白表达有关。

Wnt1-诱导的信号通路蛋白1在内分泌代谢性疾病中的研究进展

Wnt1-诱导信号通路蛋白-1 (Wnt1-inducible signaling pathway protein 1,WISP1)是一种富含半胱氨酸的分泌型细胞外基质相关蛋白,研究发现,WISP1通过不同途径调控细胞增殖、介导细胞黏附、诱导细胞转移、促进有丝分裂及细胞外基质的形成,WISP1在体内参与广泛的病理生理过程,之前关于WISP1的研究多集中于癌症、纤维化和慢性炎症性疾病。

肥胖患者维生素D与Wnt1诱导信号通路蛋白-1及肿瘤坏死因子-α的关系

目的探讨肥胖患者维生素D[25(OH)D]与Wnt1诱导信号通路蛋白-1(WISP1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2017年6月至2019年9月海南医学院第一附属医院收治的80例肥胖患者作为肥胖组,并选取同期于体检中心进行正常体检的86例非肥胖人群作为对照组,比较两组研究对象的维生素D水平分层(正常、减少、缺乏)情况,以及血清WISP1与TNF-α水平,并比较肥胖组维生素D正常、下降、缺乏患者的体重指数(BMI)、腰围、血清WISP1、TNF-α水平,采用Pearson检验分析肥胖组患者的血清25(OH)D水平与BMI、腰围、WISP1、TNF-α的相关性。结果肥胖组与对照组研究对象的维生素D水平正常率、下降率、缺乏率(15.00%、47.50%、37.50%vs.53.49%、27.91%、18.60%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05);肥胖组患者的血清WISP1、TNF-α水平分别为(1123.64±282.34)pg/ml、(86.92±22.95)pg/ml,高于对照组的(719.64±120.36)pg/ml、(60.78±14.03)pg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);维生素D缺乏患者的BMI、腰围分别为(30.79±0.61)kg/m^2、(92.66±3.19)cm,高于维生素D正常患者的(28.86±0.22)kg/m^2、(85.03±1.15)cm、下降患者的(29.47±0.20)kg/m^2、(90.14±1.78)cm,维生素D下降患者的BMI、腰围分别为(29.47±0.20)kg/m^2、(90.14±1.78)cm,高于维生素D正常者的(28.86±0.22)kg/m^2、(85.03±1.15)cm,差异均具有统计学意义(P<0.05);肥胖组患者的血清25(OH)D水平与BMI呈负相关(r=-0.737,P<0.001),与腰围呈负相关(r=-0.752,P<0.001);维生素D缺乏患者WISP1、TNF-α水平分别为(1622.07±585.99)pg/ml、(99.47±25.71)pg/ml,高于维生素D正常患者的(549.91±82.23)pg/ml、(61.05±14.14)pg/ml、下降患者的(911.32±105.8)pg/ml、(85.19±23.56)pg/ml,差异均具有统计学意义(P<0.05);维生素D下降患者的WISP1、TNF-α水平分别为(911.32±105.8)pg/ml、(85.19±23.56)pg/ml,高于维生素D正常者的(549.91±82.23)pg/ml、(61.05±14.14)pg/ml,差异均具有统计学意义(P<0.05);肥胖组患者的血清25(OH)D水平与WISP1呈负相关(r=-0.669,P<0.001),与TNF-α呈负相关(r=-0.651,P<0.001);肥胖组患者的血清WISP1与BMI呈正相关(r=0.445,P<0.001),与腰围呈正相关(r=0.488,P<0.001);肥胖组患者的血清TNF-α水平与BMI呈正相关(r=0.395,P<0.001),与腰围呈正相关(r=0.447,P<0.001)。结论维生素D在肥胖患者中呈低表达,与BMI、腰围、TNF-α、WISP1呈负相关,补充维生素D可能通过下调WISP1、TNF-α,改善肥胖患者的BMI及腰围。

中药抑制缺氧诱导因子-1α相关信号通路的抗肿瘤作用研究进展

缺氧是实体肿瘤的常见特征,缺氧微环境可引起缺氧诱导因子-1(HIF-1)过表达。HIF-1α是缺氧应答中至关重要的转录调控因子,在各类肿瘤组织中均过表达,其在肿瘤细胞的增殖、侵袭转移、血管生成、糖酵解和免疫中发挥重要作用并参与多种转导通路。因此,HIF-1α作为治疗实体肿瘤的潜在靶点,颇有应用前景。相较于HIF-1α抑制剂存在高毒性、低效性的问题,中药具有多靶点、低毒性、高耐受性等优势,在肿瘤治疗中有广泛的应用前景。

Wnt信号通路的组件蛋白DKK-1、β-链接素及周期素D1蛋白表达与胃癌的相关性

目的探讨Wnt信号通路中的组件蛋白DKK-1、β-catenin及周期素(Cyclin)D1在胃癌的发生、发展及转移的相互关系。方法采用免疫组织化学方法标记DKK-1、β-catenin及Cyclin D1蛋白在80例胃癌组织标本,10例正常胃组织中的表达情况。结果 1DKK-1在胃癌组织中的表达明显低于胃正常组织(P<0.05),高、中分化胃癌的表达高于低分化胃癌的表达(P<0.05),伴有淋巴结转移的胃癌组织DKK-1较无转移病例阳性率低(P<0.05)。2β-catenin在胃癌组织中的阳性表达率明显高于胃正常组织(P<0.05),高、中分化胃癌的表达低于低分化胃癌的表达(P<0.05),伴有淋巴结转移的胃癌组织β-catenin较无转移病例阳性率高(P<0.05)。3Cyclin D1在胃癌组织中的表达明显高于胃正常组织(P<0.05),高、中分化胃癌的表达低于低分化胃癌的表达(P<0.05),伴有淋巴结转移的胃癌组织Cyclin D1较无转移病例阳性率较高(P<0.05)。4在胃癌组织中DKK-1与Cyclin D1呈负相关关系(r=-0.453,P<0.01),DKK-1与β-catenin呈负相关关系(r=-0.553,P<0.01),Cyclin D1与β-catenin呈正相关关系(r=0.562,P<0.05)。结论 Wnt信号通路中的组件蛋白DKK-1、β-catenin及Cyclin D1在胃癌的发生、发展及转移有一定的相互关系。

POSTN通过ERK1/2信号通路诱导肺动脉平滑肌细胞增殖

目的探索骨膜蛋白(periostin,POSTN)诱导肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC)增殖在缺氧诱导肺动脉高压(hypoxia-induced pulmonary hypertension,HPH)发病中的作用及其机制。方法取自雄性大鼠的原代PASMC暴露于缺氧环境模拟HPH,将细胞分为常氧组、缺氧组、缺氧+对照腺病毒转染组(Ad-shNC组)、缺氧+POSTN沉默腺病毒转染组(Ad-shPOSTN组)、POSTN组、POSTN+U0126组。采用α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)评估PASMC的纯度,CCK-8法检测细胞活力,Western blot法检测PASMC中POSTN、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、骨形态发生蛋白Ⅱ型受体(bone morphogenetic protein typeⅡreceptor,BMPR2)、磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)及细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)的蛋白表达水平。结果与常氧组比较,缺氧促进PASMC增殖和POSTN蛋白表达,抑制BMPR2蛋白表达。下调POSTN表达可抑制缺氧诱导的PASMC增殖,恢复BMPR2蛋白表达水平。此外,POSTN明显增加p-ERK1/2或ERK1/2的蛋白表达水平,增加PASMC增殖,而这些效应可被U0126阻断。结论在HPH病理机制中,POSTN促进PASMC增殖,其潜在的机制可能与调节BMPR2表达和活化ERK1/2信号通路有关。

Wnt信号通路的组件蛋白DKK-1、β-catenin及CyclinD1在胃癌中的表达与相互关系

目的:探讨Wnt信号通路中的组件蛋白DKK-1、β-catenin及CyclinD1在胃癌的发生、发展及转移中的相互关系。方法:采用免疫组织化学方法标记DKK-1、β-catenin及CyclinD1在胃癌组织及胃组织中的表达情况。结果:DKK-1在胃癌组织中的表达明显低于胃正常组织,高-中分化胃癌的表达高于低分化胃癌的表达,伴有淋巴结转移的胃癌组织较无转移病例阳性率低(均P<0.05)。β-catenin在胃癌组织中的阳性表达率明显高于胃正常组织,高-中分化胃癌的表达低于低分化胃癌的表达,伴有淋巴结转移的胃癌组织较无转移阳性率高(均P<0.05)。CyclinD1在胃癌组织中的表达明显高于胃正常组织,高-中分化胃癌的表达低于低分化胃癌的表达,伴有淋巴结转移的胃癌组织较无转移阳性率高(均P<0.05)。DKK-1、β-catenin及CyclinD1与患者的年龄、性别无关(P>0.05),在胃癌组织中DKK-1与CyclinD1呈负相关,DKK-1与β-catenin呈负相关,CyclinD1与β-catenin呈正相关。结论:DKK-1表达的下调,β-catenin和CyclinD1的表达上调与胃癌的发生和发展密切相关,且三者对胃癌的病程、治疗及预后判断具有一定的临床意义。

R-脊椎蛋白1表达与Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌中的相关性及临床意义

目的探讨R-脊椎蛋白1(RSPO1)、Wnt/β-catenin与乳腺癌生物学行为的相关性及其可能的机制。方法收集惠州市中心人民医院2009年1月至2015年12月乳腺癌病例标本,采用组织芯片免疫组织化学SP法,检测224例非特殊型乳腺浸润性癌(BIC-NST)、155例乳腺导管原位癌(BDCIS)及379例癌旁正常组织(NBTAC)中RSPO1、SFRP1、β-catenin的表达。结果RSPO1和β-catenin在BIC-NST及BDCIS组织中的表达明显高于NBTAC(P<0.01),而SFRP1在BIC-NST及BDCIS组织中的表达明显低于NBTAC(P<0.01);RSPO1和β-catenin在高级别BDCIS的表达率明显高于低级别组(P<0.01),在Ⅲ级BIC-NST分化组的表达率明显高于Ⅰ级分化组,而且组织分级越高RSPO1和β-catenin的表达越高,两者之间呈明显的正相关(r=0.114,P=0.023);但SFRP1在Ⅲ级BIC-NST分化组的表达率明显低于Ⅰ级分化组,且组织分级越高其表达越低,与RSPO1和β-catenin的表达均呈明显的负相关(r=-0.217,P=0.011)。RSPO1和β-catenin表达在患者临床分期Ⅲ+Ⅳ期中的表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期的表达,且与淋巴结转移、脉管浸润相关(P<0.01);而SFRP1的表达有相反结果。结论RSPO1、β-catenin蛋白的高表达和SFRP1蛋白的低表达与乳腺癌的发生、发展密切相关,可为乳腺癌的诊断和靶向治疗提供新的靶点。

复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变模型大鼠Wnt信号通路中Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1蛋白表达的影响

本研究采取MNNG综合因素制备GPL模型,分别用复方蜥蜴散80目制剂、100目、80+100目不同微粒等量混合剂、生理盐水、维酶素混悬液治疗,应用免疫组化法检测大鼠胃细胞中增值蛋白Wnt2、β-catenin、CyclinD1的表达,光镜观察胃黏膜病理组织学变化,并通过图像分析系统对免疫组化图像进行光密度的测算。结果显示:复方蜥蜴散80目、100目、80+100目不同微粒组合组细胞增殖基因Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1蛋白的阳性表达率显著低于模型组(P<0.01),复方蜥蜴散80+100目混合组三种蛋白的阳性表达率显著低于维酶素组(P<0.05)。揭示了复方蜥蜴散可以修复损伤胃黏膜,治疗或逆转PLGC的发展,其作用机制可能是通过干预黏膜增生、分化,抑制细胞中Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1过度增殖,促进细胞凋亡,恢复细胞增殖与凋亡的平衡,从而阻断胃癌前病变的。

载脂蛋白A1通过Wnt/β-catenin信号通路调控EMT在甲状腺癌转移中的作用

目的探讨载脂蛋白A1(ApoA1)对甲状腺癌细胞侵袭和迁移的影响及可能的作用机制。方法免疫组织化学染色法检测73例甲状腺癌和50例甲状腺结节组织(对照组)ApoA1表达,实时荧光定量PCR和Western blot法检测人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞和正常人甲状腺Nthy-ori 3-1细胞ApoA1表达;通过转染pLKO.1-shApoA1敲低TPC-1细胞ApoA1表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot法检测上皮细胞-间充质转化(EMT)和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果甲状腺癌转移组、无转移组ApoA1染色评分明显高于对照组,转移组ApoA1染色评分又明显高于无转移组(均P<0.05)。TPC-1细胞ApoA1mRNA和蛋白表达明显高于Nthy-ori 3-1细胞,差异具有统计学意义(P<0.01)。ApoA1表达与甲状腺癌转移和临床分期有关(均P<0.05),与性别、年龄、病理分型等无关(均P>0.05)。敲低ApoA1表达可显著降低TPC-1细胞侵袭、迁移能力和抑制EMT转换能力,ApoA1-siRNA组侵袭和迁移细胞数明显少于空白对照组和空载质粒(EV)组,E-cadherin蛋白表达明显高于空白对照组和EV组,Vimentin蛋白表达明显低于空白对照组和EV组,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。敲低ApoA1表达可明显抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达,ApoA1-siRNA组CK2α、β-catenin、Survivin蛋白表达明显低于空白对照组和EV组,差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论抑制ApoA1表达使甲状腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱,其作用机制可能与阻断Wnt/β-catenin信号通路、抑制细胞发生EMT有关。

胃癌组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系

目的研究胃癌组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达水平与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路和预后的关系。方法选取2019年2~10月行胃癌根治术的113例胃癌患者,术中取其胃癌组织与癌旁组织。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌组织与癌旁组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量及Wnt/β-catenin信号通路相关指标[Wnt3a、Wnt5a、β-catenin、细胞周期素D1(cyclin D1)、原癌基因(c-myc)]信使RNA(mRNA)表达量。采用Pearson相关性法分析LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与Wnt/β-catenin信号通路相关指标mRNA表达量的相关性。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析胃癌患者术后3年生存情况。结果胃癌组织LncRNA NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量均高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson法分析显示,Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量与LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量呈正相关(P<0.05)。LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与胃癌患者的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。患者随访3年,随访中位时间为27.90个月。Kaplan-Meier生存曲线显示,LncRNANCK1-AS1高表达组3年生存率52.31%(34/65)低于LncRNANCK1-AS1低表达组的77.08%(37/48)(P<0.05),LncRNA TP73-AS1高表达组3年生存率52.78%(38/72)低于LncRNATP73-AS1低表达组80.49%(33/41)(P<0.05)。结论LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1在胃癌组织中表达上调,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌发生、发展,还可导致不良预后,有望作为辅助评估胃癌患者预后的生物标志物。

布托啡诺调节缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响

目的探讨布托啡诺(Butorphanol)对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响及作用机制。方法使用0.5~80.0μg/mL的布托啡诺分别处理HeLa细胞24 h,细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞增殖,计算IC50值。将HeLa细胞分为对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)过表达组(HIF-1α组)、布托啡诺组(Butorphanol组)、Butorphanol+HIF-1α组,平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验、小管形成实验分别检测HeLa细胞增殖、迁移、侵袭与血管生成,Western blot法检测HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,裸鼠移植瘤实验检验布托啡诺对宫颈癌移植瘤生长的影响。结果过表达HIF-1α可显著促进HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成拟态形成,并上调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺可有效抑制HeLa细胞增殖、迁移、侵袭、血管生成拟态形成及宫颈癌移植瘤生长,并下调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺对宫颈癌细胞的抑制作用可被HIF-1α的过表达减弱。结论布托啡诺通过抑制HIF-1α/VEGF信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成,抑制宫颈癌的生长。