Wnt10b对山羊前体脂肪细胞分化相关基因表达的影响

旨在利用RNA干扰技术,明确Wnt10b基因对山羊前体脂肪细胞分化的影响。设计合成山羊Wnt10b siRNA序列,利用胶原酶消化法获得山羊皮下和肌内前体脂肪细胞。利用有效的siRNA序列干扰山羊皮下和肌内前体脂肪细胞Wnt10b基因表达后,检测其对细胞分化及脂肪细胞分化标志基因表达的影响。结果表明,筛选获得有效的山羊Wnt10bsiRNA序列,转染山羊皮下和肌内前体脂肪细胞后,Wnt10b被显著干扰,其mRNA表达量分别下调63%(P<0.01)和67%(P<0.01);油红O染色结果显示,干扰Wnt10b基因可明显抑制山羊皮下和肌内脂肪细胞的脂滴积聚;且干扰Wnt10b基因后,在皮下前体脂肪细胞分化过程中C/EBPβ、PPARγ、SREBP1和Pref1基因出现极显著下调(P<0.01),LPL出现显著下调(P<0.05);而在肌内前体脂肪细胞分化过程中,AP2和LPL基因出现极显著下调(P<0.01),C/EBPβ出现显著下调(P<0.05),Pref1出现极显著上调(P<0.01)。本试验发现,Wnt10b基因可能通过调控C/EBPβ、PPARγ、SREBP1和LPL的表达来促进山羊皮下前体脂肪细胞分化,通过调控AP2、LPL、C/EBPβ和Pref1的表达来促进山羊肌内前体脂肪细胞分化。

Wnt10b在小鼠毛囊周期中的表达

目的初步探讨Wnt10b在小鼠毛囊生长周期中的表达变化规律及其意义。方法首先用RT-PCR检测Wnt10b在小鼠皮肤中的表达情况,然后以免疫组化检测Wnt10b在毛囊生长周期各阶段的表达定位及变化,同时检测了核增殖抗原Ki67在毛母质中的表达情况。结果Wnt10b在生后第1周期生长期皮肤的mRNA表达量显著高于退化期和静止期(P<0.01),生长中期达到峰值,退化期和静止期呈低表达;第2周期生长早期表达量略高于退化期和静止期。Wnt10b蛋白特异性表达于生长期毛囊的毛母质(Matrix)部位;退化期和静止期在整个毛囊都不表达;第2周期生长早期主要表达于毛囊次级毛芽。Ki67在毛母质中的表达变化情况与Wnt10b具有一致性。结论Wnt10b的表达具有严格的时空特异性,生后第1周期特异性表达于生长期毛囊的毛母质细胞,第2周期生长早期表达于毛母质细胞的祖细胞次级毛芽,提示Wnt10b可能对毛母质细胞增殖起作用,进而调控毛囊的生长并维持毛囊周期。

正畸力作用下压力侧Wnt10b、RANKL在牙周组织中的表达

目的:研究大鼠在正畸力作用下压力侧wnt10b、RANKL在牙周组织中的表达变化。方法:将42只健康雄性SD大鼠随机分为7组,即0h、6h、12h、24h、5d、7d、14d组,使用镍钛拉簧对第一磨牙向近中施加50g正畸力,以0h为对照组,每组处死6只。应用实时定量PCR(RT-PCR)对wnt10b、RANKL的mRNA表达进行检测。结果:Real-time PCR结果显示,与对照组相比,实验组压力侧牙周组织中Wnt10b、RANKL mRNA均有表达,其中wnt10b于加力初期表达受抑制,随后升高,于5d达高峰随后下降,14d恢复至正常水平。RANKL表达随加力时间延长而逐渐升高,7d达到高峰,随后下降。结论:Wnt10b、RANKL参与正畸加力作用下的牙周组织改建。

子宫颈鳞状细胞癌中Klotho与Wnt10b的表达及其相关性

目的检测正常子宫颈上皮、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)以及子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)组织中Klotho和Wnt10b的表达,探讨二者在子宫颈癌发生、发展过程中的作用及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测Klotho及Wnt10b在正常子宫颈上皮、CIN及CSCC组织中的表达。结果 Klotho在正常子宫颈组织中的表达显著高于CIN及CSCC组织,其表达与子宫颈癌患者的年龄无关,与子宫颈癌FIGO分期、癌细胞分化程度以及淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。Wnt10b在CSCC组织中的表达明显高于正常子宫颈上皮组织及CIN组织,其表达与分化程度、FIGO分期及淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。Klotho与Wnt10b的表达呈负相关(rs=-0.416,P<0.01)。结论 Klotho和Wnt10b可能在子宫颈癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测二者有助于子宫颈癌发病机制的进一步研究。

Wnt10b对体外培养的人毛乳头细胞诱导毛囊生成能力的影响

目的:探讨Wnt10b对体外长期培养的人毛乳头细胞诱导毛囊生成能力的影响作用。方法:将人毛乳头细胞在体外传代培养到第8代后,加入人重组蛋白Wnt10b共培养,通过免疫荧光染色检测人毛乳头细胞的β-catenin表达,Real-time QPCR检测与毛乳头细胞诱导能力相关的特异性标记物碱性磷酸酶(ALP)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达,以及ALP染色检测Wnt10b对人毛乳头细胞的作用。结果:Wnt10b能够通过经典的Wnt/β-catenin信号通路作用于体外长期培养的人毛乳头细胞,上调人毛乳头细胞特异性标记物ALP和IGF-1的表达,从而维持人毛乳头细胞的诱导能力。结论:Wnt10b能够通过上调特异性标记物ALP和IGF-1的表达来维持体外长期培养的人毛乳头细胞的毛囊诱导能力。

瘢痕灸肝俞穴、足三里穴对原发性肝癌大鼠Wnt10b、Wnt3a表达的影响

目的:探讨瘢痕灸肝俞穴、足三里穴对原发性肝癌大鼠Wnt/β-catenin信号传导通路中Wnt3a、Wnt10b表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分成对照组、模型组、阿霉素组、肝俞组、足三里组,通过注射二乙基亚硝胺制备肝癌模型,用RT-PCR检测各组Wnt3a、Wnt10b表达量,观察肝细胞结构和形态变化。结果:与对照组比较,模型组、阿霉素组、肝俞组和足三里组Wnt3a、Wnt10b表达量均显著升高;与模型组比较,阿霉素组、肝俞组和足三里组表达量降低;与阿霉素组比较,肝俞组、足三里组表达幅度下降;与肝俞组比较,足三里组表达量升高。镜下观察可见,对照组为正常肝细胞,模型组细胞有假小叶形成,阿霉素组有明显增生灶,肝俞组细胞核多形、核浆部分消失,足三里组纤维样变。结论:瘢痕灸肝俞穴、足三里穴对原发性肝癌大鼠有治疗效果,其机制可能是通过调节Wnt/β-catenin信号传导通路中Wnt3a、Wnt10b的表达量来实现的。

结直肠癌预后分子标志物WNT10B及WNT家族对结直肠癌的影响

目的:探讨WNT10B对结直肠癌预后的影响和分子机制以及WNT家族对结直肠癌进展的影响。方法:采用癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)中结直肠癌与癌旁47对样本的m RNA表达数据分析WNT家族差异表达基因,对差异基因501例结直肠癌样本进行总生存期和无复发生存期的生存分析,并对预后有影响的基因进行年龄、性别、临床分期的多因素校正预后分析及临床病理特征的相关性分析,最后进行基因富集分析(GSEA)确定分子通路。结果:WNT家族中的WNT2、WNT2B、WNT3、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT9A、WNT10A、WNT10B和WNT16共10个基因在癌与癌旁组织差异有统计学意义(P<0.01),其中WNT5A和WNT10B对于总生存期有显著影响(P<0.05),WNT10A和WNT10B对于无复发生存期有显著影响(P<0.01);WNT10B校正年龄、性别、临床分期之后,对总生存期(P=0.003)和无复发生存期(P=0.08)影响仍然有统计学意义;WNT10B表达水平与患者肿瘤大小、淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理特征无关(P>0.05);神经活性的配体-受体相互作用信号通路和细胞黏附分子通路可能是WNT10B影响结直肠癌预后的重要分子通路。结论:WNT家族对于结直肠癌的进展有重要的影响,其中WNT10B对于总生存期和无复发生存期影响显著,可以作为结直肠癌诊断和预后的分子标志物。

胃癌组织Wnt10b的表达及意义

目的检测胃癌及癌旁组织中Wnt10b的表达,探讨其与临床病理参数的关系。方法收集25例胃癌患者手术切除的癌组织及对应的癌旁组织,用实时荧光定量PCR检测Wnt10bmRNA的表达,Westernblot技术检测Wnt10b蛋白的表达,分析Wnt10bmRNA在胃癌组织中的表达与临床病理参数的关系。结果胃癌组织中Wnt10bmRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001),胃癌组织中Wnt10bmRNA表达阳性率与肿瘤远处转移相关(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、分化程度和浸润深度无关。结论Wnt10b在胃癌组织中呈活化状态,可能参与胃癌的发生发展。

Wnt10b、β-catenin与鼻咽癌放射敏感性的关系

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法收集对数生长期以及经直线加速器6MV X射线0、2、4、6Gy照后48h的鼻咽癌CNE2细胞和放射抗拒的CNE-2(R743)细胞,RT-PCR方法检测Wnt10b基因、β-catenin基因mRNA的表达,Western blot检测Wnt10b、β-catenin蛋白的表达。结果放射抗拒株CNE-2(R743)细胞的Wnt10b和β-catenin基因mRNA及蛋白的表达均高于放射敏感的CNE 2细胞(P<0.05)。经照射后CNE 2细胞和CNE-2(R743)细胞的Wnt10b和β-catenin的mRNA及蛋白表达量随着照射剂量的增加而增加;在相同照射剂量下放射抗拒株CNE-2(R743)细胞Wnt10b和β-catenin的表达量均高于CNE 2细胞(P<0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路可能与鼻咽癌细胞放射敏感性有关。

人Wnt10b基因真核表达载体的构建及表达鉴定

目的:利用基因工程技术构建人Wnt10b基因的pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达。方法:以pUC19-Wnt10b为模板,PCR扩增人Wnt10b基因的cDNA编码区序列,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pEGFP-N1-Wnt10b,酶切和测序鉴定该载体;LipofectamineTM2000将该载体转染入COS-7中,Western blot和免疫细胞化学检测COS-7 Wnt10b蛋白表达。结果:PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建了pEGFP-N1-Wnt10b;将其转染入COS-7,COS-7 Wnt10b蛋白表达明显增高。结论:成功构建了人pEGFP-N1-Wnt10b,这为进一步研究Wnt10b基因功能奠定了前期基础。

人毛囊干细胞wnt10b 信号通路激活作用研究

目的通过病毒转染方式激活Wnt10b信号通路,调节毛囊干细胞的增殖分化过程,构建分化程度可控的毛囊干细胞种子细胞系。方法本研究从人毛囊隆突部位中提取分离出多系毛囊干细胞。通过系统性的体外激活人毛囊干细胞中wnt10b信号通路,分析wnt信号通路对毛囊干细胞增殖和分化的影响。结果本研究通过显微解剖结合消化法,实现了人头皮毛囊干细胞的高效快速分离培养。通过慢转录病毒转染的方式可成功激活人毛囊干细胞wnt10b信号通路。Wnt10b信号通路在就人毛囊干细胞细胞周期的调节中的作用可能与细胞周期调节蛋白p21的表达密切相关。结论Wnt10b信号通路激活后可使一定程度上促进人毛囊干细胞的增殖,这一新的研究发现为人毛囊干细胞体外扩增培养过程中细胞增殖及分化的可控性提供了新的研究策略。

Wnt10b、β-catenin、FGF18基因在‘甘肃高山细毛羊’胎儿皮肤毛囊中的表达规律研究

以81~147d胎龄的‘甘肃高山细毛羊’胚胎体侧部皮肤作为研究材料,通过冰冻切片、HE染色、荧光定量PCR、免疫组化技术研究Wnt10b、β-catenin、FGF18基因在次级毛囊形态发生过程中的表达规律.结果表明：从次级毛囊形态发生诱导期到器官形成阶段（胎龄87~108d）Wnt10b、FGF18基因表达量逐渐升高,在胎龄第108天Wnt10b、FGF18基因相对表达量分别达到（43.652±0.425）（13.67±0.207）,在细胞分化期表达量逐渐下降;而β-catenin基因的表达量始终维持较低水平,相对表达量仅为（0.58±015）;Wnt10b基因分别与β-catenin、FGF18基因表达水平呈显著正相关（r=0.85,P〈0.01;r=0.58,P〈0.05）;β-catenin基因与FGF18基因表达水平呈正相关（r=0.43,P〉0.05）.免疫组化结果显示在次级毛囊形态发生过程中Wnt10b、β-catenin基因主要在表皮、基板、毛芽、毛钉和成熟毛囊的内根鞘、毛干部表达;而FGF18不仅在表皮、基板、毛芽、毛钉和成熟毛囊的内根鞘、毛干部表达,而且在真皮中表达.本研究初步表明,Wnt10b、β-catenin、FGF18基因通过Wnt/β-catenin基因经典信号通路参与调控‘甘肃高山细毛羊’次级毛囊形态发生和再分化过程.

Notch1与Wnt10b在人骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨人骨肉瘤与骨软骨瘤组织中Notch1、Wnt10b表达的规律。方法采用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组(观察组)46例与骨软骨瘤组(对照组)32例组织标本中Notch1、Wnt10b蛋白表达情况,分析其与临床病理及预后的关系。结果 Notch1、Wnt10b在人骨肉瘤中表达的阳性率分别为是87.0%(40/46)、65.2%(30/46),明显高于骨软骨瘤6.3%(2/32)、34.4%(11/32),差异均有统计学意义(P<0.05)。根据人骨肉瘤病Ennecking的分期,发现骨肉瘤细胞Ⅱ、Ⅲ期Notch1、Wnt10b阳性表达率在明显高于Ⅰ期(P<0.05);比较肿瘤转移组与非转移组,发现Notch1、Wnt10b在转移组阳性表达率分别为94.1%(16/17)、88.2%(15/17),非转移组阳性率分别为13.8%(4/29)、20.7%(6/29),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Notch1、Wnt10b在骨肉瘤中呈现高表达,且与肿瘤恶性程度及肿瘤转移关系密切,检测Notch1与Wnt10b对骨肉瘤进展及预后的判断具有重要指导意义。

猪Wnt10b基因cDNA的克隆及生物信息学分析

Wnt10b是Wnt转录因子家族成员之一,是一种胞外信号分子,它通过一系列复杂信号通路调控胚胎发育、干细胞定向分化等生理过程.根据NCBI公布的wnt10b基因序列在保守区内设计引物,利用降落PCR法扩增猪Wnt10b基因,所得序列提交GenBank,登录号EU181371.核酸序列分析结果显示,该基因编码394个氨基酸,与人、小鼠、大鼠、牛和马等核苷酸序列比对,同源性分别为94%、89%、89%、92%和93%,氨基酸同源性分别为98%、96%、96%、94%、98%和97%.揭示该基因在不同物种间具有高度保守性.

Wnt10b与骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的关系

目的研究Wnt10b与骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导间充质干细胞(MSCs)骨向分化的关系,以及相关的分子机制。方法利用PCR、Westernblot、组织化学染色等方法,检测BMP9对Wnt10b表达的影响,以及Wnt10b对BMP9诱导的成骨分化的影响。同时,通过定量PCR、Westernblot、油红O染色、流式细胞术等,分析Wnt10b影响BMP9成骨分化诱导作用的可能机制。结果Wnt10b在C3H10T1/2、C2C12、MEFs和MC3T3-E1细胞中均有表达,BMP9在C3H10T1/2细胞中上调Wnt10b的表达水平。Wnt10b增强BMP9在C3H10T1/2细胞中增加OCN蛋白水平和促进钙盐沉积的能力,沉默Wnt10b减弱BMP9的作用。Wnt10b并不改变BMP9对细胞周期的影响,但能增强BMP9诱导的Smad1/5/8磷酸化,沉默Wnt10b减弱BMP9对Smad1/5/8磷酸化的促进作用。此外,Wnt10b抑制BMP9在C3H10T1/2细胞中诱导的成脂分化,沉默Wnt10b则促进BMP9的成脂分化诱导作用。结论Wnt10b可以促进BMP9诱导的MSCs骨向分化,这种作用可能与增强BMP/Smad信号转导有关。

绵羊Wnt10b基因克隆及生物信息学分析

Wnt10b是Wnt家族中重要成员之一,绵羊Wnt10b基因尚属未知。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆了绵羊Wnt10b基因的全序列,并对该基因进行了比较全面的生物信息学分析。结果表明:绵羊Wnt10b基因序列全长2321 bp,包括1116 bp的编码区序列,编码391个氨基酸;其可变剪接体Wnt10b-AS由于CDS序列部分缺失编码166个氨基酸。同源性分析发现,绵羊Wnt10b基因核苷酸和氨基酸序列与其它哺乳动物同源性较高。氨基酸序列分析发现该蛋白为亲水性不稳定蛋白,相对分子量为43.0254 k Da。预测含有6个磷酸化位点,5个豆蔻酰化位点,二级结构以无规则卷曲和α螺旋为主。生物信息学分析表明Wnt10b及Wnt10-AS均为分泌型跨膜蛋白,主要存在细胞外基质中,通过与细胞膜上受体结合,调控下游靶基因的表达。Wnt10b-AS由于缺失多个翻译后修饰位点,可能通过与主转录本不同的作用机制发挥生物学功能。本研究为进一步探讨Wnt10b基因在绵羊毛囊生长发育中的功能和作用机制奠定了信息学基础。

Wnt10b在肝细胞肝癌中的表达

目的比较分析Wnt10b分别在肝细胞肝癌(简称肝癌)及对应癌旁组织中的表达水平,探讨Wnt10b与肝癌及其临床病理参数的相关性。方法采用实时定量PCR和Western blot技术分别检测33例肝癌及其对应癌旁组织中Wnt10bmRNA及蛋白的表达。结果 Wnt10bmRNA及蛋白在肝癌组织中表达量明显高于对应的癌旁组织(P<0.05)。结论 Wnt10b在肝癌组织中表达上调,结合Wnt信号传导途径的功能,提示Wnt10b异常活化可能参与了肝癌的始动和发展过程。

Wnt10B在肿瘤和疾病发生中的作用

Wnt10B是Wnt蛋白家族成员之一,在正常发育和肿瘤性转化中起着至关重要的作用。Wnt10B在脂肪组织、骨骼、肝、胃肠和皮肤中,可以调控细胞多能性及决定细胞命运,这些过程的异常会引起肥胖、糖尿病、骨质疏松、组织器官纤维化以及癌症等。本文就Wnt10B在疾病中所起作用及相关分子生物学机制的最新研究进展作一综述,为相关疾病研究提供新思路。

去势大鼠股骨组织中Wnt10b的表达

目的观测去势大鼠骨质疏松模型中股骨组织Wnt10b的表达。方法 20只SD雌性大鼠随机分为去势组和对照组两组。大鼠切除双侧卵巢去势诱发骨质疏松症。术后3个月腹主静脉取血,用放射免疫法测定各组大鼠血清E2水平。从股骨中提取总RNA和蛋白,分别采用RT-PCR和免疫印迹的方法检测Wnt10b在mRNA和蛋白表达水平上的变化。结果去势组大鼠血清E2含量为10.228±4.094 pmol/L;对照组血清E2含量为21.975±3.021 pmol/L。经RT-PCR和免疫印迹检测发现,与对照组相比,去势大鼠Wnt10b的mRNA和蛋白水平表达量均降低。结论去势大鼠骨质疏松模型体内股骨组织中Wnt10b的mRNA和蛋白表达水平均下降,以上结果提示Wnt10b可能在大鼠去势诱发骨质疏松模型中通过调节成骨等过程参与了骨质疏松的发展过程。

WNT10B在肺鳞癌组织中表达升高

目的探讨WNT10B在肺鳞癌组织中的表达情况并探讨其与临床病理特征及预后之间的关系。方法选择上海芯超生物科技有限公司提供的75例附有随访信息的肺鳞癌组织芯片,免疫组化法检测WNT10B蛋白的表达;卡方检验分析WNT10B表达与肺鳞癌临床病理因素之间的联系;Kaplan-Meier生存分析和log-rank检验以及Cox比例风险模型分析WNT10B表达与肺鳞癌患者的预后。结果WNT10B在肺鳞癌组织中的表达均显著高于癌旁组织(P<0.001);WNT10B高表达与肿瘤T分期、肿瘤分化程度显著相关(P<0.05);WNT10B表达与肺鳞癌患者的预后具有相关性(P<0.05),WNT10B是肺鳞癌预后的独立相关因素(P<0.05)。结论WNT10B参与肺鳞癌的发生发展过程,有望成为肺鳞癌的一个新的肿瘤标志物及预后指标。