多发性骨髓瘤患者的血清PINP、DKK1和SFRP3水平及其临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者的血清I型原胶原氨基端前肽(PINP)、dickkopf Wnt信号通路抑制因子1(DKK1)和分泌型卷曲相关蛋白3(SFRP3)水平及其临床意义。方法纳入150例MM患者(MM组)及150健康体检者(对照组)。比较两组研究对象之间、不同临床分期MM患者之间、不同临床疗效MM患者之间的血清DKK1、PINP、SFRP3水平。采用Logistic回归模型分析治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平与MM患者临床疗效的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平对MM患者临床疗效的预测效能。结果MM组患者治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平高于对照组(P<0.05);Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期MM患者治疗前血清DKK1、PINP、SFRP3水平依次升高(P<0.05);有效组患者治疗前血清DKK1、PINP、SFRP3水平低于无效组(P<0.05)。治疗前血清DKK1、SFRP3、PINP水平升高是影响MM患者临床疗效的独立危险因素(P<0.05)。治疗前血清DKK1和SFRP3水平对MM患者临床疗效无预测价值(曲线下面积<0.5,P>0.05),而治疗前血清PINP水平对MM患者的临床疗效有一定的预测价值(曲线下面积=0.663,P<0.05)。结论MM患者治疗前的血清DKK1、PINP和SFRP3水平高于健康人群,且与疾病严重程度有关,是MM患者临床疗效的影响因素。治疗前血清PINP水平对预测MM患者的临床疗效有一定的价值。

保肺化纤方调控TGF-β1/smad2/3、Wnt1/β-catenin信号通路对BLM/PM2.5诱导的特发性肺纤维化大鼠肺组织胶原沉积的影响

目的探讨保肺化纤方经转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/smad2/3、Wnt1/β-连环蛋白(catenin)信号通路减轻博来霉素(bleomycin,BLM)/PM2.5暴露诱导的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)大鼠肺组织胶原沉积的作用机制。方法SD大鼠随机分为对照(Control)组、BLM+PM2.5(Model)组、保肺化纤方(BHF)组、吡非尼酮(pirfenidone,PFD)组、XAV-939组、BHF+PFD组、BHF+XAV-939组。采用一次性气管内雾化BLM法制备IPF大鼠模型,大气PM2.5实时浓缩全身暴露和给予相应药物干预。检测大鼠肺功能,观察肺组织病理和胶原沉积;采用免疫组化技术检测肺组织Ⅰ、Ⅳ型胶原(collagen,COL)、TGF-β1、smad2/3、β-catenin蛋白水平;采用qPCR技术检测肺组织TGF-β1、smad2/3、Wnt1、β-catenin mRNA水平。结果与Control组比较,Model组大鼠肺功能显著降低(P<0.01),肺组织可见大量炎症细胞浸润,肺泡壁断裂、增厚,胶原沉积等肺纤维化特征性病理改变,肺组织胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)、COLⅠ、COLⅣ蛋白及TGF-β1、smad2/3、β-catenin基因与蛋白表达均显著升高(P<0.01);与Model组比较,各治疗组均有效改善大鼠肺组织病理改变,显著降低肺组织CVF及COLⅠ、COLⅣ、TGF-β1、smad2/3、β-catenin蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),同时BHF组、BHF+PFD组、BHF+XAV-939组均能显著提高大鼠肺功能(P<0.05,P<0.01),明显下调肺组织TGF-β1、smad2/3、β-catenin基因表达水平(P<0.01);与PFD组比较,BHF+PFD组大鼠肺组织COLⅠ、TGF-β1蛋白及smad2、β-catenin基因表达均显著降低(P<0.05,P<0.01);与XAV-939组比较,BHF+XAV-939组smad3基因表达显著降低(P<0.01)。结论保肺化纤方可改善BLM/PM2.5诱导的IPF大鼠肺组织病理损伤,减少胶原沉积,提高肺功能,改善肺纤维化,其机制可能与下调TGF-β1/smad2/3、Wnt1/β-catenin通路有关。

基于Wnt/β-catenin信号通路探索芪蛭通络方对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用机制

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨芪蛭通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠予高糖高脂饲料及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作DKD模型,取50只造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(每日14 mg/kg)和芪蛭通络方低、中、高剂量组(每日1.215 g/kg、2.430 g/kg、4.860 g/kg),每组10只。同时取10只SD大鼠予普通饲料和腹腔注射柠檬酸缓冲液,作为正常组。造模成功后,各给药组每日予相应药物灌胃,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,各组均连续灌胃8周。收集处死前1 d各组大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);处死前尾静脉取血,测血糖(GLU);末次给药后5 h,各组大鼠予异氟烷吸入麻醉,腹主动脉取血,分离血清测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);取双肾,采用苏木素-伊红(HE)染色法、马松(Masson)染色法观察各组大鼠肾脏组织病理变化;分别采用免疫组化(IHC)法、蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组大鼠肾组织Wnt1、β-catenin、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达。结果:模型组大鼠GLU、Scr、BUN、24 h-UTP水平均明显高于正常组(P<0.01),各给药组大鼠上述指标均明显低于模型组(P<0.01),芪蛭通络方高剂量组上述指标均明显低于厄贝沙坦组(P<0.01),芪蛭通络方对上述指标的改善作用表现出一定的剂量依赖性。病理图片显示,模型组大鼠肾小球结构遭到破坏,炎性改变明显,肾小管扩张,肾间质纤维化明显,肾组织蓝色胶原分泌增多且伴病理损伤;各给药组大鼠肾组织病理改变均有不同程度的改善,以芪蛭通络方高剂量组改善最为显著。免疫组化法及蛋白免疫印迹法结果显示,模型组大鼠Wnt1、β-catenin、CTGF、GSK-3β蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化法结果显示,芪蛭通络方高剂量组上述蛋白表达均明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01);蛋白免疫印迹法结果显示,芪蛭通络方高剂量组Wnt1、GSK-3β蛋白表达明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01),β-catenin、CTGF蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P>0.05)。芪蛭通络方对上述蛋白的表达表现出一定的剂量依赖性。结论:芪蛭通络方可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,在一定程度上延缓肾间质纤维化,从而起到保护肾功能的作用。

HOXC6通过激活SFRP1/Wnt/β-catenin信号通路促进前列腺癌进展的机制研究

目的:探讨同源盒家族中的人类同源盒C6(HOXC6)基因在前列腺癌中的表达情况及其对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:应用基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA)数据库中关于HOXC6研究的数据,对其在前列腺癌中的表达水平变化进行分析。采用GEPIA数据库分析HOXC6表达水平与前列腺癌患者生存预后之间的关系。通过Western印迹检测HOXC6蛋白在前列腺癌组织、正常前列腺组织及不同前列腺癌细胞株DU-145、PC-3以及正常人前列腺上皮细胞RWPE-1中的表达情况。在人前列腺癌细胞DU145、PC-3和正常人前列腺上皮细胞RWPE-1中,利用siRNA质粒稳定干扰HOXC6基因表达,采用CCK8、平板克隆、划痕、Transwell侵袭实验检测HOXC6基因对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。通过GEPIA数据库分析Wnt抑癌因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因与HOXC6的相关性,采用Western印迹检测HOXC6-siRNA转染后PC-3细胞中HOXC6、SFRP1、Wnt及β-catenin蛋白表达。结果:HOXC6在前列腺癌组织中的表达高于正常前列腺组织(P<0.01),在前列腺癌细胞中的表达高于正常前列腺上皮细胞(P<0.01)。结合生物信息学分析,HOXC6高表达的PCa患者比低表达的生存率低(P=0.011)。siRNA组HOXC6蛋白相对表达量、吸光度值、克隆形成数、侵袭细胞数低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。通过GEPIA数据库发现SFRP1高表达的前列腺癌患者预后较好,在体外实验中,前列腺癌PC-3细胞系中,Western印迹分析Wnt及β-catenin蛋白的表达均上升,SFRP1蛋白表达明显下降(P<0.05);与siRNA-NC、前列腺癌PC-3相比,siRNA-HOXC6转染组中的Wnt及β-catenin蛋白的表达均明显下降,SFRP1蛋白表达上升(P<0.05)。结论:HOXC6在前列腺癌组织中高表达,并与前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有关;HOXC6通过抑制SFRP1/Wnt/β-catenin信号通路从而促进前列腺癌DU145、PC-3细胞的生长,HOXC6有可能是临床治疗前列腺癌的潜在靶标。

Wnt1-Cre和Pax2-Cre标记的小鼠第一鳃弓颅颌面部神经嵴细胞异质性研究

目的利用Wnt1-Cre和Pax2-Cre小鼠特异性标记颅颌面神经嵴细胞(CNCs)迁移到第一鳃弓时的分化异质性及机制。方法分别收取胚胎期(E)8.0~E9.25Wnt1-Cre;R26R^(mTmG)及Pax2-Cre;R26R^(mTmG)小鼠胚胎进行整体荧光观察,利用石蜡切片免疫荧光对E15.5的Pax2-Cre;R26R^(Ai9)和Wnt1-Cre;R26R^(Ai9)小鼠所标记的CNCs在颅面部主要组织器官中的谱系分化情况进行比较分析,最后对E10.5的Wnt1-Cre;R26R^(mTmG)和Pax2-Cre;R26R^(mTmG)小鼠的第一鳃弓组织中CNCs进行单细胞测序分析,并对差异基因进行荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)验证。结果Pax2-Cre和Wnt1-Cre小鼠特异性标记的CNCs均在E8.0自神经板开始迁移,但Pax2-Cre小鼠仅标记迁移到第一鳃弓的CNCs,而Wnt1-Cre同时标记了迁移到第一和第二鳃弓的CNCs;在分化谱系示踪方面,二者皆标记了CNCs分化形成的颅颌面部组织器官的间充质,但Wnt1-Cre在上腭和舌中标记CNCs更多;在第一鳃弓间充质中,Pax2-Cre所标记的CNCs特异性表达基因主要参与了成骨,而Wnt1-Cre所标记的CNCs特异性表达基因主要参与了肢体发育、细胞迁移和成骨,q-PCR结果也证实了两者高表达差异基因参与了以上功能。结论本研究结果提示Pax2-Cre小鼠可特异性用于第一鳃弓CNCs及其衍生组织成骨方面的研究。

血清WISP1水平与绝经后骨质疏松症的相关性研究

目的:观察血清Wnt1诱导信号通路蛋白1(Wnt1-inducible-signaling pathway protein 1,WISP1)水平在绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)患者中的变化,并分析其与骨密度(bone mineral density,BMD)各项骨代谢指标的相关性,探索WISP1在PMOP发生发展中的作用。方法:选取2020年5月─2022年8月在苏州大学附属第一医院健康管理中心进行健康体检的绝经后女性共148例,利用双能X线吸收仪(dual-energy X-ray absorptiometry,DXA)骨密度仪测量腰椎骨密度,根据不同骨量分为骨量正常组(T值≥-1.0),骨量减少组(-2.5<T值<-1.0),骨质疏松组(T值≤-2.5),分别采集临床基本资料,测定骨代谢指标及血清WISP1质量浓度,经SPSS软件进行统计处理。结果:骨质疏松组及骨量减少组的血清WISP1质量浓度均显著高于骨量正常组(均P<0.05)。血清WISP1水平与成骨标志物碱性磷酸酶、总Ⅰ型前胶原氨基端肽密切相关。结论:WISP1可能通过刺激成骨反应参与PMOP的病理生理过程。

柚皮苷抑制骨质疏松大鼠骨组织的铁沉积及细胞凋亡

背景:有研究发现,铁代谢异常诱发的骨组织细胞异常凋亡在骨质疏松进展中发挥重要作用。目的:探讨柚皮苷对骨质疏松大鼠骨组织铁代谢与细胞凋亡的影响。方法:取50只2月龄雌性SD大鼠,采用随机数字表法分成5组,每组10只:除假手术组外,骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组均通过切除双侧卵巢建立骨质疏松模型。造模8周后,柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组分别灌胃给予100,400 mg/(kg·d)的柚皮苷,柚皮苷高剂量+DKK-1组灌胃给予400 mg/(kg·d)的柚皮苷+皮下注射25 mg/(kg·d)的Wnt1信号通路抑制剂DKK-1,连续给药7 d。给药结束后进行相关指标的检测。结果与结论:①与骨质疏松组相比,柚皮苷可提升大鼠骨密度及血清钙、超氧化物歧化酶水平(P<0.05),降低血清中骨钙素、丙二醛、磷水平(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);②Micro-CT扫描、苏木精-伊红与TUNEL染色显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可显著改善大鼠骨微结构、降低细胞凋亡率,DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用;③免疫荧光染色显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可降低胫骨组织内活性氧含量、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达,提升碱性磷酸酶的表达(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);④普鲁士蓝染色、免疫组化染色显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可降低骨组织与肝组织内的铁沉积、骨组织铁吸收相关蛋白受体1的表达(P<0.05),提升骨组织膜铁转运蛋白1的表达(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);⑤胫骨标本PCR与Western blot检测显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可降低抗酒石酸酸性磷酸酶、铁吸收相关蛋白受体1和Bax的表达(P<0.05),提升碱性磷酸酶、膜铁转运蛋白1、Bcl-2、Wnt1和β-catenin的表达(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);⑥结果表明,柚皮苷可通过减少骨组织中的铁沉积及细胞凋亡率抑制骨质疏松的进展,这可能与激活Wnt1信号通路有关。

非小细胞肺癌组织LncRNA MIR503HG、Wnt1表达与患者术后5年内生存的相关性

目的 探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)miR503宿主基因(MIR503HG)、Wnt1表达水平与患者术后5年内生存的关系。方法 纳入108例NSCLC患者,并于术中收集患者肺癌组织和癌旁组织。荧光定量PCR法检测肺癌及癌旁组织中LncRNA MIR503HG、Wnt1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色检测肺癌及癌旁组织中Wnt1蛋白表达。对NSCLC患者术后随访5年,记录随访期内生存状况。比较癌旁组织、肺癌组织中LncRNA MIR503HG、Wnt1 mRNA和蛋白阳性表达情况;比较不同结局NSCLC患者肺癌组织中两者表达水平及其在不同临床病理特征中的差异;Pearson法分析肺癌组织中两者表达水平的相关性;Kaplan-Meier生存曲线分析肺癌组织中两者表达水平与患者术后5年内生存的关系;多因素Cox回归分析NSCLC患者术后5年内生存的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评估肺癌组织LncRNA MIR503HG、Wnt1 mRNA表达水平对患者术后5年内生存的预测价值。结果 肺癌组织中LncRNA MIR503HG表达水平低于癌旁组织,Wnt1 mRNA表达水平和Wnt1蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。低分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移NSCLC患者肺癌组织LncRNA MIR503HG表达水平分别低于中高分化、TNM分期Ⅰ—Ⅱ期、无淋巴结转移NSCLC患者;Wnt1 mRNA表达水平分别高于中高分化、TNM分期Ⅰ—Ⅱ期、无淋巴结转移NSCLC患者(P<0.05)。肺癌组织中LncRNA MIR503HG与Wnt1 mRNA表达水平呈负相关(P<0.05)。108例NSCLC患者术后随访5年,生存48例(生存组),死亡60例(死亡组);LncRNA MIR503HG高表达组、Wnt1 mRNA低表达组术后5年累积生存率分别高于LncRNA MIR503HG低表达组和Wnt1 mRNA高表达组(P<0.05)。与生存组相比,死亡组肺癌组织LncRNA MIR503HG表达水平降低,Wnt1 mRNA表达水平升高(P<0.05)。肺癌组织LncRNA MIR503HG低表达、Wnt1 mRNA高表达、低分化、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移均是影响NSCLC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。肺癌组织LncRNA MIR503HG、Wnt1 mRNA及二者联合预测NSCLC患者术后5年内生存的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.728和0.885,联合预测效能更高(P<0.05)。结论NSCLC患者肺癌组织中LncRNA MIR503HG呈低表达,Wnt1呈高表达,二者与患者临床病理特征和术后5年内生存情况密切相关,对患者术后5年内生存情况有较高预测价值。

Wnt1a、β-Catenin及Oct4在大肠癌的表达与患者预后的关系

肿瘤中存在的肿瘤干细胞是肿瘤生长、侵袭、转移和复发的根源[1].八聚体结合转录因子4POU是全能性或多能性干细胞标记物,Wnt/β-Catenin信号转导通路在调节细胞凋亡中发挥重要作用,其异常活化在多种人类肿瘤的发生、发展中发挥了重要作用,Wnt/β-Catenin信号通路参与了大肠癌的发生、发展,本研究应用免疫组化法检测Oct4、Wnt1a、β-Catenin在大肠癌、大肠腺瘤和正常大肠黏膜中的表达情况,探讨其在大肠癌发生发展中的相互作用以及病理、临床预后的关系.

宫颈癌患者淋巴结转移的危险因素分析及血清TFF3、AIF-1、S100-A11、DKK1预测价值分析

目的 探讨宫颈癌患者淋巴结转移的危险因素分析及血清三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)、同种异体移植物炎性因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)、S100钙结合蛋白-A11(S100 calcium-binding protein-A11,S100-A11)、Wnt通路抑制因子Dickkopf-1(Wnt pathway inhibitor Dickkopf-1,DKK1)的预测价值。方法 选择2021年1月—2023年1月本院收治的71例宫颈癌患者作为研究对象,根据患者有无盆腔淋巴结转移分为淋巴结转移阳性组(28例)和淋巴结转移阴性组(43例)两组。收集两组患者临床病理特征,并检测血清TFF3、AIF-1、S100-A11、DKK1水平。结果 单因素分析显示,FIGO分期、宫旁浸润、肌层浸润、血清TFF3、S100-A11、DKK1是患者发生宫颈癌淋巴结转移的影响因素(P<0.05)。与年龄、分化程度、肿瘤大小、组织学类型、脉管浸润及血清AIF-1无关(P>0.05);Logistic多元回归分析显示,FIGO分期、宫旁浸润、肌层浸润及血清TFF3是影响宫颈癌淋巴结转移的独立因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,TFF3对淋巴结转移有中等预测价值(AUC=0.649),明显大于机会参考线下面积(P<0.05)。而AIF-1、S100-A11、DKK1对淋巴结转移无预测价值(AUC分别为0.477、0.517、0.524),与机会参考线下面积比较无统计学意义(P>0.05)。结论 FIGO分期高、宫旁浸润、肌层浸润、血清TFF3异常升高是宫颈癌淋巴结转移的危险因素,血清TFF3有望成为预测宫颈癌淋巴结转移的新标志物;血清AIF-1、S100-A11、DKK1对宫颈癌淋巴结转移的预测效能不理想。

加味桂枝附子汤联合艾灸治疗类风湿关节炎疗效研究

目的:探讨加味桂枝附子汤联合艾灸治疗类风湿关节炎(RA)疗效及对血清白细胞介素-21(IL-21)、Wnt信号通路关键抑制因子Dickkopf-1(DKK-1)的影响。方法:选取80例RA患者随机分为对照组、联合组,各40例。对照组给予加味桂枝附子汤,联合组给予加味桂枝附子汤联合艾灸治疗。比较两组中医证候积分、临床疗效、晨僵时间、压痛关节数(TJC)、肿胀关节数(SJC)、关节功能评分、视觉模拟评分(VAS)、风湿性关节炎活动度评分(DAS28)、血清IL-21、血清DKK-1、不良反应。结果:与治疗前比较,两组治疗后晨僵、关节疼痛、关节肿胀评分、晨僵时间、TJC、SJC、WOMAC评分、VAS评分、DAS28评分、血清IL-21、DKK-1水平均下降,且治疗后联合组上述指标均低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。联合组总有效率92.50%高于对照组72.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者便秘、失眠、皮肤瘙痒等不良反应发生率比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:加味桂枝附子汤联合艾灸治疗RA可有效改善患者临床症状,提高关节功能,减轻疼痛,降低血清IL-21、DKK-1水平,安全性较高。

2型糖尿病合并下肢动脉粥样硬化性病变患者血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1的表达及其临床意义

目的探讨2型糖尿病(T2DM)合并下肢动脉粥样硬化性病变(LEAD)患者血清新蝶呤、豆荚蛋白、Wnt1-诱导的信号通路蛋白1(WISP1)的表达及其临床意义。方法选取2021年1月至2022年1月哈尔滨市第一医院收治的T2DM患者114例(T2DM组),根据是否合并LEAD分为LEAD组54例和非LEAD组60例;另择同期在本院进行体检的健康志愿者52名(对照组)。收集两组对象基线资料和常规生化指标,采用ELISA法测定血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平。采用多因素logistic回归分析T2DM合并LEAD的危险因素,Pearson相关或Spearman秩相关分析血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平与炎症反应指标、糖代谢及脂代谢指标的相关性,ROC曲线分析血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1单独与联合检测预测T2DM合并LEAD的效能。结果T2DM组血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平均高于对照组(均P<0.01)。与非LEAD组比较,LEAD组年龄更大,T2DM病程更长,吸烟比例和CRP、IL-6、LDL-C、FBG、糖化血红蛋白(HbA1C)、稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平均升高(均P<0.05)。血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平与CRP、IL-6、LDL-C、FBG、HbA1C、HOMA-IR均呈正相关(均P<0.05)。年龄、T2DM病程、吸烟、CRP、IL-6、LDL-C、HbA1C、HOMA-IR、新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1均为T2DM合并LEAD的危险因素(均P<0.05)。血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1单独与联合检测预测T2DM合并LEAD的AUC分别为0.726、0.765、0.755、0.909,联合检测预测T2DM合并LEAD的AUC均大于各指标单独检测(均P<0.01)。结论血清新蝶呤、豆荚蛋白、WISP1水平升高与T2DM合并LEAD相关,联合检测3项指标对T2DM是否合并LEAD具有较高的预测效能。

急性缺血性脑卒中患者血清sTREM2和DKK-1水平检测对抑郁发生的预测价值研究

目的 研究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清可溶性髓细胞表达触发受体2(soluble triggering receptor expressed on myeloid cells 2,s TREM2)及Wnt信号通路抑制因子1(DKK-1)水平对抑郁发生的预测价值。方法 选取2019年1月~2021年1月于武汉市汉口医院住院治疗的AIS患者251例为研究对象。根据卒中后6个月汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)评分,将AIS患者分为非卒中后抑郁(NPSD)组(<7分,n=183)和卒中后抑郁(PSD)组(≥7分,n=68)。比较两组一般临床资料、神经功能评分及实验室检查指标的差异。相关性分析采用Pearson相关分析。多因素Logistic回归分析影响AIS患者PSD发生的影响因素。受试者工作曲线分析血清sTREM2,DKK-1及联合检测对AIS患者PSD的预测价值。结果 PSD组患者血清sTREM2(312.79±51.24 ng/L),DKK-1(4.47±0.62μg/L),美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、改良Rankin量表(mRS)评分均高于NPSD组(172.96±32.55 ng/L,3.01±0.57μg/L),日常生活活动能力量表(ADL)评分明显低于NPSD组,差异均有统计学意义(t=25.585,17.607,5.937,47.288,2.990,均P<0.05)。PSD组血清sTREM2,DKK-1水平与NIHSS评分、mRS评分均呈显著正相关(r=0.657,0.669;0.620,0.614,均P<0.05),与ADL评分呈显著负相关(r=-0.712,-0.701,均P<0.05)。sTREM2(OR=1.219,95%CI=1.040~1.429)升高,DKK-1(OR=1.363,95%CI=1.076~1.728)升高是影响AIS患者PSD发生的独立危险因素(P <0.05)。血清sTREM2,DKK-1两者联合对AIS患者PSD的预测曲线下面积(95%CI)为0.914(0.843~0.967),高于血清sTREM2,DKK-1单一指标检测[0.823(0.760~0.869),0.801(0.743~0.851)],差异具有统计学意义(Z=3.864,4.072,均P<0.05)。结论 血清sTREM2和DKK-1水平升高是AIS患者PSD的独立影响因素,对AIS发生6个月内抑郁的发生有预测作用。

Wnt/β-catenin信号通路相关调控因子在气虚血瘀型特发性肺纤维化中的动态表达研究

目的:探索Wnt/β-catenin信号通路中Wnt1、β-catenin在气虚血瘀型特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)中的动态表达,寻找最佳干预靶点及最佳干预时间。方法:采用力竭游泳+高脂饮食+气管内推注博来霉素法复制气虚血瘀型IPF大鼠模型,空白组常规饲养+气管内推注生理盐水。选取SPF级Wistar大鼠80只,雌雄各半。随机抽取15只为空白组,分为空白7、14、28 d组3组;剩余65只进行证候造模,并选取45只证候造模成功大鼠,气管内推注博来霉素5.0μg/g体质量,分为模型7、14、28 d组3组。采用免疫印迹法检测大鼠肺组织Wnt1、β-catenin、肝细胞生长因子(HGF)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达,酶联免疫吸附试验检测大鼠血清HGF、CTGF的含量。结果:气虚血瘀型IPF大鼠肺组织Wnt1、β-catenin、HGF、CTGF蛋白表达,空白组各时间点表达无明显差异(P>0.05),而同期模型组表达均明显升高(P<0.01)。Wnt1、β-catenin蛋白表达方面,模型组之间进行两两对比,除β-catenin模型28 d与模型14 d无明显差异外,余两两间对比差异均有统计学意义(P<0.01)。HGF、CTGF方面,模型组之间进行两两对比,除CTGF模型28 d与模型7 d、14 d对比无明显差异外,余两两间对比差异均有统计学意义(P<0.01)。血清Wnt1、β-catenin含量方面,空白组各时间点含量对比差异无统计学意义(P>0.05);模型组与同期空白组对比,含量在14 d、28 d时均升高(P<0.01或P<0.05);模型14 d的Wnt1较模型7 d对比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:气虚血瘀型IPF大鼠模型中Wnt1、β-catenin表达升高,可能会导致Wnt/β-catenin信号通路被激活,介导下游靶基因的表达,使细胞外基质聚集,最终导致IPF的发生。

血清胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1及dickkopfWNT信号通路抑制剂1对食管癌的诊断价值

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)及dickkopf WNT信号通路抑制剂1(DKK1)对食管癌的诊断价值。方法选取62例食管癌患者作为食管癌组,59例健康体检者作为对照组。对比两组受试者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,对比不同分期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,分析TK1、CYFRA21-1、DKK1单独及联合检测对食管癌的诊断价值。结果食管癌组患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TK1+CYFRA21-1+DKK1联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度分别为88.50%、79.10%,曲线下面积为0.779(95%CI:0.695~0.864),均高于三者单独检测。结论TK1、CYFRA21-1、DKK1联合检测有利于提高食管癌的诊断效能,防止误诊漏诊,三者对其病情评估具有一定参考价值。

苓桂术甘汤对心梗后慢性心衰模型大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt1/β-catenin信号通路蛋白表达的影响

目的:观察苓桂术甘汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用和可能机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法复制心肌梗死后慢性心衰大鼠模型;造模24 h后,连续干预4 w。采用小动物彩色多普勒超声成像系统检测大鼠LVIDd、LVIDs、LVEF、LVFS;HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnT及心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ水平;Western Blot检测大鼠心肌组织Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著升高,LVEF、LVFS水平显著降低(P<0.01),心肌组织出现明显的心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及间质纤维化等病理变化,血清CK-MB、cTnT和心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ含量及CollagenⅠ/CollagenⅢ比值显著升高,心肌组织细胞质GSK-3β蛋白表达显著降低,心肌组织α-SMA蛋白及细胞质Wnt1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白和细胞核β-catenin表达显著升高,心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤干预4 w后,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:苓桂术甘汤能减轻心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌损伤并抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠心功能,其作用机制与其抑制心肌组织Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

基于Wnt/β-catenin通路探讨隔药饼灸对高脂血症兔调脂机制的影响

目的观察隔药饼灸对高脂血症兔肝组织Wnt1、β-卷曲蛋白(β-catenin)、散乱蛋白-1(dishevelled-1,dvl-1)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein1c,SREBP1c)的mRNA表达量的影响,探讨隔药饼灸调脂的作用机制。方法将48只新西兰兔随机分为正常组、模型组、隔药饼灸组和阿托伐他汀组,每组12只。正常组采用普通饲料喂养,其余各组采用高脂饲养法喂养8周,待造模成功后,除正常组、模型组外,隔药饼灸组选取两组穴位交替施灸(Ⅰ组穴位为巨阙、天枢、丰隆;Ⅱ组穴位为心俞、肝俞、脾俞),阿托伐他汀组将阿托伐他汀钙片碾成粉末后拌入第一口饲料喂食,每日1次,连续8周。测定各组兔血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(glycerin trilaurate,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,RT-PCR法测定各组兔Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表达量,油红O染色观察肝组织脂质沉积情况。结果(1)血脂结果:与正常组相比,模型组血清TC、TG、LDL-C上升(P<0.001);与模型组相比,隔药饼灸组和阿托伐他汀组TC、TG、LDL-C下降(P<0.01,P<0.001);隔药饼灸组与阿托伐他汀组相比,TC、TG、LDL-C差异无统计学意义(P>0.05)。(2)RT-PCR结果:与正常组相比,模型组肝组织Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表达量上升(P<0.001);与模型组相比,隔药饼灸组和阿托伐他汀组肝组织Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表达量均下降(P<0.01,P<0.001);隔药饼灸组与阿托伐他汀组肝组织Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。(3)脂质沉积结果:与正常组相比,模型组、隔药饼灸组、阿托伐他汀组脂质沉积均有增加,模型组增加更明显;与模型组相比,隔药饼灸组、阿托伐他汀组脂质沉积明显减少;隔药饼灸组与阿托伐他汀组无明显差异。结论隔药饼灸可能通过抑制Wnt/β-catenin通路,下调高脂血症兔SREBP1c含量,发挥调脂作用。

决银方通过降低WIF-1基因甲基化改善寻常型银屑病血热证

目的探究决银方治疗寻常型银屑病血热证的分子机制。方法将患者分为非银屑病受试者组、寻常型银屑病非血热证组、寻常型银屑病血热证组、决银方治疗愈显组和决银方治疗无效组。分别于局部浸润麻醉下运用皮肤病理活检术切取1.0 cm×0.5 cm皮损组织进行HE染色、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blotting)、亚硫酸盐扩增子测序、甲基化特异性PCR等技术检测皮损区组织病理改变、Wnt抑制因子-1(WIF-1)基因表达及甲基化水平。结果决银方治疗后,与决银方治疗无效组比,决银方治疗愈显组患者皮损组织病理切片明显改善;皮损区WIF-1信使核糖核酸(mRNA)水平明显升高(P<0.01);与寻常型银屑病血热证患者比较,决银方治疗愈显组患者皮损区WIF-1蛋白表达明显升高。亚硫酸盐扩增子测序结果显示决银方治疗愈显组患者WIF-1基因CpG岛位点甲基化水平明显降低(P<0.05)。细胞实验中,转染WIF-1短发夹核糖核酸(shRNA)后,人永生化角质形成细胞(HaCaT)中WIF-1蛋白水平降低;去甲基化药物处理细胞后,其蛋白水平升高;转染WIF-1 shRNA及用去甲基化药物处理细胞后,决银方治疗愈显组患者血清干预的细胞中WIF-1蛋白水平升高,基因甲基化程度降低。结论决银方治疗寻常型银屑病血热证患者通过降低WIF-1基因启动子区甲基化水平,提高其基因表达水平来实现。

FBXL2和Dkk-1在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的研究结直肠癌(CRC)组织中F-盒富含亮氨酸的重复蛋白2(FBXL2)、Wnt信号通路抑制剂1(Dkk-1)的表达及临床意义。方法选取2017年10月—2019年5月保定市第一中心医院普通外科诊治CRC患者75例作为研究对象。应用荧光定量PCR及免疫组化检测CRC癌组织和癌旁组织中FBXL2、Dkk-1 mRNA及蛋白表达水平。比较不同临床病理特征CRC患者癌组织中FBXL2、Dkk-1蛋白表达差异。Kaplan-Meier生存分析(Log-rank检验)FBXL2、Dkk-1蛋白表达与CRC患者生存预后的关系。多因素COX回归分析影响CRC患者生存预后的危险因素。结果CRC癌组织中FBXL2、Dkk-1 mRNA表达水平低于癌旁组织(t=25.053、34.053,P均<0.001)。CRC癌组织中FBXL2、Dkk-1蛋白表达阳性率低于癌旁组织(χ^(2)=58.134、51.042,P均<0.001)。CRC癌组织中FBXL2与Dkk-1蛋白表达呈显著正相关(r s=0.714,P<0.001)。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结转移阴性CRC患者癌组织中FBXL2、Dkk-1蛋白表达阳性率高于TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移阳性患者,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=7.588/0.006、5.220/0.022)。FBXL2阴性表达组患者3年累积生存率明显低于阳性表达组患者(χ^(2)=5.991,P=0.014);Dkk-1阴性表达组患者3年累积生存率明显低于阳性表达组患者(χ^(2)=8.058,P=0.005)。肿瘤分期Ⅲ期、淋巴结转移阳性、FBXL2阴性表达、Dkk-1阴性表达是影响CRC患者预后的独立危险因素[HR(95%CI)=1.613(1.223~2.126),1.917(1.314~2.799),1.837(1.229~2.745),1.738(1.246~2.426),P均<0.001]。结论CRC癌组织中FBXL2、Dkk-1表达降低,两者表达与CRC肿瘤分期及淋巴结转移有关,是评估CRC患者生存预后新的肿瘤标志物。

青娥丸调控Wnt1/β-catenin信号通路治疗糖尿病性骨质疏松症

目的探究青娥丸对糖尿病性骨质疏松症(diabetic osteoporosis,DOP)小鼠模型Wnt/β-catenin通路的影响。方法采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲菌素建立DOP小鼠模型,对小鼠进行药物干预,分为空白组、模型组、青娥丸低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组,进行一般状态观察,股骨组织进行HE染色,验证造模成功情况。生化检测各组小鼠碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、天冬氨酸转氨酶(AST)的水平,免疫组化检测股骨Wnt/β-catenin信号传导通路中相关蛋白Wnt1、β-catenin、Runx2表达水平,HE染色观察各组股骨组织细胞形态,qPCR检测股骨组织中GSK-3β、低密度脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、COL1A1 mRNA水平。结果与对照组相比,模型组小鼠骨小梁间隔增大,骨小梁之间连接减少,小鼠多饮多尿少动,尾静脉血糖值增加(P<0.01),血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3βmRNA水平均增加(P<0.01),体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平下调(P<0.01),Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白呈少量阳性表达(P<0.01)。与模型组相比,青娥丸组和阿仑膦酸钠组骨小梁间隔变小,骨小梁间的连接增多,尾静脉血糖值下降(P<0.01),血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3βmRNA水平均减少(P<0.01),体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平上调(P<0.01),Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白阳性表达增多(P<0.01)。结论青娥丸可增强DOP小鼠骨组织的修复作用,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路的激活有关。