应用siRNA技术下调Wnt2B抑制乳腺癌细胞恶性表型的研究

目的:通过体外实验探讨Wnt2B在乳腺癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学的方法检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中Wnt2B的表达;采用RNA干扰技术,在MCF7细胞中沉默Wnt2B的表达,并经Western blot检测其沉默效率;应用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测、观察Wnt2B沉默后对MCF7细胞凋亡、细胞骨架构成的改变。同时在蛋白水平上检测沉默Wnt2B后对细胞P53/P21通路的影响。结果:Wnt2B蛋白在乳腺癌中的表达明显高于在正常乳腺组织中的表达;第2对Wnt2B siRNA(2号siRNA)对Wnt2B的沉默效果最为明显;沉默Wnt2B后细胞早期凋亡率和晚期凋亡率相对于对照细胞均明显增高并伴有细胞骨架明显的改变,表现为细胞骨架溶解,正常形态消失。同时,细胞内P53及P21表达水平随Wnt2B沉默而明显下降。结论:Wnt2B基因可以改变乳腺癌细胞的凋亡水平和骨架结构,在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用,为乳腺癌的治疗提供了新的靶点。

Wnt_2B基因在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达

目的:探讨Wnt2B基因在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达及其意义。方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术检测胃癌组织及相应癌旁组织中Wnt2B基因mRNA的表达水平。结果:Wnt2B基因在37例人类胃癌组织及相应癌旁组织中均有表达,阳性率达100%;Wnt2B基因在胃癌组织中的表达水平明显高于相应癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:Wnt2B基因可能参与了胃癌的发生发展过程,在胃癌组织中表达上调可能有助于胃癌的早期诊断。

miRNA-324-3p及其靶基因WNT2B在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-324-3p及其靶基因WNT2B在鼻咽癌组织中的表达和临床意义。方法:qRTPCR技术检测miRNA-324-3p、WNT2BmRNA的相对表达量,Western blot技术检测WNT2B蛋白在39例鼻咽癌组织及21例鼻咽非肿瘤上皮组织中的表达,分析其表达水平与鼻咽癌临床病理特征的关系。结果:在鼻咽癌组织中miRNA-324-3p的相对表达量显著下调(P<0.01),WNT2BmRNA和蛋白的相对表达量则显著上调(均P<0.01)。鼻咽癌组织中miRNA-324-3p与WNT2BmRNA及蛋白的表达呈负相关,WNT2BmRNA与蛋白的表达呈正相关(均P<0.05)。miRNA-324-3p、WNT2BmRNA及蛋白的表达均与鼻咽癌患者T分级、临床分期及淋巴结转移密切相关(均P<0.05),而与患者的性别、年龄无明显相关性(均P>0.05)。结论:鼻咽癌组织中miRNA-324-3p的表达下调,WNT2B的表达上调,两者可能存在相互关系,共同介导鼻咽癌的发生、发展。

WNT2B对人骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响

目的观察WNT2B对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）向软骨细胞分化的影响。方法采用慢病毒载体在1例hBMSCs中过表达WNT2B基因，并将其进行成软骨细胞诱导分化，以实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测软骨细胞标志基因性别决定区Y框蛋白9（Sox-9）和Collagen Ⅱ的表达变化，在光镜下计数软骨岛的数目，定量检测软骨细胞分泌硫酸化糖胺聚糖的染色强度和肥大软骨细胞数目。结果在hBMSCs成软骨诱导分化过程中，过表达WNT2B对Sox-9基因的表达无显著影响（P=0.564）、显著抑制Collagen Ⅱ基因的表达（P=0.009），显著减少软骨岛的数目[（78.833±8.796）个/孔比（32.333±4.844）个/孔，P=0.000]，显著减少软骨细胞分泌硫酸化糖胺聚糖的染色强度[（80.247±4.806）个/孔比（53.165±4.723）个/孔，P=0.000]，显著减少三维诱导培养形成的肥大软骨细胞数[（13.833±2.994）个/视野比（6.667±1.211）个/视野，P=0.000]。结论WNT2B可以抑制体外hBMSCs向软骨细胞的分化成熟。