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胚胎期Wnt3a基因特异性敲降对小鼠大脑神经发生的影响
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作者 赵程 焦建伟 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2024年第3期355-358,共4页
目的 研究胚胎期第13天(E13)特异性敲降Wnt3a基因对小鼠大脑神经发生的影响。方法 利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证Wnt3a在脑皮质神经干细胞中的敲降率。通过子宫内电穿孔实验在E13时将Wnt3a-shRNA质粒电转到胎鼠大脑皮质中,从而下调W... 目的 研究胚胎期第13天(E13)特异性敲降Wnt3a基因对小鼠大脑神经发生的影响。方法 利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证Wnt3a在脑皮质神经干细胞中的敲降率。通过子宫内电穿孔实验在E13时将Wnt3a-shRNA质粒电转到胎鼠大脑皮质中,从而下调Wnt3a在脑皮质神经干细胞中的表达。在E16时收取小鼠脑组织,进行免疫荧光染色检测,观察下调Wnt3a后小鼠脑组织中神经元发育进程的改变。结果 RT-qPCR结果显示,神经干细胞中Wnt3a敲降后其mRNA表达水平降低54%,与对照组相比差异具有统计学意义(t=11.260,P<0.001)。免疫荧光染色结果显示,Wnt3a下调导致大脑皮质的皮质板(CP)中的绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞比例降低,大脑中间带(IZ)的GFP阳性细胞比例上升,差异均具有统计学意义(t=4.400、4.482,P<0.01)。结论 E13时特异性下调小鼠脑中Wnt3a基因导致GFP荧光分布异常,神经发生过程受到干扰。 展开更多
关键词 wnt3a蛋白质 小鼠 基因敲除 神经发生 大脑皮质 胚胎发育 电穿孔
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电针对膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响 被引量:13
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作者 李洪涛 刘昊 +2 位作者 杨方军 李艳秋 孙晓伟 《针灸临床杂志》 2017年第3期65-68,共4页
目的:观察电针对膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨内Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:32只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、DKK1组和电针组,用4%木瓜蛋白酶诱导大鼠膝关节骨性关节炎模型,分别于造模成功后5周和7周取材... 目的:观察电针对膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨内Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:32只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、DKK1组和电针组,用4%木瓜蛋白酶诱导大鼠膝关节骨性关节炎模型,分别于造模成功后5周和7周取材,观察大鼠膝关节软骨形态变化以及Western Blot法检测大鼠关节软骨中Wnt3a、β-catenin含量的变化。结果:正常组大鼠在5周和7周时,关节软骨内Wnt3a蛋白呈低表达,分别为0.233±0.04和0.193±0.03;而各造模组大鼠,在这两个时间点,关节软骨内Wnt3a蛋白含量均有不同程度的升高,其中电针组、DKK1组均较模型组有所降低,且具有统计学意义(P<0.05),而此两组间比较无差异(P>0.05)。正常组大鼠在5周和7周时,关节软骨内β-catenin蛋白呈低表达,分别为0.163±0.04和0.143±0.03;而各造模组大鼠,在这两个时间点,关节软骨内β-catenin蛋白含量均有不同程度的升高,其中电针组、DKK1组均较模型组有所降低,且具有统计学意义(P<0.05),而此两组间比较无差异(P>0.05)。结论:电针可能是通过下调Wnt3a、β-catenin蛋白表达、抑制Wnt信号通路,进而保护受损的关节软骨,改善膝关节骨性关节炎大鼠的关节结构和功能状态。 展开更多
关键词 膝关节骨性关节炎 针刺 wnt3a蛋白 Β-CATENIN蛋白 WNT信号通路
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小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒载体的构建及神经干细胞转染 被引量:3
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作者 毕永延 潘栋超 +2 位作者 冯东福 陈二涛 汪洋 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1455-1459,共5页
目的构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达。方法利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Green1慢病毒重组质粒... 目的构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达。方法利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Green1慢病毒重组质粒,通过瞬时转染法包装出病毒上清,感染NSCs,设为Wnt3a-NSCs组;同时设GFP感染NSCs组(GFP-NSCs组)和未感染NSCs组(NSCs组)作为对照。免疫荧光染色法对Wnt3a-NSCs组NSCs进行nestin鉴定;Real-Time PCR检测各组细胞mWnt3a mRNA的表达;Western blotting检测各组细胞mWnt3a、β-catenin蛋白的表达。结果经限制性内切酶检测、基因测序和绿色荧光观察证实成功构建了携带mWnt3a基因的重组慢病毒,且慢病毒滴度达3×108TU/mL。Wnt3a-NSCs组NSCs在荧光显微镜下证实有绿色荧光,且nestin表达阳性。Real-Time PCR和Western blotting结果显示感染后7 d,Wnt3a-NSCs组mWnt3a mRNA和蛋白以及β-catenin蛋白均明显高于GFP-NSCs组和NSCs组(P<0.01)。结论成功构建了表达mWnt3a基因的慢病毒载体,在体外培养条件下可以成功转染NSCs。 展开更多
关键词 神经干细胞 wnt3a 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 基因治疗
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Wnt3a协同BMP9调控间充质干细胞成骨分化及机制研究 被引量:7
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作者 张晓 徐道晶 +2 位作者 林良波 梁熙 黄伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期565-569,共5页
目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mes-enchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制。方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通... 目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mes-enchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制。方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通路,联合BMP9作用于细胞,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性测定、钙盐沉积实验、real time PCR、免疫细胞化学染色等方法观测BMP9与经典Wnt信号通路联合后对MSCs成骨分化的影响。结果:Wnt3a明显促进了BMP9诱导的ALP活性的增加[F=264.962,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=7.19,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=16.36,P=0.000],同时也明显增加了成骨标志物骨钙蛋白(Osteocalcin,OC)[F=3 920.102,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=39.10,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=62.56,P=0.000]和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)[F=1 935.824,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=40.88,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=56.42,P=0.000]的表达以及Runx2的mR-NA的表达[F=3 635.980,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=79.37,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=86.96,P=0.000],并且还促进了钙盐沉积。结论:Wnt3a与BMP9相互协同诱导MSCs的骨向分化,其中成骨转录因子Runx2可能作为二者的交汇点起了重要作用。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白9 wnt3a 间充质干细胞 骨向分化
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刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Wnt3a/β-catenin表达的影响 被引量:2
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作者 卢军 何承辉 +1 位作者 阿依提拉·麦麦提江 康小龙 《中国现代医学杂志》 CAS 2020年第21期1-5,共5页
目的研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Wnt通路相关蛋白Wnt3a、Wnt1诱导的信号通路蛋白1(WISP1)和β-连环蛋白(β-catenin)的调控作用。方法采用盐酸博莱霉素皮下注射法复制系统性硬皮病小鼠模型后,给予受试药乳膏冶疗8周。酶联免... 目的研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Wnt通路相关蛋白Wnt3a、Wnt1诱导的信号通路蛋白1(WISP1)和β-连环蛋白(β-catenin)的调控作用。方法采用盐酸博莱霉素皮下注射法复制系统性硬皮病小鼠模型后,给予受试药乳膏冶疗8周。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠皮肤组织Wnt3a和WISP1的浓度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测小鼠皮肤组织β-catenin mRNA的表达,免疫组织化学法检测小鼠皮肤组织β-catenin蛋白表达。结果刺山柑总生物碱450mg/kg可降低Wnt3a的浓度;450mg/kg和900mg/kg可降低β-catenin mRNA和蛋白表达(P<0.05),对WISP1浓度无影响(P>0.05)。结论刺山柑总生物碱可抑制系统性硬皮病小鼠皮肤组织Wnt3a和β-catenin的异常表达,对系统性硬皮病Wnt/β-catenin通路的过度激活有一定抑制作用。 展开更多
关键词 硬皮病 系统性 刺山柑总生物碱 wnt3a β-连环蛋白 Wnt1诱导的信号通路蛋白1
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丁苯酞对阿尔茨海默病模型大鼠海马CA1区Wnt3a及β-连环蛋白表达的影响 被引量:6
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作者 邓春颖 李海滨 +2 位作者 毛文静 李世英 刘斌 《安徽医药》 CAS 2020年第9期1701-1704,I0001,共5页
目的观察丁苯酞(dl-3-n-butylphthalidle)软胶囊对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马CA1区Wnt3a蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,探寻丁苯酞发挥脑保护作用的可能机制。方法将72只雄性SD大鼠按随机数字表法分为... 目的观察丁苯酞(dl-3-n-butylphthalidle)软胶囊对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马CA1区Wnt3a蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,探寻丁苯酞发挥脑保护作用的可能机制。方法将72只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、AD模型组(AD组)、丁苯酞治疗组(丁苯酞组)。向双侧海马区注射β-淀粉样蛋白1-42(beta-amyloid people 1-42,Aβ1-42)制作AD模型,Sham组注射5μL 0.9%氯化钠溶液。造模成功后4周,丁苯酞组给予丁苯酞与食用油混合后制成的丁苯酞混合溶液灌胃;Sham组和AD组采用同等剂量的食用油进行灌胃。采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法分别于给药后1、2、4和8周检测海马CA1区Wnt3a及β-catenin表达情况。结果蛋白质印迹法表明与Sham组给药后1、2、4和8周[(3 845.25±52.35),(4 385.06±108.85),(9 392.19±81.07),(6 833.15±76.03)]相比,AD组各时间点Wnt3a蛋白表达量增多[(5 595.54±94.60),(7 223.89±86.73),(13 671.83±312.38),(11 641.04±203.65),均P<0.01];各时间点β-catenin蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与AD组[(4 132.90±79.63),(4 758.74±155.14),(5 188.92±111.82),(5 912.07±83.26)]相比,丁苯酞组各时间点Wnt3a蛋白[(6 261.26±206.51),(8 427.83±293.61),(16 469.74±204.55),(13 438.21±12 399.19)]、β-catenin蛋白表达量明显增多[(5 569.53±96.52),(7 127.78±69.64),(11 454.94±396.43),(9 937.91±157.87),均P<0.01]。免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测结果相同。结论丁苯酞可通过上调Wnt3a及β-catenin蛋白的表达,发挥对AD模型大鼠的脑保护作用。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 海马 丁苯酞 wnt3a蛋白 Β-连环蛋白 大鼠 SPRAGUE-DAWLEY
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提升上清液Wnt3a蛋白含量的L-Wnt3a细胞培养体系及其促进多能干细胞诱导黑素细胞分化的效应研究 被引量:1
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作者 曲勃维 刘莉萍 +1 位作者 鲁浩 李遇梅 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2022年第6期497-503,共7页
目的:明确L-Wnt3a条件培养基的收集方案并标定Wnt3a蛋白浓度,验证其作为多能干细胞向黑素细胞分化体系中Wnt3a来源的作用。方法:通过观察L-Wnt3a细胞的生长特性及其分泌Wnt3a蛋白量特点,设定收集条件培养基的参数,使用ELISA法对收集到... 目的:明确L-Wnt3a条件培养基的收集方案并标定Wnt3a蛋白浓度,验证其作为多能干细胞向黑素细胞分化体系中Wnt3a来源的作用。方法:通过观察L-Wnt3a细胞的生长特性及其分泌Wnt3a蛋白量特点,设定收集条件培养基的参数,使用ELISA法对收集到的条件培养基进行Wnt3a蛋白浓度的标定,配制出明确Wnt3a浓度的黑素细胞分化培养基,对胚胎干细胞株WA09及诱导多能干细胞株WTC-11细胞进行黑素细胞的悬浮诱导分化,对获得的诱导黑素细胞进行黑素相关基因表达检测及Masson-Fontana染色等相关验证。结果:优化后的L-Wnt3a条件培养基收集体系能够稳定高效获取Wnt3a蛋白,明确Wnt3a浓度的分化体系能够使WA09和WTC-11成功诱导黑素细胞,使用相应浓度的Wnt3a重组蛋白也能够达到相似的效果。结论:通过优化收集方案能够高效获得明确浓度的L-Wnt3a条件培养基,将其应用于明确Wnt3a浓度的培养体系能够成功诱导多能干细胞分化为功能性黑素细胞。 展开更多
关键词 黑素细胞 多能干细胞 wnt3a蛋白 诱导多能干细胞 细胞分化 拟胚体
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Wnt3a联合BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化 被引量:2
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作者 刘书霞 耿雪静 +1 位作者 房松华 陈沅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期448-451,共4页
目的探讨Wnt3a单独以及联合骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒AdGFP、AdBMP9、AdWnt3a;分别转染C3H10T1/2细胞3周后,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧... 目的探讨Wnt3a单独以及联合骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒AdGFP、AdBMP9、AdWnt3a;分别转染C3H10T1/2细胞3周后,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧光蛋白表达;流式细胞术检测细胞转染效率;Westernblot法、免疫荧光技术及实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测缝隙连接蛋白43(Cx43)、肌钙蛋白T(cTnT)、GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌细胞增强因子2C(MEF2C)的表达。结果经HEK293细胞扩增可得到高滴度的重组腺病毒;转染C3H10T1/2细胞3周后,Wnt3a组Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C的表达量与空白组比较无明显差异;Wnt3a联合BMP9组的Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C基因的表达量显著高于空白组、GFP组和Wnt3a组,与单独BMP9组相比无显著性差异。结论Wnt3a不能单独诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化;Wnt3a联合BMP9可诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白9 wnt3a C3H10T1/2细胞 心肌细胞样细胞
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Wnt3a在慢性牙周炎中的表达及临床意义 被引量:2
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作者 程焕芝 高秀秋 《天津医药》 CAS 2015年第8期883-885,共3页
目的探讨Wnt3a在慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其与附着丧失的关系。方法选择15例慢性牙周炎患者(牙周炎组)和15例牙周健康者(对照组),临床检查记录2组的探诊深度和附着丧失水平,采用RT-PCR和Western-Blot检测牙龈组织中Wnt3a的表... 目的探讨Wnt3a在慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其与附着丧失的关系。方法选择15例慢性牙周炎患者(牙周炎组)和15例牙周健康者(对照组),临床检查记录2组的探诊深度和附着丧失水平,采用RT-PCR和Western-Blot检测牙龈组织中Wnt3a的表达水平,并分析Wnt3a蛋白表达与附着丧失的相关性。结果牙周炎组的探诊深度高于对照组(mm:7.93±1.56 vs 1.83±0.37),其临床附着丧失为(7.76±1.34)mm,而对照组的口腔检查中未见临床附着。与对照组比较,牙周炎组的牙龈组织中Wnt3a m RNA(0.49±0.03 vs 0.36±0.04)和蛋白的表达水平(0.57±0.14 vs 0.43±0.17)均较低(t分别为12.015和2.381,P<0.05)。并且,附着丧失的程度与牙周炎患者牙龈组织中Wnt3a蛋白的表达呈负相关(r=-0.564,P=0.028)。结论 Wnt3a在慢性牙周炎中表达下调,与慢性牙周炎的附着丧失有密切关系,可能在慢性牙周炎的骨吸收中起到了一定的作用。 展开更多
关键词 牙周炎 慢性病 牙龈 WNT蛋白质类 临床附着丧失
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全身振动训练对骨质疏松大鼠股骨生物力学与Wnt3a蛋白表达的影响 被引量:3
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作者 肖庆群 郑印渝 王亮 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期453-458,共6页
目的探讨全身振动训练对股骨组织生物力学与Wnt3a蛋白表达的影响。方法取雌性SD大鼠48只,随机分为假手术组、骨质疏松组与全身振动组,每组16只。采用Micro-CT检测骨形态计量学参数,三点弯实验检测骨结构力学参数与材料力学参数,Western ... 目的探讨全身振动训练对股骨组织生物力学与Wnt3a蛋白表达的影响。方法取雌性SD大鼠48只,随机分为假手术组、骨质疏松组与全身振动组,每组16只。采用Micro-CT检测骨形态计量学参数,三点弯实验检测骨结构力学参数与材料力学参数,Western blotting检测Wnt3a、β-catenin蛋白表达量,qRT-PCR检测Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、Tcf1基因表达量。结果与假手术组相比较,骨质疏松组骨密度、骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度及皮质骨厚度均降低,骨小梁间隙升高;与骨质疏松组比较,全身振动组骨密度、骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度及皮质骨厚度均升高,骨小梁间隙降低。与假手术组比较,骨质疏松组最大载荷、弹性载荷、最大挠度降低;与骨质疏松组比较,全身振动组最大载荷、弹性载荷、最大挠度升高。与假手术组比较,骨质疏松组最大应力、弹性应力、最大应变和弹性模量降低;与骨质疏松组比较,全身振动组弹性应力、最大应变和弹性模量升高。与假手术组比较,骨质疏松组Wnt3a、β-catenin蛋白及基因表达降低,cyclin D1、Tcf1基因表达量降低;与骨质疏松组比较,全身振动组Wnt3a、β-catenin蛋白及基因表达升高,cyclin D1、Tcf1基因表达量升高。结论全身振动训练可改善骨质疏松大鼠股骨生物力学性能,提高其Wnt3a蛋白表达。研究结果为全身振动训练防治骨质疏松提供了实验室参考数据。 展开更多
关键词 骨质疏松 全身振动 wnt3a蛋白 生物力学
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sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成作用的初步研究
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作者 汤寅虹 杨珂 +5 位作者 杨恬 叶吉星 刘鹏 连小华 郭海英 彭惠民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期228-231,共4页
目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法... 目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法观察黑素形成情况;RT-PCR检测酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1,TRP-1)、TYR基因的表达;Western blot检测TRP-1、TYR蛋白的表达水平。结果 L-DOPA测定酪氨酸酶活性结果显示Wnt3a+sFRP5处理组TYR活性低于Wnt3a处理组,差异有统计学意义(P<0.05);Masson-Fontanas银染色法显示Wnt3a+sFRP5处理组形成的黑素明显低于Wnt3a处理组;RT-PCR检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR基因的表达(P<0.05);Western blot检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 sFRP5能抑制Wnt3a对黑素细胞黑素生成的作用。 展开更多
关键词 sFRP5 wnt3a 黑素细胞
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Wnt3a enhances bone morphogenetic protein 9-induced osteogenic differentiation of C3H10T1/2 cells 被引量:9
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作者 ZHANG Xiao LIN Liang-bo +5 位作者 XU Dao-jing CHEN Rong-fu TAN Ji-xiang LIANG Xi, HU Ning HUANG Wei 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2013年第24期4758-4763,共6页
Background Bone morphogenetic protein 9 (BMP9) and Wnt/13-catenin signaling pathways are able to induce osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs), but the role of Wnt/13-catenin signaling pathway... Background Bone morphogenetic protein 9 (BMP9) and Wnt/13-catenin signaling pathways are able to induce osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs), but the role of Wnt/13-catenin signaling pathway in BMP9-induced osteogenic differentiation is not well understood. Thus, our experiment was undertaken to investigate the interaction between BMP9 and Wnt/13-catenin pathway in inducing osteogenic differentiation of MSCs. Methods C3H10T1/2 cells were infected with recombinant adenovirus expressing BMP9, Wnt3a, and BMPg+Wnt3a. ALP, the early osteogenic marker, was detected by quantitative and staining assay. Later osteogenic marker, mineral calcium deposition, was determined by Alizarin Red S staining. The expression of osteopotin (OPN), osteocalcin (OC), and Runx2 was analyzed by Real time PCR and Western blotting. In vivo animal experiment was carried out to further confirm the role of Wnt3a in ectopic bone formation induced by BMP9. Results The results showed that Wnt3a enhanced the ALP activity induced by BMP9 and increased the expressions of OC and OPN, with increase of mineral calcium deposition in vitro and ectopic bone formation in vivo. Furthermore, we also found that Wnt3a increased the level of Runx2, an important nuclear transcription factor of BMP9. Conclusion Canonical Wnt/13-catenin signal pathway may play an important role in BMP9-induced osteogenic differentiation of MSCs, and Runx2 may be a linkage between the two signal pathways. 展开更多
关键词 bone morphogenetic protein 9 wnt3a osteogenic differentiation mesenchymal stem cell
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Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的研究 被引量:2
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作者 包秀丽 宋慧 汤欣 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期312-317,共6页
目的研究Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的作用,并探讨相关分子机制。方法实验研究。构建Wnt3acDNA表达载体,采用脂质体介导转染技术将Wnt3acDNA表达载体瞬时转染人人晶状体上皮细胞系SRAOI/04细胞中,对照组转入pcDNA3-H... 目的研究Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的作用,并探讨相关分子机制。方法实验研究。构建Wnt3acDNA表达载体,采用脂质体介导转染技术将Wnt3acDNA表达载体瞬时转染人人晶状体上皮细胞系SRAOI/04细胞中,对照组转入pcDNA3-HA表达载体,蛋门印迹法测定验证过表达效果;蛋白印迹法及免疫荧光染色检测晶状体上皮细胞中B—catenin的表达和定位变化,以及细胞上皮表型标记物E—cadherin和间质表型标记物纤维连接蛋白的表达;体外划痕实验及Transwell小室迁移实验检测Wnt3a过表达对SRAOI/04细胞的迁移运动能力的影响。组间计量资料的比较,采用Student’st检验分析。结果通过构建人Wnt3acDNA表达载体获得Wnt3a过表达的wnt3a/sRA01/04细胞及对照pcDNA3-HA/SRAOI/04细胞。Wnt3a过表达促使SRAOI/04细胞内的B—catenin细胞定位由胞质转人胞核;使晶状体上皮细胞发生上皮间充质转化(上皮表型E—cadhefin表达降低,间质表型纤维连接蛋白表达升高)。体外划痕试验中划痕24h后测得wnt3a/sRA01/04细胞的迁移距离是(0.36±0.02)mm,明显高于对照组(t=21.98,P〈0.01);Transwell小室迁移试验中48h后穿过聚碳酸酯膜的wnt3a/SRA01/04细胞数为(92.25±10.34)个,明显多于对照组(t=10.40,P〈0.01),证明wnt3a/sRA0104细胞的运动迁移能力大大增强。结论在人品状体上皮细胞SRA01/04中,Wnt3a过表达使Wnt/β-catenin信号通路活化,诱导细胞发生上皮间充质转化,增强运动迁移能力。 展开更多
关键词 wnt3a蛋白质 晶体 上皮细胞 上皮间质转化 连环素
原文传递
R脊椎蛋白1协同Wnt3A通过Wnt/β-联蛋白信号通路促进成骨细胞分化 被引量:4
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作者 彭杨茜子 刘庆梅 +2 位作者 马彦云 贺玲玲 赵东宝 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期400-404,I0001,共6页
目的探究R脊椎蛋白1(RSPO1)在成骨分化中的作用及机制。方法利用xCELLigence系统研究RSPO1对C2C12细胞增殖及细胞活力的影响。通过磷酸酶检测试剂盒检测ALP活性,ELISA法检测护骨因子的表达,通过双荧光素酶报告基因检测系统,利用TOP... 目的探究R脊椎蛋白1(RSPO1)在成骨分化中的作用及机制。方法利用xCELLigence系统研究RSPO1对C2C12细胞增殖及细胞活力的影响。通过磷酸酶检测试剂盒检测ALP活性,ELISA法检测护骨因子的表达,通过双荧光素酶报告基因检测系统,利用TOPflash T细胞因子(TCF)报告质粒检测Wnt/β-联蛋白(β-catenin)信号通路活性。利用蛋白印迹法检测β-catenin蛋白累积情况。采用t检验进行统计学分析。结果RSPO1对C2C12细胞增殖及细胞活力无影响。RSPO1单独处理上调ALP活力(2.85±0.08和1.74±0.21,t=3.014,P〈0.05)及护骨因子表达能力(1.29±0.13和1.0±0.21,t=3.348,P〈0.05)较弱,而RSPO1及Wnt3A协同处理可显著增强ALP活力(81.37±5.08和1.74±0.21,t=31.31,P〈0.01)并上调护骨因子表达(5.26±0.60和1.00±0.21,t=6.99,P〈0.01)。RSPO1协同Wnt3A激活TCF活性并诱导β-catenin蛋白积累(3.28±0.18和1.00±0.21,t=10.94,P〈0.05)。但是,单独RSPO1对TCF的活性及β-catenin积累无影响(1.25±0.08和1.0±0.21,t=2.225,P〉0.05)。结论RSPO1可协同Wnt3A激活Wnt/β-catenin信号通路,诱导细胞成骨分化,提示RSPO1有望应用于RA的治疗。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 wnt3a蛋白质 成骨细胞 WNT信号通路 R脊椎蛋白1
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2型糖尿病大鼠早期认知功能改变及海马磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基、Wnt3a和去整合素金属蛋白酶10表达的研究 被引量:3
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作者 孙传峰 贾改丽 +4 位作者 李传达 马益梅 徐霞 李军 曹红 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期150-155,共6页
目的观察T2DM大鼠早期认知功能改变及海马磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(p-NR2B)、Wnt3a和去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的表达变化。方法将40只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组(Con,n=20),糖尿病组(DM,n=20)。Con组以... 目的观察T2DM大鼠早期认知功能改变及海马磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(p-NR2B)、Wnt3a和去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的表达变化。方法将40只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组(Con,n=20),糖尿病组(DM,n=20)。Con组以普通饲料喂养8周后单次空腹腹腔注射柠檬酸缓冲液。DM组以高脂高糖喂养8周诱导IR后腹腔小剂量注射STZ 35mg/kg,3d后测血糖,血糖≥16.7mmol/L确诊T2DM。造模成功后10、20d分别通过Y迷宫、八臂迷宫检测认知功能改变,17、21、28d取大鼠海马,Western blot测定海马p-NR2B、Wnt3a和ADAM10的表达。结果与Con组比较,DM组在Y迷宫自发活动次数为(6.9±3.2)次,自主选择率(SA%)为(42.2±29.5)%,差异有统计学意义(P<0.05);DM组在八臂迷宫的1、3、6d测试时间分别为(459.2±143.5)s、(357.3±131.7)s、(274.0±145.1)s,较Con组延长(P<0.05),记忆错误(WME)、参考记忆错误(RME)和总记忆错误(TE)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与Con组比较,DM组各时间点海马中p-NR2B、Wnt3a和ADAM10的表达降低(P<0.05)。结论T2DM大鼠海马中p-NR2B、Wnt3a和ADAM10的表达减少可能参与其早期认知功能的下降。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 海马 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 wnt3a 去整合素金属蛋白酶10 认知
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Wnt3a联合骨形态发生蛋白2对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响 被引量:4
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作者 叶劲 赵利波 +2 位作者 田志超 李亮宇 肖骏 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1780-1782,共3页
目的观察经典Wnt/β-catenin以及骨形态发生蛋白(BMP)信号通路对大鼠骨髓来源的间充质干细胞(BMSCs)体外增殖以及向成骨方向分化的影响。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞并分4组:对照组、Wnt组、BMP... 目的观察经典Wnt/β-catenin以及骨形态发生蛋白(BMP)信号通路对大鼠骨髓来源的间充质干细胞(BMSCs)体外增殖以及向成骨方向分化的影响。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞并分4组:对照组、Wnt组、BMP组、Wnt3a和BMP-2联合组,在不同时间点用细胞计数试剂盒培(CCK-8)法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、VonKossa染色观察细胞向成骨分化和基质矿化程度。逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测成骨特异性标志物表达。结果培养第7天,CCK-8测吸光度值联合组为0.845,Wnt组为0.738,明显高于对照组0.409(P〈0.05)。培养第6天和第12天,ALP活性吸光度值联合组为63.8和144.3,BMP-2组为40.8和104.1,均明显高于对照组7.3和18.9(P〈0.05)。培养14d后,联合组骨钙素mRNA表达量高于对照组,而Runx2及Osterix表达量与其他组比较增高不显著。培养3周后,VonKossa染色显示联合组钙结节数量及大小均高于对照组。结论Wnt3a因子和骨形态发生蛋白-2联合诱导能有效地促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨方向分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 wnt3a 骨形态发生蛋白-2 骨分化
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