桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠Wnt4/β-catenin信号通路中p-GSK-3β的影响

目的探讨慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾纤维化(RIF)过程中,桃核承气汤对Wnt4/β-catenin信号通路p-GSK-3β的影响。方法100只清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、治疗组,各25只,模型组和治疗组行5/6肾切除术,假手术组仅做双肾被膜剥离术,正常组不做处理。造模成功后,治疗组予桃核承气汤灌胃,其余3组予等量生理盐水灌胃,给药时间共为8周。Western Blot法检测肾组织中Wnt4/β-catenin信号通路的相关蛋白含量,光镜观察肾组织。结果Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin蛋白含量,治疗组比模型组显著降低(P<0.05);光镜观察,模型组的肾小球结构固缩,肾间质纤维增生严重,治疗组明显减轻。结论桃核承气汤对CRF的作用机制,可能与降低Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin蛋白含量从而调节Wnt4/β-catenin信号通路有关。

加味六味地黄汤对UUO大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路介导调控FGF-23的影响

目的:观察加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白表达的影响。方法:健康成年SD大鼠120只,随机分为4组:假手术组、模型组、中药组、缬沙坦组,各组组内分为1周、2周、4周3个时间点。假手术组和模型组予以生理盐水(2 ml/只/d)灌胃;中药组予以加味六味地黄汤组灌胃(2 ml/d);缬沙坦组在造模后给予缬沙坦(30 mg·kg^-1·d^-1)灌胃。HE染色和Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白的表达。结果:假手术组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠出现肾间质纤维化,中药组和缬沙坦组大鼠小管间质病变减轻。与假手术组相同时间点相比较,大鼠模型组肾功能(BUN、Scr)、小管间质半定量评分、Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白表达均显著增高,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组大鼠相同时间点相比较,加味六味地黄汤和缬沙坦均能改善肾脏病理,显著降低BUN和Scr水平、小管间质半定量评分,下调肾组织Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:UUO大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路活化,并可能介导了FGF-23的转录,而加味六味地黄汤可能通过阻断Wnt4/β-catenin信号通路的活化,下调FGF-23的表达,发挥抗肾间质纤维化作用。

lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:检测人甲状腺滤泡上皮正常细胞和甲状腺癌细胞中FER1L4的表达水平。将SW579细胞分为control组、si-NC组、si-FER1L4组、LiCl+si-FER1L4组;检测各转染组细胞FER1L4的表达水平,细胞增殖,细胞凋亡率,细胞迁移和侵袭;检测细胞Cleaved caspase3、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平。结果:SW579细胞中FER1L4表达水平最显著;干扰FER1L4后,其细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著升高(P<0.05);与si-FER1L4组相比,LiCl+si-FER1L4组细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著降低(P<0.05)。结论:干扰FER1L4的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制甲状腺癌恶性发展。

布托啡诺调节Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞增殖迁移和血管生成的影响

目的:探讨布托啡诺调节Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响。方法:将肺癌H1299细胞分为对照组、布托啡诺低、高剂量组、布托啡诺高剂量+LiCl(Wnt/β-catenin信号通路激活剂)组、FH535组(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)。克隆形成实验检测细胞克隆能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡率;血管拟态形成实验观察血管生成情况;western blot检测VEGF-A、VE-cadherin、Bcl-2、Bax、MMP-9、β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达。结果:对照组H1299细胞管腔结构完整;与对照组相比,布托啡诺低、高剂量组和FH535组H1299细胞克隆形成率、细胞迁移和侵袭个数、管腔数量及VEGF-A、VE-cadherin、Bcl-2、MMP-9、β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达降低,细胞凋亡率和Bax蛋白表达升高(P<0.05);LiCl可部分逆转布托啡诺对H1299细胞恶性生物学行为的抑制(P<0.05);FH535组H1299细胞各项检测指标与布托啡诺高剂量组处于同一水平(P<0.05)。结论:布托啡诺能够诱导肺癌细胞凋亡,阻滞迁移、增殖和血管生长,进而阻止肺癌的发生发展,其机制与阻断Wnt/β-catenin信号通路激活相关。

基于Wnt/β-catenin信号通路的健骨伸筋汤对膝骨关节炎患者的干预作用研究

目的:健骨伸筋汤通过Wnt蛋白/β-连环素(Wnt/β-catenin)信号通路对膝骨关节炎(KOA)干预效果的研究。方法:将48只雌性斯泼累格·多雷(SD)大鼠随机分成空白对照组、模型组、美洛昔康片组、抗骨增生片组及健骨伸筋汤中剂量、高剂量组,每组8只。除空白对照组外,其余大鼠均向关节腔注射木瓜蛋白酶进行KOA造模。造模成功后空白对照组与模型组予以正常饮食饮水,其余大鼠分别予以美洛昔康药液、抗骨增生药液及健骨伸筋汤药液灌胃,干预4周。观察大鼠行动程度、膝关节肿胀度;检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎症介质水平,观察关节软骨病理变化,检测软骨中的β-catenin和Wnt4mRNA表达水平。结果:IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度比较,模型组高于空白对照组;美洛昔康组与抗骨增生组比较差异无统计学意义;与模型组比较,用药4组低于模型组;健骨中剂量组低于健骨高剂量组;与健骨中剂量组比较,美洛西康组和抗骨增生组略高于健骨中剂量组,差异无统计学意义;Wnt4与β-catenin的mRNA表达水平:Wnt4模型组表达水平提高,在各给药组水平有所降低;β-catenin的mRNA表达水平,模型组有所降低,在各给药组水平有所提高,健骨伸筋汤骨代谢调节有效。结论:健骨伸筋汤治疗KOA可能是通过Wnt/β-catenin信号通路来抑制炎症介质,调控信号通路内的蛋白来影响骨代谢。

番泻苷B通过Wnt/β-catenin通路抑制视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、凋亡和侵袭

目的探究番泻苷B对视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、凋亡、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过采用不同剂量(0、5、10、20μmol/L)番泻苷B处理HXO-Rb44细胞,将细胞随机分为4组:Control组,番泻苷B 5、10、20μmol/L组。MTT法检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell检测侵袭细胞数;细胞成球实验检测细胞成球直径和细胞成球数目;蛋白质印迹检测cleaved caspase-3、caspase-3、MMP-2、MMP-9、SOX2、OCT4、CD44、Wnt1、β-catenin蛋白表达。结果与Control组比较,番泻苷B 10、20μmol/L组细胞活力、克隆形成率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和cleaved caspase-3/caspase-3表达显著升高(P<0.05),侵袭细胞数和MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞成球直径、细胞成球数目和SOX2、OCT4、CD44蛋白表达显著降低(P<0.05),Wnt1、β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论番泻苷B可抑制视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、侵袭和干细胞样特性,诱导细胞凋亡,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨雷公藤甲素联合脉冲射频对大鼠神经性疼痛模型抗炎镇痛的作用机制

目的 探讨雷公藤甲素联合脉冲射频对大鼠神经性疼痛模型的抗炎镇痛作用及相关机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、脊神经结扎组、雷公藤甲素组、脉冲射频组、雷公藤甲素联合脉冲射频组。构建脊神经结扎模型大鼠,检测大鼠疼痛行为学变化;蛋白质印迹法检测坐骨神经组织中Wnt-3α、β-catenin、frizzled7蛋白表达;聚合酶链式反应检测坐骨神经组织中Il-1β、Cox-2、Tnf-α、p65 Nf-κB mRNA表达;免疫组织化学检测坐骨神经组织中SP和C-fos蛋白表达。结果 除假手术组外,其余各组机械性缩足反射阈值在术后第1天急剧下降,术后第5天脊神经结扎组的机械性缩足反射阈值趋于稳定,各治疗组的机械性缩足反射阈值逐渐上升。除假手术组外,其余各组热缩足反射潜伏期在术后前3天急剧下降,术后第3天各组热缩足反射潜伏期开始升高,各治疗组的升高速度均高于脊神经结扎组。蛋白质印迹法结果显示术后第3、7、14天,脊神经结扎组Wnt-3α、β-catenin、frizzled7蛋白表达升高。与脊神经结扎组比,术后第3天各治疗组Wnt-3α、β-catenin、frizzled7蛋白表达差异较小,术后第7天和第14天各治疗组蛋白表达均降低,且雷公藤甲素联合脉冲射频组的相对表达量最低。聚合酶链式反应结果显示术后第3、7、14天,与假手术组比,脊神经结扎组的Il-1β、Cox-2、Tnf-α、p65 Nf-κB mRNA表达升高。与脊神经结扎组比,术后第7天和第14天各治疗组的mRNA表达均降低,且雷公藤甲素联合脉冲射频组表达最低。免疫组织化学结果显示脊神经结扎组中SP和C-fos蛋白表达高于假手术组,且随着时间的延长两种蛋白表达逐渐升高。与脊神经结扎组比,各治疗组SP、C-fos蛋白表达水平随治疗时间的延长均降低,且雷公藤甲素联合脉冲射频组降低最明显。结论 雷公藤甲素联合脉冲射频治疗通过调控Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠神经性疼痛模型炎症和疼痛反应。

跑台运动对老年大鼠骨质疏松及wnt/β-catenin信号通路的影响

背景:运动训练有改善骨质疏松的作用,但其对于老年骨质疏松的作用及机制尚未完全明确。目的:观察跑台运动对老年大鼠骨质疏松及wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:取16只24月龄雄性SD大鼠,采用随机抽样法分为骨质疏松症组和跑台组,每组8只,以自然衰老复制老年骨质疏松模型,同时跑台组大鼠进行跑台运动干预8周,1次/d,5 d/周;将8只6月龄雄性SD大鼠作为青年组。8周后,采用ELISA法检测各组大鼠血清中骨代谢标志物Ⅰ型胶原交联C末端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素、骨特异性碱性磷酸酶水平,双能X射线检测左股骨与L5骨密度,使用骨显微CT行胫骨和L_(4)椎体扫描及骨微结构定量分析,RT-PCR和Western blot检测骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5、DKK1、GSK3β的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①与青年组相比,骨质疏松症组大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶及骨钙素水平降低(P<0.05),左股骨和L5椎体骨密度降低(P<0.05),胫骨和L_(4)椎体骨小梁数量、骨体积、骨体积分数减少(P<0.05),骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5 mRNA水平及蛋白表达降低(P<0.05);血清抗酒石酸酸性磷酸酶、Ⅰ型胶原交联C末端肽水平升高(P<0.05),胫骨和L_(4)椎体骨小梁间隙、结构模型指数升高(P<0.05),骨髓中DKK1、GSK3β的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);胫骨、L_(4)椎体骨小梁数量减少,结构紊乱、排列稀疏断裂;②与骨质疏松症组相比,跑台组大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶、骨钙素水平升高(P<0.05),左股骨和L5椎体骨密度升高(P<0.05),胫骨骨小梁数量、骨体积、骨体积分数升高(P<0.05),骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);血清抗酒石酸酸性磷酸酶、Ⅰ型胶原交联C末端肽水平降低,L_(4)椎体骨小梁间隙,胫骨骨小梁间隙、结构模型指数降低,骨髓中DKK1、GSK3β的mRNA水平及蛋白表达降低(P<0.05);胫骨、L_(4)椎体骨小梁数量明显增加,排列较规整致密,连成网状;③结果显示,跑台运动可能通过激活wnt/β-catenin信号通路改善老年大鼠骨质疏松。

miRNA-126调控Wnt/β-catenin信号通路对子宫平滑肌肉瘤生物学功能的影响

目的研究miRNA-126在子宫平滑肌肉瘤(ULMS)组织中的表达水平及临床意义,探讨其通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞增殖和转移能力的作用机制。方法采用qRT-PCR检测miRNA-126在ULMS组织和子宫平滑肌瘤组织中的表达水平,并分析miRNA-126表达与ULMS患者临床病理参数、复发转移及生存率的关系。常规培养ULMS细胞SK-UT-1,随机分为NC对照组和miRNA-126 mimics实验组,分别转染NC mimics和miRNA-126 mimics,qRT-PCR检测各组细胞中miRNA-126的表达;CCK8实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;TOP/FOP Flash实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性;western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin在细胞核中的表达水平,及其相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1的表达。结果qRT-PCR检测结果显示,与子宫平滑肌瘤组织相比,miRNA-126在ULMS组织中的表达显著降低(P<0.05),且miRNA-126在肿瘤直径大和存在转移的ULMS患者中表达显著减少(P<0.05),miRNA-126表达对ULMS患者复发转移和生存率无明显影响(P>0.05)。与NC组相比,miRNA-126 mimics组SK-UT-1细胞中的miRNA-126表达水平显著增加(P<0.05),SK-UT-1细胞的增殖和转移能力显著降低(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin及相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1表达均显著降低(P<0.05)。结论miRNA-126在ULMS组织中表达降低,miRNA-126可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞的增殖和转移。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黄精-当归配伍对阿尔茨海默病小鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的 观察黄精-当归配伍(CPA)对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 雄性KM小鼠64只,随机分成正常对照组、AD模型组、CPA组、IWR-1-endo组。AD模型组、CPA组、IWR-1-endo组采用颈背部皮下注射1%D-半乳糖[140 mg/(kg·d),连续3 w]联合腹腔注射东莨菪碱[2 mg/(kg·d),连续2 w]复制小鼠AD模型;造模1 w后同时对CPA组及IWR-1-endo组灌胃CPA提取液[2.5 g/(kg·d),持续4 w],并对IWR-1-endo组增给腹腔注射Wnt信号抑制剂IWR-1-endo液;第5周开始,对各组再增加腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)处理[50 mg/(kg·d),连续5 d]。药物干预结束后,运用跳台仪检测各组行为学改变;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)与Western印迹分别检测各组海马神经β-catenin、GSK-3β mRNA和蛋白表达变化;免疫组化及免疫荧光检测海马DG区BrdU阳性细胞表达量的差异。结果 与正常对照组比较,AD模型组痴呆症状明显,学习与记忆各测试指标均明显变差,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显下降,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显升高,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显减少(均P<0.01)。与AD模型组比较,CPA组痴呆症状明显改善,学习与记忆各测试指标均明显好转,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显升高,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显下降,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显增多(均P<0.01)。与CPA组比较,IWR-1-endo组痴呆症状严重,学习与记忆各测试指标均明显变差,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显下降,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显升高,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显减少(均P<0.01)。结论 CPA可通过激活AD小鼠海马神经Wnt/β-catenin信号通路促进NSCs增殖发挥治疗AD作用。

松脂醇二葡萄糖苷激活Wnt/β-catenin信号通路保护成骨细胞

背景:松脂醇二葡萄糖苷可以促进骨形成与骨基质的合成,加速骨组织修复,但其对成骨细胞的影响和作用机制仍需进一步探索。目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨松脂醇二葡萄糖苷对地塞米松干预成骨细胞的影响和作用机制。方法:设置不同浓度的地塞米松组和松脂醇二葡萄糖苷组对成骨细胞干预24 h,筛选最佳干预浓度;使用地塞米松、松脂醇二葡萄糖苷和Wnt/β-catenin抑制剂XAV-939对成骨细胞进行干预,设置对照组、地塞米松组、抑制剂组、松脂醇二葡萄糖苷组、松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组。CCK-8法检测细胞活性,检测各组细胞碱性磷酸酶和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性,Annexin V/PI染色与EdU法检测细胞凋亡与增殖情况,Real-Time qPCR检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达水平,Western Blot检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达水平。结果与结论:①地塞米松和松脂醇二葡萄糖苷干预成骨细胞24 h后,发现浓度为10μmol/L的地塞米松细胞抑制率为实验最佳干预浓度;松脂醇二葡萄糖苷浓度在100μmol/L时,细胞增殖最为明显;②与地塞米松组比较,松脂醇二葡萄糖苷组的碱性磷酸酶活性显著增强(P<0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性显著降低(P<0.05);Annexin V/PI染色和EdU法细胞增殖检测结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可抑制地塞米松干预后成骨细胞的凋亡,促进成骨细胞增殖;③与地塞米松组和抑制剂组比较,松脂醇二葡萄糖苷组和松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组中Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);④结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可以抑制地塞米松干预后的成骨细胞凋亡,通过激活Wnt/β-catenin信号通路来保护成骨细胞活性,促进成骨细胞增殖,可能发挥延缓激素性股骨头坏死的作用。

R-spondin2调控Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对骨骼系统的影响

R-spondin2(Rspo2)是蛋白质家族RSPOs成员之一,其可以通过富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体4/5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 4/5,LGR4/5)、细胞表面跨膜E3泛素连接酶ZNRF3/RNF43(zinc and ring finger 3/ring finger protein 43)、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPGs)和含GTP酶激活蛋白质1的IQ基序(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)来调控Wnt/β连环蛋白(catenin)信号通路,Wnt/β-catenin信号通路是目前研究最广泛且与基础骨生物学直接相关的信号通路,该通路中任何一环节出现问题都可能对骨的调控产生影响。近年来研究发现,Rspo2可以通过Wnt/β-catenin对成骨细胞(osteoblast,OB)、破骨细胞(osteoclast,OC)和软骨细胞产生作用,并参与一些骨骼疾病如脊柱后纵韧带骨化(ossification of the posterior longitudinal ligament,OPLL)、骨关节炎(osteoarthritis,OA)和类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生发展,因此对Rspo2的研究可能会成为骨相关疾病新的治疗方向。本文结合最新研究进展,就Rspo2的结构和主要功能、Rspo2调控Wnt/β-catenin信号通路的相关机制及其对骨骼系统的影响作一综述,以期为骨相关疾病的防治提供新的思路和途径。

SOX9活化Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的探讨SOX9对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖的影响和分子机制。方法采用免疫组化EnVision法检测ESCC组织和癌旁正常组织中SOX9的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。对过表达SOX9的Eca109-SOX9细胞和Eca109-Vector进行全转录芯片检测。qRT-PCR技术检测TE-1和干扰SOX9表达的TE-1细胞中差异基因的表达。Western blot法检测干扰和过表达SOX9后活化/非磷酸化β-catenin蛋白表达。使用Wnt抑制剂LGK974处理不同ESCC细胞后,通过CCK-8法检测细胞增殖能力的变化。结果SOX9在ESCC组织(4.58±3.04)中的表达显著高于癌旁正常组织(1.56±2.08,P<0.001)。SOX9表达与ESCC分化程度和浸润深度有关(P<0.05)。生存分析显示,SOX9高表达患者的总生存率明显低于低表达者(P<0.05);生物信息学分析发现AXIN2、FZD7和WNT5A在Eca109-SOX9细胞中的表达明显高于对照组;使用siRNA干扰SOX9后,AXIN2、FZD7和WNT5A的mRNA表达水平及活化/非磷酸化β-catenin的蛋白表达水平均降低,过表达SOX9则活化/非磷酸化β-catenin表达增加;经不同浓度LGK974处理的TE-1和Eca109-SOX9细胞增殖能力均显著降低,而低表达SOX9的Eca109-Vector细胞增殖能力未见明显改变,且SOX9蛋白表达不受LGK974影响。结论SOX9在ESCC中高表达,并可通过活化Wnt/β-catenin信号通路促进ESCC增殖,提示SOX9有望成为ESCC的预后标志物和药物治疗靶点。

中医药干预Wnt/β-catenin信号通路治疗激素性骨质疏松症的研究进展

对Wnt/β-catenin信号通路与激素性骨质疏松症(glucocorticoid-induced osteoporosis,GIOP)相关性及中药单体、中药复方干预Wnt/β-catenin信号通路治疗GIOP的研究进行综述,指出当Wnt/β-catenin信号通路受到抑制时,骨形成减少的同时骨吸收增加,从而诱发GIOP;中药单体及复方通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(dickkopf related protein 1,DKK1)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、Wnt抑制因子1(Wnt inhibitory factor 1,WIF1)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthetase kinase-3β,GSK3β)、骨硬化蛋白(sclerostin protein,SOST)等表达水平,再次激活Wnt/β-catenin信号通路,从而达到防治GIOP的目的。因此,探讨中医药对Wnt/β-catenin信号通路的作用,可为防治GIOP提供有力依据,为中医药治疗GIOP提供新方向。

仙鹤草内酯通过Wnt/β-catenin信号通路抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨仙鹤草内酯(agrimonolide,AM)对前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法:采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)和细胞克隆形成实验检测仙鹤草内酯对前列腺癌细胞增殖的影响;利用流式细胞术检测仙鹤草内酯对前列腺癌细胞凋亡的影响;Transwell实验检测仙鹤草内酯对前列腺癌细胞侵袭的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测仙鹤草内酯对前列腺癌细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路中相关蛋白表达水平的影响;使用慢病毒感染技术稳健过表达β-catenin DU145细胞株。结果:与空白对照组相比,随着仙鹤草内酯药物浓度增加,前列腺癌细胞(DU145、PC-3)活力逐渐降低,其半数抑制浓度(IC50)分别为20.33μmol/L、21.05μmol/L。与空白对照组相比,仙鹤草内酯显著抑制前列腺癌细胞克隆形成、促进细胞凋亡,效果呈剂量依赖性。仙鹤草内酯组显著抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin,磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗体(phospho-glycogen synthase kinase 3 beta,p-GSK3β)/糖原合酶激酶3β(GSK3β),c-Myc癌基因(c-Myc)和G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)的表达,且呈浓度依赖性。在过表达β-catenin的DU145细胞株中,仙鹤草内酯的抑制肿瘤增殖和抗转移能力明显减弱。结论:仙鹤草内酯可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导细胞凋亡来抑制前列腺癌细胞增殖和侵袭。

芪玉三龙方通过Wnt5a/β-catenin信号通路逆转上皮—间充质转化抑制肺癌细胞侵袭和转移

目的从细胞水平探讨芪玉三龙方是否通过Wnt5a/β-catenin信号通路抑制上皮—间充质细胞转化,抑制肺癌转移。方法将重组慢病毒转染小鼠肺癌细胞建立稳定过表达Wnt5a的细胞系,同时构建Wnt5a干扰和空载细胞株。qRT-PCR法检测Wnt5a、β-catenin mRNA的表达水平。CCK8、EdU实验检测肺癌细胞的增殖活性,Transwell实验检测肺癌细胞的迁移和侵袭能力。Western blot法检测Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Snail蛋白表达水平。结果与对照组比较,芪玉三龙方组Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著降低(P<0.05)。Wnt5a过表达组中Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著增强(P<0.05);Wnt5a干扰组Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平下降(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05),明显抑制EMT的发生。芪玉三龙方处理后,Wnt5a过表达组Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平下降(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力得到抑制。结论芪玉三龙方可能通过Wnt5a/β-catenin信号通路逆转上皮—间充质转化,抑制肺癌细胞增殖和转移。

Wnt/β-catenin信号通路在七氟醚诱导术后认知障碍中的作用机制

目的:探讨通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制炎症反应对七氟醚诱导的老年大鼠术后认知障碍(POCD)的影响。方法:将60只雄性大鼠随机分为对照组(C组)、3%七氟醚组(S组)、氯化锂(LiCl)+3%七氟醚组(LiCl+S组),每组20只。S组、LiCl+S组吸入3%七氟醚6 h, C组吸入空氧混合气体6 h, LiCl+S组于吸入七氟醚前连续5 d腹腔注射LiCl 2 mmol/kg,每日1次。七氟醚麻醉结束后24 h,随机取每组10只大鼠,采用Morris水迷宫实验检测老年大鼠认知功能,前4 d进行定位航行实验,第5天进行空间探索实验。水迷宫实验结束后立即处死大鼠,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察海马组织病理形态学改变。七氟醚麻醉结束后24 h,取每组剩余10只大鼠立即处死,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)法检测海马区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、β-catenin及磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达水平。结果:与C组相比,S组和LiCl+S组水迷宫实验第2天、第3天、第4天逃避潜伏期明显延长(P<0.05),第5天平台所在象限停留时间明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05),海马组织出现病理形态学损伤,海马区TNF-α及IL-1蛋白表达水平升高(P<0.05),S组海马区β-catenin及p-GSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05),LiCl+S组海马区β-catenin及p-GSK-3β蛋白表达水平升高(P<0.05)。与S组相比,LiCl+S组水迷宫第2天、第3天、第4天的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),第5天平台所在象限停留时间明显延长(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),海马组织病理形态学损伤现象有所改善,海马区TNF-α及IL-1蛋白表达水平明显下降(P<0.05),β-catenin及p-GSK-3β蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:LiCl通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制炎症反应改善七氟醚诱导的术后认知障碍。

外源性硫化氢通过Wnt/β-catenin信号通路促进衰老BMSCs的成骨分化

目的:探讨外源性硫化氢供体GYY4137对D-半乳糖(D-Gal)诱导的衰老骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨能力的影响及潜在机制。方法:应用不同浓度的D-Gal诱导BMSCs的衰老,CCK8法检测细胞活性及β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老的程度,确定D-Gal的最佳诱导浓度;应用不同浓度GYY4137进行干预后,检测GYY4137对正常BMSCs及衰老BMSCs细胞活性的影响,确定GYY4137最佳干预浓度。实验设CON组、GYY4137组、D-Gal组、D-Gal+GYY4137组,作相应处理后对各组BMSCs进行β-半乳糖苷酶染色,qRT-PCR法检测衰老相关基因(P16、P21、P53)和衰老相关炎症因子(IL-6、IL-8、TNF-α)的mRNA相对表达。对各组细胞进行成骨诱导分化,qRT-PCR法检测成骨分化相关因子碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、人骨形态发生蛋白2(BMP2)的mRNA表达,通过茜素红染色法检测钙结节形成数量,ALP染色法检测ALP的生成。通过转录组测序检测D-Gal组、D-Gal+GYY4137组两组细胞的差异表达基因,根据测序结果,qRT-PCR对差异基因进行验证。应用Dickkopf相关蛋白1(dickkopf Wnt signaling pathway inhibitor 1,DKK1)抑制Wnt10b的表达后,检测各组衰老BMSCs的成骨分化能力。结果:D-Gal的最佳诱导浓度为30 g/L,GYY4137的最佳干预浓度为10μmol/L,D-Gal组β-半乳糖苷酶阳性细胞比例显著增加,衰老相关基因(P16、P21、P53)及衰老相关炎症因子(IL-6、IL-8、TNF-α)mRNA的表达量显著升高(P<0.05或P<0.01),应用GYY4137干预后,以上细胞衰老相关指标显著降低(P<0.05或P<0.01)。在成骨分化过程中,D-Gal+GYY4137组ALP、OCN、RUNX2、BMP2的mRNA表达,钙结节阳性比例显著高于D-Gal组(P<0.05或P<0.01);测序结果发现Wnt/β-catenin信号通路中的Wnt10b表达有显著差异,qRT-PCR结果显示GYY4137可增加衰老细胞Wnt10b及其下游基因β-catenin的表达(P<0.05或P<0.01),与测序结果一致。应用100μg/L DKK1抑制Wnt10b的表达后,GYY4137处理的衰老BMSCs成骨分化相关基因ALP、OCN、RUNX2、BMP2的mRNA表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:GYY4137可以缓解D-Gal诱导的BMSCs衰老进程,并且可能通过Wnt/β-cantenin信号通路促进衰老BMSCs的成骨分化。

齐墩果酸调节Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠激素性股骨头坏死

背景:齐墩果酸具有促进成骨细胞增殖、抑制破骨细胞增殖,进而改善激素性股骨头坏死的功效,但其具体作用机制尚不完全清楚。目的:探究齐墩果酸通过调节Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠激素性股骨头坏死的机制。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、齐墩果酸组、齐墩果酸+sFRP1组,后3组大鼠注射醋酸泼尼松龙建立大鼠激素性股骨头坏死模型。齐墩果酸组大鼠灌胃10 mg/(kg·d)齐墩果酸并肌肉注射相应生理盐水,齐墩果酸+sFRP1组大鼠灌胃10 mg/(kg·d)的齐墩果酸并肌肉注射1 mg/(kg·d)的Wnt抑制剂sFRP1,对照组和模型组大鼠灌胃和肌肉注射等体积生理盐水,给药6周。检测各组大鼠血清Ca、P、转化生长因子β1及碱性磷酸酶水平;micro-CT检测股骨形态;苏木精-伊红染色观察股骨组织形态;TUNEL检测组织细胞凋亡率;蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax、Wnt、β-catenin蛋白水平。结果与结论:①与对照组相比,模型组大鼠骨小梁、股骨头严重损伤,血清Ca、P、转化生长因子β1水平、骨组织Bcl-2、Wnt、β-catenin蛋白水平显著降低,血清碱性磷酸酶水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,齐墩果酸组大鼠骨小梁稀疏程度明显改善,股骨头损害程度显著减轻,血清碱性磷酸酶水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著降低,血清Ca、P、转化生长因子β1水平、骨组织Bcl-2、Wnt、β-catenin蛋白水平显著升高(P<0.05);与齐墩果酸组相比,齐墩果酸+sFRP1组大鼠上述指标呈现相反变化(P<0.05)。②结果说明,齐墩果酸可改善激素性股骨头坏死大鼠的骨代谢指标和骨小梁结构,减轻股骨头坏死,可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。

胃泌素调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 研究胃泌素调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法 传代培养人胃癌细胞MKN45,采用噻唑蓝(MMT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western印迹检测相关通路蛋白表达水平。结果 与对照组相比,胃泌素组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡能力明显降低(P<0.05);丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡能力明显升高(P<0.05);胃泌素联合丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高,细胞的凋亡能力明显降低(P<0.05);与胃泌素组相比,丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡能力明显升高(P<0.05);胃泌素联合丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡能力明显升高(P<0.05);与丙谷胺组相比,胃泌素联合丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡能力明显降低(P<0.05)。结论 胃泌素通过Wnt/β-catenin信号通路上调c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白的表达水平促进胃癌细胞增殖、侵袭及转移能力。