脓毒症患儿不同血糖水平对脏器损伤、氧化应激反应及Wnt5a炎症通路的影响

目的:探讨脓毒症患儿不同血糖水平对脏器损伤、氧化应激反应及Wnt5a炎症通路的影响。方法:回顾性收集2014年1月~2015年12月间广东省惠州市中心人民医院收治的脓毒症患儿70例,根据血糖水平分为脓毒症A组(血糖>10mmol/L)29例、脓毒症B组(血糖≤10mmol/L)41例,另取同期在广东省惠州市中心人民医院接受疫苗接种、血糖水平正常的健康小儿50例作为健康对照组。入院后当日,采用放射免疫法检测肝功能指标;采用全自动生化仪检测氧化应激指标;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Wnt5a炎症通路指标含量。结果:脓毒症A组患者的肝功能指标TBIL、ALT、AST含量高于脓毒症B组及健康对照组(P<0.05);氧化应激指标AOPPs、LHP、ROS、MDA含量高于脓毒症B组及健康对照组,GSH-Px含量小于脓毒症B组及健康对照组(P<0.05);血清Wnt5a炎症通路指标IL-1β、IL-6、IL-12、MIP-1β含量高于脓毒症B组及健康对照组(P<0.05)。结论:高血糖的脓毒症患儿肝功能损伤较重,氧化应激及炎症反应程度剧烈,是病情严重及预后不佳的重要指标。

脓毒症患儿不同血糖水平对脏器损伤、氧化应激反应及Wnt5a炎症通路的影响

目的:分析脓毒症患儿不同血糖水平对脏器损伤、氧化应激反应及Wnt5a炎症通路的影响。方法:收集2016年9月-2017年8月笔者所在医院收治的90例脓毒症患儿治疗资料进行回顾性分析。参照患儿血糖水平分为脓毒症1组39例(血糖>10 mmol/L),脓毒症2组51例(血糖≤10 mmol/L),同时选取于笔者所在医院接种的健康儿童50例为健康组。入院当日,检测肝功能指标、氧化应激指标及Wnt5a炎症通路指标。结果:脓毒症1组和脓毒症2组谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)及谷丙转氨酶(ALT)均明显高于健康组,且脓毒症1组AST、TBIL及ALT均明显高于脓毒症2组,差异均有统计学意义(P<0.05)。脓毒症1组和脓毒症2组丙二醛(MDA)、高级氧化蛋白产物(AOPPs)、活性氧簇(ROS)及脂质过氧化氢(LHP)均明显高于健康组,且脓毒症1组MDA、AOPPS、ROS及LHP均明显高于脓毒症2组,差异均有统计学意义(P<0.05);脓毒症1组和脓毒症2组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)均明显低于健康组,且脓毒症1组GSH-Px明显低于脓毒症2组,差异均有统计学意义(P<0.05)。脓毒症1组和脓毒症2组血清MIP-1β、IL-1β、IL-12及IL-6均明显高于健康组,且脓毒症1组MIP-1β、IL-1β、IL-12及IL-6均明显高于脓毒症2组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:高血糖的脓毒症患儿肝功能损伤程度较为严重,氧化应激和炎症反应较大,可作为脓毒症病情严重和预后效果欠佳的可靠指标。

大黄灵仙方对LPS诱导的肝内胆管组织损伤大鼠炎症反应及Wnt5a-Ca;-PKC信号转导通路的影响

目的:探讨大黄灵仙方对LPS诱导的肝内胆管组织损伤大鼠Wnt5a-钙离子(Ca;)-活化蛋白激酶C(PKC)信号转导通路及炎症反应的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、大黄灵仙方组(320 mg/kg)、炎症信号阻断剂组(PDTC+SB203580,120 mg/kg+10 mg/kg)、大黄灵仙方+信号阻断剂组(320 mg/kg+120 mg/kg+10 mg/kg),每组12只。采用胆总管注射内毒素LPS构建肝内胆管组织损伤模型,分别于造模前和造模后连续给药3 d,2次/d。末次给药12 h后,ELISA检测血清总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)及肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6水平;截取胆管周围组织,HE染色观察组织病理变化;荧光免疫法检测胆管组织细胞内Ca;水平;RT-qPCR和Western blot检测胆管组织Wnt5a、骨桥蛋白(OPN)、PKC mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清TBIL、TBA、TNF-α、IL-6水平、胆管组织细胞内Ca;水平、胆管组织Wnt5a、OPN、PKC mRNA及蛋白、IL-6蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与模型组相比,炎症信号阻断剂组及大黄灵仙方组大鼠TBIL、TBA、TNF-α、IL-6水平、细胞内Ca;水平、Wnt5a、OPN、PKC mRNA及蛋白、IL-6蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与炎症信号阻断剂组及大黄灵仙方组相比,大黄灵仙方+信号阻断剂组上述指标进一步降低(P<0.05)。结论:大黄灵仙方可能通过抑制Wnt5a-Ca;-PKC信号通路活化降低肝内胆管组织损伤大鼠炎症反应。

Wnt5a信号通路调控NRTI引起的小脑神经炎症的研究

分别用NRTI类药物AZT(100mg/kg)和3TC(50mg/kg)对C57BL/6小鼠进行2、5、14d的处理,并于药物处理结束时采集小鼠小脑。通过Western blotting检测两种药物处理不同时间后小脑中炎症因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达水平,观察到炎症因子在小脑中都显著性增加。然后通过HE染色研究NRTI作用5d对小脑病变的影响,组织形态学分析表明,NRTI药物作用5d未引起小脑发生显著病变。通过Western blotting检测到小脑中NRTI可明显上调Wnt5a,提示NRTI可能激活Wnt5a,再利用Wnt5a的特异性拮抗剂BOX5来抑制Wnt5a,BOX5可以显著性降低NRTI诱导的炎症因子上调。因此,Wnt5a信号通路参与调控NRTI引起的小脑神经炎症。

仙龙汤配合常规西药对慢性阻塞性肺病(稳定期)Wnt5a-ERK信号通路相关因子的影响

目的探究仙龙汤联合常规西药治疗对慢性阻塞性肺病(稳定期)患者外周血Wnt5a-ERK信号通路相关因子的影响。方法选择132例慢性阻塞性肺病(COPD)稳定期(肺肾气阴两虚证)患者作为研究对象,随机分为A组(66例)和B组(66例)。A组予以布地奈德福美特罗粉吸入剂联合噻托溴铵粉雾剂治疗,B组在A组基础上联合仙龙汤治疗。对两组临床疗效、中医证候积分、肺功能、Wnt5a-ERK信号通路相关因子、气道炎症及不良反应进行比较分析。结果治疗后,B组有效率(95.45%,63/66)高于A组(75.76%,50/66)(P<0.05);两组中医证候积分、Wnt5a、磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)明显低于治疗前,而用力肺活量(FVC)、一秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1/FVC水平明显高于治疗前(P<0.05),且B组上述指标改善程度显著优于A组(P<0.05)。两组治疗时均未发生不良反应。结论仙龙汤配合常规西药治疗稳定期COPD(肺肾气阴两虚证),可有效提升患者的临床治疗效果,改善肺功能,下调Wnt5a-ERK信号通路及其介导的气道炎症反应,安全可靠,具有临床推广意义。

Wnt/PCP信号通路在大鼠缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成的作用

目的探讨Wnt/PCP信号通路在大鼠缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成过程中的作用机制。方法将40只雄性SD大鼠,分为对照组、低氧组、百合碱组、低氧+百合碱组,测大鼠平均肺动脉压力(MPAP),右心室肥厚指数(RVHI)肺小动脉相应管壁中膜厚度占其管径的百分比(WT%);采用RT-PCR法,从基因水平观察Wnt11、Wnt5a、Dvl-3、DAAM1以及Rho A在缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成大鼠肺组织中的表达情况。结果低氧组、百合碱组及低氧+百合碱组大鼠的MPAP与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);3组的RVHI与对照组比较均显著提高(P<0.05),低氧组与百合碱组的RVHI比较差异无统计学意义(P>0.05),低氧组与低氧+百合碱组的RVHI比较无统计学意义(P=0.761);3组的WT%与对照组比较均显著升高(P<0.05)。Wnt11、Wnt5a、Dvl-3、DAAM1、Rho A、mRNA,在低氧组、百合碱组及低氧+百合碱组的表达较对照组均显著下调(P<0.05),而低氧组与百合碱组、低氧组与低氧+百合碱组、百合碱与低氧+百合碱组比较,Wnt5a、Wnt11、Dvl-3、DAAM1、Rho A、mRNA,表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成的过程中Wnt11、Wnt5a、Dvl-3、DAAM1以及RHOA均处于下调,提示Wnt/PCP信号通路在缺氧或炎症诱导肺动脉高压形成的过程中具有一定的作用,但其作用可能受到某种机制的抑制。

Wnt5a在炎症微环境下的牙周膜干细胞中的作用研究

目的:研究Wnt5a在炎症微环境作用下的牙周膜干细胞(periodontal stem cells,PDLSCs)中的作用。方法:有限稀释法分离获取PDLSCs并进行干细胞鉴定;实时定量qPCR检测正常PDLSCs组及炎症因子组(10ng/ml TNFα预刺激24h)炎症因子TNFα及IL-1β的mRNA表达水平;实时定量qPCR检测两组成骨诱导前后成骨基因Runx2、ALP的mRNA表达水平、Wnt5a的mRNA表达水平;Western Blot检测两组成骨诱导前后Wnt5a的蛋白表达水平。结果:炎症因子组与正常组的克隆形成率无显著性差异、炎症因子组TNFαmRNA表达水平IL-1βmRNA表达水平显著高于正常组(P<0. 05);常规培养条件下,炎症因子组Runx2、ALP mRNA表达水平与正常组无显著性差异,成骨诱导后成骨基因表达水平正常组显著高于炎症组,(P<0. 05);常规培养条件下,炎症因子组Wnt5a mRNA表达水平高于正常组(P<0. 05),成骨诱导后正常组及炎症因子组Wnt5a mRNA表达水平均显著高于常规培养条件;Western Blot结果示,Wnt5a蛋白表达量正常组diff(成骨诱导后)、炎症因子组undiff(成骨诱导前)、炎症因子组diff分别为正常组undiff的1. 2709倍、1. 8246倍、2. 2176倍。炎症因子组Wnt5a蛋白表达水平增加,成骨诱导后两组Wnt5a蛋白表达水平均增加,炎症因子组高于正常组。结论:在炎症微环境下,PDLSCs的炎症因子表达增加,成骨能力降低,Wnt5a mRNA及蛋白表达水平均增加,Wnt5a非经典通路可能通过与经典Wnt通路的交通等参与PDLSCs炎症及破骨的过程。

EPO/Stat5信号通路在OA发病中的作用分析

目的探讨EPO/Stat5信号通路在骨性关节炎(OA)发生、发展中的作用。方法 20只成年健康雄性SD大鼠随机分为CK组与实验组,各10只。实验组建立OA大鼠模型,CK组切开皮肤,暴露关节腔,不切断前交叉韧带和内侧半月板。造模8 w后,检测两组全血高切黏度和低切黏度,以及关节液与血清C-反应蛋白(CRP)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、肿瘤坏死因子-a(TNF-α)含量;Western bloting法检测软骨细胞中促红细胞生成素(EPO)和转录激活子5(Stat5)蛋白表达水平。结果实验组全血低切黏度和高切黏度高于CK组(P <0.05),关节液和血清MMP-3、CRP和TNF-ɑ含量均高于CK组(P <0.05),软骨细胞中EPO和Stat5的蛋白表达水平也高于CK组(P <0.05)。结论在OA发病过程中,EPO/Stat5信号通路会刺激血液黏度及炎症因子水平的升高,加重OA疾病进展。

Wnt5a与炎症信号在炎症性疾病中的交叉互动

Wnt5a是一种分泌型糖蛋白,是高度保守的Wnts蛋白家族成员之一。在生物体内Wnts家族参与调控细胞命运、胚胎发育、细胞增殖、迁移和分化等重要过程。研究表明,Wnt5a的表达调控及其信号转导与炎症应答密切相关,提示Wnt5a及其信号通路在炎症性疾病的发生、发展中发挥着重要作用。本文从Wnt5a与炎症因子、炎症信号转导通路以及炎症疾病等方面进行阐述和展望,旨在为以Wnt5a为靶点进行炎症性疾病的防治提供理论依据。

绿原酸调控巨噬细胞极化治疗溃疡性结肠炎的机制研究

[目的]探讨绿原酸(chlorogenic acid,CGA)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用及分子机制。[方法]C57BL/6小鼠50只,用3%DSS腹腔注射7 d,建立UC动物模型并随机分为5组,除UC模型组外,其余4组分别给予柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine,SZ)100 mg/kg·d和CGA 30、60、120 mg/kg·d灌胃10 d,另以C57BL/6小鼠10只设为正常对照组。检测小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI);以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结肠组织病理变化;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、IL-1β水平;定量实时聚合酶链式反应(quantitative real timepolymerase chain reaction,qRT-PCR)检测结肠组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)的mRNA表达;免疫印迹检测结肠组织小鼠无翅型乳腺肿瘤病毒整合位点家族成员5a(wingless type 5a,Wnt5a)、C1型尼曼-匹克蛋白(Nieman-Pick type C1,NPC1)的蛋白表达;流式细胞术检测结肠组织M1型及M2型巨噬细胞比例。[结果]与正常对照组比较,UC模型组DAI评分显著增高,结肠组织出现明显炎症病理改变,M1型巨噬细胞比例,TNF-α、IL-6、IL-1β水平,iNOS mRNA表达,Wnt5a及NPC1蛋白表达均显著增高,M2型巨噬细胞比例、IL-10水平及Arg-1 mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与UC模型组比较,CGA可显著降低小鼠DAI评分,减轻结肠组织炎症病理改变,降低结肠组织M1型巨噬细胞比例,TNF-α、IL-6、IL-1β水平,iNOS mRNA表达,以及Wnt5a和NPC1蛋白表达,增加M2型巨噬细胞比例、IL-10水平及Arg-1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。[结论]CGA可通过减少巨噬细胞向M1型极化,从而减轻由DSS诱导的炎症反应以治疗UC,其机制与抑制Wnt5a/NPC1信号通路活化有关。

VAP患者WISP1/TLR4/整合素β5通路基因及相关炎性因子的表达

目的 探究Wnt1-诱导的信号通路蛋白1(WISP1)/Toll样受体4(TLR4)/整合素β5通路基因及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-8在呼吸机相关性肺炎(VAP)患者中的表达。方法 选取2018年4月-2021年3月绍兴市人民医院收治的120例VAP患者(VAP组)及60例机械通气非VAP患者(对照组),统计VAP患者病原菌分布;比较两组外周血单个核细胞WISP1、TLR4、整合素β5 mRNA相对表达量及血清TNF-α、IL-6、IL-8水平;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析相关指标预测VAP患者28 d死亡的临床价值。结果 120例患者分离出156株病原菌,革兰阴性菌、革兰阳性菌、真菌分别占51.92%、36.54%、11.54%。VAP组外周血单个核细胞中WISP1、TLR4、整合素β5相对表达量以及血清TNF-α、IL-6、IL-8表达水平较对照组均升高(P<0.05)。VAP组死亡患者外周血单个核细胞中WISP1、TLR4 mRNA相对表达量以及血清TNF-α、IL-6表达水平较存活组均升高(P<0.05)。WISP1 mRNA、TLR4 mRNA、TNF-α、IL-6预测VAP患者28 d死亡的ROC曲线下面积分别为0.886、0.795、0.644、0.876。结论 VAP患者WISP1/TLR4/整合素β5通路激活及相关炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8水平升高,WISP1 mRNA、TLR4 mRNA、TNF-α、IL-6对VAP患者预后有一定预测价值。