Wnt5a-Ca^(2+)-CN-NFAT通路信号分子在黑素瘤中的表达

目的探讨Wnt5a-Ca2+-CN-NFAT通路主要信号分子在正常人黑素细胞及不同黑素瘤细胞系中的激活状态。方法选取正常人原代黑素细胞(MC)及来源于原位(WM793B)、侵袭性(LIBR)及转移性(SK-MEL-5)黑素瘤细胞系和色素痣、黑素瘤组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)、激光共聚焦及免疫组化法检测细胞及组织中该通路主要信号分子的表达情况。结果与正常人黑素细胞相比,在不同黑素瘤细胞系中该通路主要信号分子Wnt5a、散乱蛋白2(DVL2)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CN)、活化T细胞核因子2(NFAT2)、环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、黏着斑蛋白(vinculin)及波形蛋白(vimentin)明显高表达,且Ca2+浓度较高;CN-B、NFAT2在色素痣中均为阴性表达,而在黑素瘤组织中多数呈阳性表达(P<0.001)。在侵袭性及转移性黑素瘤中的表达强度明显高于原位黑素瘤。结论在黑素瘤的发生、发展过程中,Wnt5aCa2+-CN-NFAT信号通路可能被激活,并在黑素瘤的侵袭和转移中发挥重要作用。

长链非编码RNA NRSN2-AS1通过miR-129-5p/Wnt5a轴靶向调控Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞状细胞癌发生、发展的影响

目的探讨NRSN2-AS1对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其相关分子机制。方法应用qRT-PCR法检测96例ESCC和癌旁组织及ESCC细胞系中NRSN2-AS1的表达水平。通过体外细胞功能实验分析NRSN2-AS1过表达对ESCC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;应用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验,验证NRSN2-AS1和miR-129-5p的靶向关系及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。应用qRT-PCR法分别检测NRSN2-AS1/miR-129-5p/Wnt5a分子轴的表达。结果NRSN2-AS1在ESCC组织中(2.48±0.90)的表达显著高于癌旁组织(1.02±0.73,t=4.480,P<0.01)。NRSN2-AS1在食管癌细胞系Eca109(1.99±0.04)、TE1(2.43±0.09)、TE13(3.68±0.21)和KYSE150(4.44±0.26)中的表达显著高于对照组(1.00±0.08,P均<0.01)。NRSN2-AS1过表达可促进Eca109细胞的增殖能力(P<0.01);上调NRSN2-AS1可促进Eca109细胞的迁移及侵袭能力(P均<0.01)。NRSN2-AS1可通过竞争性结合miR-129-5p,上调Wnt5a的表达,进而激活Wnt/β-catenin信号通路。结论NRSN2-AS1可通过miR-129-5p/Wnt5a轴激活Wnt/β-catenin信号通路,促进ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭,其有望成为ESCC治疗的潜在靶点。

MiR-150-5p下调通过激活Wnt信号通路促进人牙周膜干细胞成骨分化及MMP2表达

目的:探讨mi R-150-5p在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化过程中的水平变化和其对hPDLSCs成骨分化的影响及相关机制。方法:采用有限稀释法分离培养h PDLSCs,对h PDLSCs进行成骨诱导,以mi R-150-5p抑制物(mi R-150-5p-inhibitor)及其阴性对照(miR-inhibitor-NC)转染hPDLSCs;采用real-timeRT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、R unt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)及mi R-150-5p水平;采用蛋白质印迹法检测ALP、Runx2、OPN、β-连环蛋白(β-catenin)、转录因子4 (TC F-4)及基质金属蛋白酶2 (MMP2)的蛋白表达水平;使用ALP检测试剂盒测定ALP活性。结果:分离培养的h PDLSCs经成骨诱导后,其ALP、R unx2及OPN转录水平随培养天数增加逐渐升高(P<0.05),而mi R-150-5p水平逐渐下降(P<0.05),即miR-150-5p水平与hPDLSCs成骨分化呈相反变化趋势;mi R-150-5p-inhibitor转染的h PDLSCs中,ALP、Runx2、OPN转录及表达水平,Wnt通路分子β-catenin、TCF-4及MMP2表达水平,以及A LP活性均显著增加(均P<0.05);当miR-150-5p-inhibitor联合Wnt信号通路抑制剂(IWR-1)处理h PDLSCs后,miR-150-5p下调引起的ALP、Runx2、OPN及MMP2表达和ALP活性增加均出现显著性逆转(均P<0.05)。结论:MiR-150-5p下调能够通过激活Wnt信号通路促进h PDLSCs成骨分化及MMP2表达,提示低水平的miR-150-5p有利于hPDLSCs的成骨分化过程。

骨髓间充质干细胞向软骨及骨分化：Wnt5a/PCP信号通路作用的研究与进展

背景:Wnt5a具有抑制经典Wnt信号和激活非经典Wnt信号途径的生物学功能。近年来,研究发现Wnt5a介导的Wnt5a/PCP非经典信号通路在骨髓间充质干细胞的增殖和分化过程中发挥着重要作用。但其参与骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化形成的机制并不完全清楚。目的:综述Wnt5a/PCP信号通路中的相关下游效应分子,及其在骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化形成过程中作用的最新研究进展。方法:以"间充质干细胞、Wnt信号通路、软骨分化、骨分化"为中文捡索词,以"BMSCs、Chondrogenic differentiation、Osteogenic differentiation、Wnt、Fzd、Ror2、Rho A、ROCK、JNK"为英文检索词,在维普、中国知网(CNKI)期刊全文数据库和Pub Med数据库检索2000年1月至2016年2月有关Wnt信号通路参与间充质干细胞向软骨及骨分化的文献。排除陈旧性和重复性研究,重点分析43篇文献进行综述。结果与结论:Wnt5a是非经典Wnt信号途径的代表性Wnt蛋白,主要通过其下游信号分子Fzd、Ror、Rho A、ROCK、JNK等介导,参与细胞骨架、细胞迁移和细胞极化等活动,从而调控其增殖和分化。然而Wnt5a/PCP信号通路在骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化过程中具体的作用机制并不清楚,下游效应分子之间是如何协同或独立发挥作用也是未知的,这些问题均需要进一步深入研究。

仙灵骨葆胶囊对糖尿病骨质疏松大鼠β-catenin、Runx2、LRP5的影响

目的观 察糖尿病大鼠在仙灵骨葆胶囊的干预下,骨保护作用的发挥及仙灵骨葆胶囊对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的作用,探讨仙灵骨葆胶囊在防治糖尿病骨质疏松中可能的作用机制。方法 雄性SD大鼠36只,左下腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg·kg^(-1)),建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、仙灵骨葆组(250 mg·kg^(-1))、阿仑膦酸钠组(1 mg·kg^(-1)),每组12只;同时设正常组12只。治疗12周后,检测生化指标:空腹血糖(FBG)、血钙(BC)、血磷(BP)、碱性磷酸酶(ALP);酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定骨碱性磷酸酶(BALP)、I型前胶原氨基末端前肽(PINP)、骨钙素(OCN)、骨保护蛋白(OPG)含量;检测大鼠骨密度(BMD)和股骨生物力学性能;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠骨组织β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清FBG、ALP、BALP、PINP、OPG水平升高(P<0.05),血清BC、BP、BMD、OCN水平降低(P<0.05),股骨生物力学性能下降(P<0.05),β-catenin、Runx2、LRP5 mRNA表达降低(P<0.05);与模型组大鼠比较,仙灵骨葆组能有效降低FBG、ALP、BALP、PINP、OPG水平(P<0.05),升高BC、BP、BMD、OCN含量(P<0.05),改善糖尿病骨质疏松大鼠股骨生物力学性能(P<0.05),升高β-catenin、Runx2、LRP5 mRNA的表达(P<0.05)。结论 仙灵骨葆胶囊可以改善糖尿病大鼠骨代谢,主要与调节Wnt/β-catenin信号转导通路有关,其中β-catenin、Runx2、LRP5 mRNA表达的增加对骨代谢有积极意义,在骨细胞分化方面有促进作用,具体表现在骨组织形态的改善及骨破坏减少,为糖尿病骨质疏松的防治提供了一条新思路。

miR1-2诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化过程中的Wnt/β-catenin信号通路

背景:骨髓间充质干细胞具有向心肌细胞分化的潜能,但其分化率较低,且其分化机制尚不完全明确。目的:探讨miR1-2在小鼠骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞中的作用,揭示此过程中涉及的信号通路。方法:用miR1-2和5-氮杂胞嘧啶处理小鼠骨髓间充质干细胞。通过q PCR检测心肌细胞标志物GATA4在骨髓间充质干细胞中的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率,并通过测定该信号通路的上游蛋白评价Wnt/β-catenin信号通路的活性。结果与结论:(1)miR1-2模拟物转染骨髓间充质干细胞24 h后,miR1-2在骨髓间充质干细胞中的表达显著增加。miR-2模拟物处理48 h后,骨髓间充质干细胞的凋亡率无显著差异;(2)转染miR1-2模拟物48 h后,与对照组相比,GATA4的表达随着时间的延长显著增加,处理72 h后,这些基因在miR1-2组中的表达显著高于5-氮杂胞嘧啶组和对照组;(3)与miR1-2-mimics-NC相比,用miR1-2模拟物处理后,β-catenin和Wnt11的m RNA和蛋白相对表达均显著增加,而添加Wnt/β-catenin信号通路抑制剂LGK-974后,β-catenin和Wnt11的相对表达量均显著降低;(4)结果提示,骨髓间充质干细胞中miR1-2可以更有效地诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化,并且与Wnt/β-catenin信号通路活性有关。

Wnt5a-Frizzled-2通路与缺血再灌注损伤的研究现状

Wnt信号通路包括经典通路和非经典通路,Wnt5a-Frizzled-2通路参与非经典通路中的Wnt/Ca^(2+)信号通路,该通路由Wnt相关蛋白Wnt5a与其配体Frizzled-2结合后被激活,可调控细胞中的部分关键位点影响细胞的信号转导,且与细胞的生长进程密切相关。在某些血供丰富的组织,如心脏和脑组织等发生缺血再灌注时,均存在Wnt5a-Fizzled-2通路的激活。Wnt5a-Frizzled-2通路激活后引起细胞内钙超载,最终促进细胞凋亡。本文综述Wnt5a-Frizzled-2信号通路在缺血再灌注损伤类疾病中的异常激活和引起的钙超载导致细胞凋亡,以期为缺血再灌注损伤的生理机制研究提供参考。

不同微结构磷酸三钙材料对Wnt非经典信号通路相关标志物蛋白的表达影响

背景:骨诱导的发生机制目前还不明确,骨诱导过程中支架材料微结构通过调控相关骨向分化信号通路从而发挥关键性作用。目的:探讨不同微结构磷酸三钙材料对MG63细胞中Wnt非经典信号通路相关标志物表达水平的影响。方法:利用H2O2发泡及控制烧结温度合成具有不同微结构的磷酸三钙材料(TCP-compact,TCP-middle,TCP-big),通过压汞实验、扫描电镜扫描确证材料微结构;同时将已确证的3组具有不同微结构磷酸三钙材料与MG63细胞共培养,检测Wnt非经典信号通路的标志物(Wnt5a,FZD1,ROR2,DKK1)的表达。结果与结论:与具有微孔结构材料共培养的细胞中Wnt5a,FZD1,ROR2,DKK1表达水平显著提高(P<0.05),不同孔径的材料之间Wnt5a,ROR2,DKK1表达存在差异(P<0.05);在共培养末期材料组之间4组标记物表达无显著差异(P>0.05)。材料微结构影响Wnt非经典信号通路的表达水平,其相关标志蛋白表达水平的差异为材料微孔结构所调控,在一定范围内材料孔径越大Wnt非经典信号通路被明显促进。

Wnt-5a、Wnt-11、CaMKⅡ在良性转归葡萄胎和恶性变葡萄胎中的表达及意义

目的探讨无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt-5a)、无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt-11)及Ca~(2+)/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在良性转归及恶性变葡萄胎组织中的表达其临床意义。方法收集2009年3月至2020年3月本院72例葡萄胎患者首次清宫石蜡标本,其中28例为随访发生恶变的葡萄胎(恶变葡萄胎组),44例为随访未发生恶变的葡萄胎(良性转归葡萄胎组),采用免疫组织化学法(IHC)检测上述组织标本中Wnt-5a、Wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达情况;采用ROC曲线分析Wnt-5a、Wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达对葡萄胎恶变的预测效能。结果恶变葡萄胎组和良性转归葡萄胎组的Wnt-5a(75.00%vs 29.55%)、Wnt-11(82.14%vs 22.13%)及CaMKⅡ(89.29%vs 63.64%)蛋白阳性表达率比较,恶变葡萄胎组均显著高于良性转归葡萄胎组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归结果提示宫腔病变径线≥6 cm(OR=2.328,95%CI:1.518~3.569)、Wnt-5a阳性(OR=3.347,95%CI:1.586~7.062)、Wnt-11阳性(OR=3.873,95%CI:1.664~9.014)及CaMKⅡ阳性(OR=1.355,95%CI:1.057~1.738)是葡萄胎恶变的独立危险因素(P<0.05)。Wnt-11预测葡萄胎恶变的的AUC分别大于宫腔病变径线、CaMKⅡ预测的AUC(P<0.05),与Wnt-5a预测的AUC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论恶变葡萄胎首次清宫组织中Wnt-5a、Wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达较良性转归葡萄胎异常升高,三者对葡萄胎恶变具有较好的预测价值。

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。

Wnt5a/Ror2介导的信号通路在肿瘤转移中的作用研究进展

Wnt5a是一种富含半胱氨酸结构域的分泌性糖蛋白,在生物体内Wnts家族参与调控细胞命运、胚胎发育、细胞增殖、迁移和分化等重要过程。Wnt5a参与了平面细胞极性、Wnt-Ca^(2+)及Wnt/JNK等非经典Wnt信号通路的激活。Ror2作为受体酪氨酸激酶家族中的成员之一,能够作为Wnt5a的受体或共受体参与调控Wnt5a诱导的非经典Wnt通路。Wnt5a/Ror2在肿瘤细胞和具有侵袭性的肿瘤细胞中具有持续激活的能力,通过调节MMP-13的表达导致丝状伪足的形成,最终增强细胞的侵袭力。本文将对Wnt5a/Ror2介导的信号通路对肿瘤转移方面的影响做一综述。

加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

目的:观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca^(2+)/活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T-cells,NFAT)信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。方法:用TGF-β1(10μg·L^(-1))诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca^(2+)浓度。结果:TGF-β1能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力(P<0.01),下调上皮细胞黏附分子(E-cadherin)水平(P<0.01),上调间质细胞标志蛋白(N-cadherin),转录因子(Snail)和细胞骨架蛋白(Vimentin)表达(P<0.01),并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN),活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1)总蛋白,磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca^(2+)胞内蓄积(P<0.01);而加味小陷胸汤(10,20,40 mg·L^(-1))均可明显抑制这一现象,且40 mg·L^(-1)效果最佳(P<0.05,P<0.01);Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路特异性抑制剂(R)-(+)-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L^(-1)均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-β1介导后的侵袭迁移,上调E-cadherin水平,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca^(2+)在胞内蓄积(P<0.05,P<0.01),且(R)-(+)-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L^(-1)抑制作用效果更强(P<0.05,P<0.01)。结论:以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。

基于Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca^(2+)载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

目的探讨小陷胸汤对转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响,并探讨其可能的机制。方法通过CB-DOCK在线平台(http://clab.labshare.cn/cb-dock/)预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子(NFAT)分子对接。使用质量浓度为10μg·L^(-1)的TGF-β_(1)建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型,将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组(0.1、0.2、0.4 g·L^(-1)),为进一步探讨Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用,将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞,分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤(0.4 g·L^(-1))组和Wnt5a-OE+小陷胸汤(0.4 g·L^(-1))组。分别使用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指蛋白(Snail)、Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶(CaN)、NFAT1、磷酸化(p)-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca^(2+)浓度变化。结果分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路。与模型组比较,小陷胸汤(0.1、0.2、0.4 g·L^(-1))能明显促进MGC-803细胞活力的丧失,可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞,并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合,并促进E-cadherin的表达,抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达(P<0.05,P<0.01)。进一步实验表明,与模型组比较,小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达,降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性,从而降低细胞Ca^(2+)浓度,且可逆转Wnt5a的作用(P<0.05,P<0.01)。结论小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化(EMT),从而减弱TGF-β_(1)诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。

Kremen2生物学功能研究进展

Kremen2 (kringle-containing transmembrane protein 2)是经典Wnt 信号通路中的重要调控因子。起初Kremen2 蛋白仅被认为是Wnt 信号通路的抑制因子,但后期研究发现Kremen2 蛋白在某些特定的生物环境中却发挥促进Wnt 信号通路活化的作用。在对Wnt 信号通路的调控过程中,Kremen2 蛋白需要与多种蛋白质调控因子相互作用,以参与胚胎发育、骨形成、肿瘤发生等多种生理病理过程。通过对Kremen2 相关研究文献的整理,本文综述了Kremen2 蛋白的发现与分子结构,以及其主要的相互作用因子和蛋白质功能,并提出了相关研究展望。

平面细胞极性通路在神经管缺陷中的作用

神经管缺陷(neural tube defects,NTDs)是一种常见的神经发育疾病,发病率约为千分之一。该疾病的发病机制较为复杂,是由遗传因素和环境因素共同决定的。研究发现适量补充叶酸能够降低新生儿NTDs的发病率,但尚没有有效的治疗方法。平面细胞极性(planar cell polarity,PCP)信号通路和汇聚延伸(convergent extension,CE)在神经管闭合过程中具有重要作用,一系列遗传因素调控神经管发育,其中SHROOM3、VANGL2和WNT5A这3个基因在PCP信号通路中不可或缺。本文通过综述SHROOM3、VANGL2和WNT5A的研究现状,阐述PCP信号通路在神经管闭合过程中发挥的作用,也对遗传性NTDs动物模型的研究进行了回顾。

血清分泌型卷曲相关蛋白5、Wnt1诱导型信号通路蛋白1水平与糖尿病肾脏疾病相关性的研究

目的探讨T2DM患者血清分泌型卷曲相关蛋白5(sFRP5)、Wnt1诱导型信号通路蛋白1(WISP1)水平与DKD的关系。方法选取2017年6月至2018年12月于我院全科医疗科住院的T2DM患者137例,根据UAER分为正常白蛋白尿组(NUAlb,≤30 mg/g)46例、微量白蛋白尿组(MUAlb,30~299 mg/g)43例及大量白蛋白尿组(CUAlb,≥300 mg/g)48例;同期选取于我院体检健康人群58名为正常对照组(NC)。分析各组血清sFRP5、WISP1水平变化及其与UAER的关系。结果各组血清sFRP5水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。T2DM患者血清sFRP5水平低于NC组(P<0.05),且随UAER增加而升高[6.34(3.76,10.53)vs 14.02(9.79,18.54)vs 19.34(13.39,26.12)ng/ml,P<0.05]。血清s FRP5水平与DM病程、SBP、TG、血肌酐(Scr)、UAER、eGFR呈正相关(P<0.05),与HbA1c、FPG、HOMA-IR呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,SBP、UAER是血清sFRP5水平的独立影响因素(P<0.05)。T2DM患者血清WISP1水平高于NC组[0.77(0.48,0.99)vs 1.07(0.80,1.23)vs 1.46(0.99,1.53)vs 0.42(0.13,0.71)ng/ml,P<0.05],且随UAER增加而升高[0.77(0.48,0.99)vs 1.07(0.80,1.23)vs 1.46(0.99,1.53)ng/ml,P<0.05]。血清WISP1水平与SBP、DBP、TG、TC、HbA1c、FPG、2 hPG、FIns、HOMA-IR、BUN、Scr、UAER呈正相关(P<0.05),与HDL-C、e GFR呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,DM病程、HOMA-IR、UAER是血清WISP1水平的影响因素(P<0.05)。结论血清sFRP5、WISP1水平变化与DKD不同阶段相关,可能参与DKD的发生发展。

生髓健骨胶囊对酒精性骨质疏松大鼠Wnt信号通路的影响

目的研究生髓健骨胶囊对大鼠Wnt信号通路及PPARγ2-mRNA表达的影响。方法120只SD大鼠,随机分为空白对照组,模型组,西药对照组,中药干预组。通过灌胃法造模,然后通过酶联免疫法检测各组骨组织中Wnt/β-Catenin信号通路β-Catenin和LRP 5的表达情况,以及RT-PCR检测PPARγ2-mRNA的表达量。结果大鼠股骨组织中β-Catenin和LRP 5含量,西药对照组、中药干预组与模型组相比,结果均明显升高(P<0.01);西药对照组与中药干预组相比较(P<0.05),说明西药对照组结果低于中药干预组;大鼠股骨组织中PPARγ2 mRNA的表达,与空白对照组比较,模型组大鼠PPARγ2的mRNA表达均明显升高;中药干预组及西药对照组与模型组比较,均有不同程度下调PPARγ2的mRNA表达,其中以中药干预组下调水平最为明显。结论中药生髓健骨胶囊可以通过激活Wnt信号通路来干预脂质转录基因PPARγ2表达来实现防治酒精性骨质疏松。

桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体表达的影响

目的观察桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的影响,从Wnt/Ca2+信号通路角度探讨其作用机制。方法取2月龄雄性SD大鼠80只,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤组和阻滞剂组,每组20只,除正常组外,其余各组均阻断血流制备大鼠右后肢缺血-再灌注损伤模型,桃红四物汤组、阻滞剂组造模前分别给予桃红四物汤灌胃、阻滞剂腹腔注射预处理,HE染色和DAPI荧光染色观察再灌后8 h腓肠肌细胞凋亡,免疫组化检测再灌后8 h腓肠肌IP3R蛋白的表达,RT-PCR检测再灌后0、2、4、8 h腓肠肌IP3R mRNA的表达。结果HE染色和DAPI荧光染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,桃红四物汤组和阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05),桃红四物汤组低于阻滞剂组(P<0.05)。免疫组化及RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,桃红四物汤组、阻滞剂组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显下调(P<0.05)。结论桃红四物汤通过下调Wnt5a/Ca2+信号通路IP3R的表达减轻肢体缺血-再灌注损伤。

桃红四物汤对大鼠后肢缺血-再灌注损伤骨骼肌CaMKⅡ、PKC表达的影响

目的观察桃红四物汤对大鼠后肢缺血-再灌注损伤骨骼肌钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、蛋白激酶C(PKC)表达的影响,从Wnt/Ca^(2+)信号通路角度探讨其作用机制。方法取2月龄雄性SD大鼠80只,随机分成正常组、模型组、桃红四物汤组、阻滞剂组,每组20只。除正常组外,其他各组均阻断血流复制右后肢缺血-再灌注损伤模型,桃红四物汤组、阻滞剂组(FZR5、Wnt5a阻滞剂)在造模前分别予以桃红四物汤灌胃、阻滞剂腹腔注射预处理。DAPI法观察复灌后各组腓肠肌细胞凋亡变化;RT-qPCR检测复灌后(0、2、4、8 h)腓肠肌CaMKⅡ、PKC mRNA的表达;免疫组化(IHC)检测复灌后8 h腓肠肌中CaMKⅡ、PKC蛋白的阳性表达。结果DAPI荧光染色结果显示,与正常组比较,模型组、桃红四物汤组、阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,桃红四物汤组和阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。RT-qPCR和IHC结果显示,与正常组比较,模型组、桃红四物汤组、阻滞剂组CaMKⅡ、PKC蛋白和mRNA表达一致性上调(P<0.05);与模型组相比,桃红四物汤组、阻滞剂组CaMKⅡ蛋白和mRNA表达一致性下调(P<0.05),PKC mRNA表达下调(P<0.05),但PKC蛋白表达下调不明显(P>0.05),不同时间点显示相同倾向性。结论CaMKⅡ、PKC为大鼠肢体缺血-再灌注骨骼肌损伤中的关键蛋白,桃红四物汤可通过调控Wnt5a/Ca^(2+)信号通路下调CaMKⅡ表达来减轻肢体缺血-再灌注损伤,PKC不是Wnt5a/Ca^(2+)信号通路中桃红四物汤的主要作用靶点。

普鲁卡因与5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肝肿瘤细胞株HepG_2中Wif-1基因启动子甲基化影响的比较研究

目的探讨普鲁卡因与5′-氮杂-2′-脱氧胞苷(5′-Aza-2′-deoxycycytidine,5-aza-dc)对人肝肿瘤细胞株HepG2经典Wnt信号通路抑制因子-1(Wif-1)基因启动子脱甲基化作用的影响。方法以普鲁卡因或5-aza-dc干预HepG2细胞,采用RT-PCR及Western blot检测干预前后Wif-1基因mRNA及蛋白的表达;甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测干预前后HepG2细胞中Wif-1甲基化变化。结果 RT-PCR和Western blot结果显示经普鲁卡因或5-aza-dc作用前HepG2细胞Wif-1基因mRNA与蛋白呈低表达或缺失,经普鲁卡因或5-aza-dc作用后HepG2细胞Wif-1基因mRNA与蛋白呈高表达,各组间比较差异有统计学意义,且普鲁卡因实验组表达高于5-aza-dc实验组(P<0.05)。MSP结果显示,经普鲁卡因或5-aza-dc干预后HepG2细胞与干预前HepG2细胞比较均呈部分脱甲基化状态,对应的甲基化率分别为(14.41±3.37)%和(29.29±1.84)%(P<0.05)。结论普鲁卡因及5-aza-dc均可影响Wif-1基因启动子CpG岛的甲基化状态。普鲁卡因可以作为一种新的去甲基化药物且效果优于常规药物5-aza-dc。