Wortmannin增强人恶性胶质瘤细胞辐射敏感性的实验研究

目的:研究渥曼青霉素(Wortmannin,WT)对人恶性胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用。方法:采用集落形成实验、流式细胞术、核增殖性抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫荧光染色,以及透射电镜技术检测WT联合X线对U251细胞克隆形成及凋亡的影响。结果:WT预处理后的U251细胞接受X线照射后,集落形成率和PCNA的表达明显低于仅接受射线照射组,并且凋亡和坏死细胞数目明显增多,在透射电镜下,可见典型的凋亡和坏死细胞的形态。结论:WT作用后,明显增强了X线对U251细胞增殖的抑制作用,促进了X线引起的U251细胞凋亡和坏死的发生,增加了U251细胞的辐射敏感性。

节律基因Period2对肿瘤细胞生长及放射敏感性的影响

目的探讨Period2(Per2)基因对细胞生长及放射敏感性的影响。方法体外培养C6神经胶质瘤细胞(C6g liom a ce lls),使用脂质体包裹法将Per2表达质粒(pcDNA3.1-Per2)转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的C6细胞在正常情况下和γ射线照射后的凋亡、生长。结果未经γ射线照射的Per2阳性表达的C6细胞较对照组细胞增殖减慢、凋亡率增加,但γ射线照射后的较对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少。结论节律基因Per2过表达会增加肿瘤细胞的凋亡,但在射线照射情况下会降低肿瘤细胞对射线的敏感性。

丙戊酸钠对人脑胶质瘤细胞系SHG-44的放疗增敏作用

目的:研究丙戊酸钠对人脑胶质瘤细胞系SHG-44的放疗增敏作用及其可能机制。方法:应用0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mmol/L丙戊酸钠干预体外培养的SHG-44细胞,MTT法检测不同时间及不同剂量丙戊酸钠对SHG-44细胞的抑制率、以克隆形成率实验检测丙戊酸钠对SHG-44细胞的放射增敏比、流式细胞术检测细胞凋亡及周期差异。结果:丙戊酸钠明显抑制细胞增殖,并具有时间及剂量依赖性,并且对胶质瘤细胞株SHG-44具有放疗增敏作用,放射增敏比为1.32;流式细胞术分析见细胞凋亡,联合组较对照组明显增加,细胞周期中联合组G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低,联合组与各单独作用组相比差异显著。结论:丙戊酸钠能增强SHG-44细胞放疗敏感性,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期时相分布等机制来实现的。

WORT增强γ射线对SHG44细胞周期及凋亡的影响

研究渥曼青霉素(Wortmannin,WORT)对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用克隆法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞克隆形成、细胞周期和凋亡以及凋亡的形态学特征。结果表明:WORT能抑制细胞克隆形成,和60Coγ射线联用抑制作用增强,表现出协同作用。WORT和60Coγ射线联用能引起SHG-44细胞G1期阻滞,WORT能增强60Coγ射线诱导的细胞凋亡,凋亡细胞核固缩和核碎裂,可见凋亡小体。以上结果表明,WORT可能通过诱导细胞G1期阻滞和凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性。

中药提取物姜黄素对人视网膜神经胶质瘤细胞的放射增敏作用

目的研究中药提取物姜黄素对人视网膜神经胶质瘤WERI-Rb-1细胞的放射增敏作用。方法采用X射线辐照仪辐照人视网膜神经胶质瘤WERI-Rb-1细胞。CCK-8细胞活性检测试剂盒检测0μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、5μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、20μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)姜黄素,0 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy、8 Gy射线以及姜黄素联合射线作用细胞不同时间对细胞活性的影响;流式细胞仪检测单独姜黄素、射线、姜黄素联合射线引起的细胞周期阻滞以及线粒体膜电位的变化情况;Hochest33258细胞核染色观察单独姜黄素、射线、姜黄素联合射线对细胞凋亡的影响。结果 0μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、5μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、20μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)姜黄素和单独的0 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy、8 Gy射线随剂量和时间增加均能引起细胞活性的下降;2 Gy射线联合不同浓度的姜黄素(0μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、5μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、20μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1))相比单独的姜黄素可以引起细胞活性显著下降;10μmol·L^(-1)姜黄素联合2 Gy射线能够将细胞周期明显阻滞在G2/M期,阻滞率为(79.6±2.1)%,并诱导细胞凋亡和线粒体膜电位下降为(48.3±4.3)%。结论姜黄素联合射线对人视网膜神经胶质瘤WERI-Rb-1细胞具有显著的放射增敏作用,并诱导细胞凋亡和线粒体膜电位下降,为姜黄素的临床应用提供一定理论依据。

Tamoxifen联合γ线照射对脑胶质瘤细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

研究三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用3H-TdR掺入法、免疫组织化学法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞DNA合成、雌激素受体表达、细胞凋亡及凋亡的形态学特征。结果表明,TAM能抑制细胞DNA合成,与60Coγ线联用抑制作用增强,表现出协同作用。TAM能诱导细胞凋亡,其凋亡率随TAM浓度的升高而增高,凋亡细胞核固缩和核碎裂,可见凋亡小体。而免疫组化结果显示SHG-44细胞不表达雌激素受体。以上结果表明TAM可能通过诱导细胞凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性,而与雌激素受体途径无关。

脑胶质瘤放射敏感性研究概况

肿瘤对放射线的敏感性直接影响到放疗效果。人脑胶质瘤内在放射敏感性的影响因素很多,放射线引起的细胞凋亡、细胞周期变化、基因突变以及放射损伤和损伤修复等均与脑胶质瘤的内在放射敏感性密切相关。2Gy照射后的存活分数(survivalfractionat2Gy,SF2)是内在放射敏感性的重要反映指标。但体外试验所得的脑胶质瘤内在放射敏感性的检测结果(SF2)与临床放射治疗疗效以及患者预后之间有无关联,目前尚无定论。SF2能否作为胶质瘤临床放射治疗疗效和患者预后的评价指标还有待进一步的研究。

顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和辐射增敏作用

目的:观察顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的抑制及放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法:不同浓度紫杉醇(0、0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml和5μg/ml)作用于SHG-44细胞,MTT法检测顺铂对SHG-44细胞的增殖抑制作用;克隆形成法检测细胞辐射敏感性变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率变化。结果:顺铂有明显的抑制SHG-44细胞增殖和提高其放射敏感性的作用,顺铂可提高3 Gy、6 Gy照射24 h后SHG-44细胞的凋亡率。结论:顺铂对人胶质瘤SH-44细胞具有杀伤及放射增敏作用。其可能机制是加强射线对肿瘤细胞的诱导凋亡效应,增加其杀伤肿瘤作用。

榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响

目的观察榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响。方法应用MTT法检测不同浓度榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制率。采用榄香烯单独或联合放射线作用于脑胶质瘤U251细胞,用集落形成实验和单击多靶模型拟合细胞存活曲线,获得放射增敏比;应用流式细胞技术分析榄香烯对U251细胞凋亡率的影响。结果榄香烯可抑制脑胶质瘤U251细胞的增殖,且与浓度相关;97.86μmoL和195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞24 h后,联合放射的放射增敏比(SER)分别为1.179和1.429;195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞3 h和6 h后,联合放射的SER分别为1.139和1.356;流式细胞仪分析表明榄香烯作用24 h后,随着榄香烯浓度的增加,U251细胞凋亡率越高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论榄香烯能够抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖,并有放射增敏作用,且放射增敏作用的大小与药物作用浓度及作用时间有关系。

榄香烯对人胶质瘤U251细胞的放射增敏机制

目的:探讨榄香烯对人胶质瘤U251细胞的放射增敏机制。方法:以U251细胞系为离体胶质瘤模型,用不同浓度榄香烯和不同放射剂量分别处理U251细胞,采用MTT实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:榄香烯对U251细胞具有生长抑制及放射增敏作用;放疗联合榄香烯组U251细胞较放射组有更高的早期凋亡率、继发性坏死率和总死亡率;榄香烯能诱导U251细胞G2/M期阻滞;榄香烯通过降低细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)表达,导致放疗诱导的cyclin B1表达降低,从而抑制cyclin B-Cdc2复合物形成;同时抑制Cdc2蛋白第161位苏氨酸磷酸化,降低Cdc2的活性,从而诱导细胞G2/M期阻滞;另外可能通过下调survivin表达,介导细胞凋亡。结论:榄香烯可能通过下调Cdc2蛋白、降低cyclin B1表达、抑制cylcin B-Cdc2复合物的形成、下调survivin表达等方面增强U251细胞对放疗的敏感性。

LINC00963靶向miR-144-5p调控脑胶质瘤细胞凋亡及放射敏感性

目的探讨LINC00963靶向miR-144-5p对脑胶质瘤细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑胶质瘤组织和与正常脑组织中LINC00963和miR-144-5p的表达水平。利用StarBase在线预测、荧光素酶报告基因实验及RT-qPCR验证LINC00963和miR-144-5p的靶向关系。干扰LINC00963表达、过表达miR-144-5p后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印记(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)蛋白的表达,克隆形成实验检测细胞存活分数,并绘制单击多靶模型拟合曲线。结果与正常脑组织比较,脑胶质瘤组织中LINC00963的表达显著升高,miR-144-5p的表达显著降低(P<0.05)。LINC00963靶向负性调控miR-144-5p表达。沉默LINC00963或过表达miR-144-5p后,Bcl-2的表达显著降低,Bax和cleaved-caspase3的表达显著升高,细胞凋亡率和放射敏感性显著增加(P<0.05)。抑制miR-144-5p表达逆转干扰LINC00963表达对脑胶质瘤U251细胞凋亡和放射敏感性的影响(P<0.05)。结论干扰LINC00963通过上调miR-144-5p进而促进脑胶质瘤细胞凋亡并增加其放射敏感性。

红景天苷调节Nrf2/ROS通路增强U-251MG的放射敏感性

目的:探究红景天苷(SD)对人星形胶质瘤细胞U-251MG放疗敏感性的影响及相关的分子机制。方法:将U-251MG细胞随机分成4组:对照组、红景天苷单独处理组(SD)、放疗组和放射+SD组。SD组和放射+SD组加50 nmol/L红景天苷处理,放疗组和放射+SD组给予10 Gy、6 MV X射线照射。细胞增殖试剂盒(CCK8)检测0、1、2、3、4 d细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹检测B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO-1)的表达。氧化应激相关试剂盒检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)的活性。脑立体定向注射U-251MG建立原位移植瘤裸鼠模型,接种1周后,将20只雄性裸鼠随机分成4组,每组5只。SD组和放射+SD组裸鼠腹腔注射50 nmol/kg的红景天苷,放疗组和放射+SD组裸鼠给予X射线照射。28 d后检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和PCNA的表达。结果:与对照组相比,SD组和放疗组细胞增殖速率显著降低;凋亡细胞数目明显增加;Bcl-2表达显著下调,Bax的表达显著上调;ROS和MDA的含量显著升高,SOD和Gpx的活性显著降低;Nrf2和NQO-1的表达变化无显著差异,HO-1的表达显著下调;SD组和放疗组体内实验中肿瘤重量显著降低,Ki67和PCNA的表达显著下调。放射+SD组与SD组和放疗组相比,细胞增殖速率显著降低;凋亡细胞数目明显增加;Bcl-2表达显著下调,Bax的表达显著上调;ROS和MDA的含量显著上升,SOD和Gpx的活性显著降低;Nrf2、HO-1和NQO-1的表达显著下调;放射+SD组体内实验中肿瘤重量显著降低,Ki67和PCNA的表达显著下调。结论:红景天苷可能通过调节Nrf2/ROS通路,增强人星形胶质瘤U-251MG的放射敏感性。

多靶点抑制剂西奥罗尼增强人胶质瘤细胞放射敏感性的机制

目的:探索多靶点抑制剂西奥罗尼对人胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制。方法:利用CCK-8实验和集落形成实验测定西奥罗尼对人胶质瘤U251细胞和T98G细胞增殖能力的影响。进一步,对U251细胞和T98G细胞进行药物和(或)X射线处理,设对照组、西奥罗尼(2.5μmol/L)组、4 Gy辐照组和西奥罗尼(2.5μmol/L)联合4 Gy辐照组,流式细胞术检测4组细胞的细胞周期和凋亡变化;通过Westernblot检测4组细胞周期和凋亡关键蛋白的表达量;通过免疫荧光实验,探索西奥罗尼联合辐照对DNA损伤和修复的影响;最后通过Western blot检测DNA损伤修复关键蛋白的表达量。结果:与对照组相比,西奥罗尼显著抑制U251细胞和T98G细胞的增殖,半数抑制浓度(IC_(50))分别为7.773μmol/L和24.68μmol/L;随着X射线剂量的增加,细胞存活率在X射线辐照组和联合组中均显著降低,并且联合组在不同射线剂量的细胞存活率均低于单独辐照组,西奥罗尼的辐射增敏比(SER)分别为1.387和1.384。U251细胞对照组、西奥罗尼(2.5μmol/L)组、4 Gy辐照组和西奥罗尼(2.5μmol/L)联合4 Gy辐照组中处于G_(2)/M期的细胞比例分别为(17.68±0.98)%、(18.93±0.03)%、(16.31±0.58)%和(23.96±1.18)%;4组细胞的总凋亡率分别为(8.04±0.24)%、(17.04±0.75)%、(9.34±0.50)%和(21.22±0.38)%。T98G细胞对照组、西奥罗尼(2.5μmol/L)组、4 Gy辐照组和西奥罗尼(2.5μmol/L)联合4 Gy辐照组中处于G_(2)/M期的细胞比例分别为(2.05±0.71)%、(5.70±0.34)%、(5.14±0.33)%和(6.54±0.13)%;4组细胞的总凋亡率分别为(11.35±0.39)%、(13.23±0.18)%、(17.43±0.30)%和(21.32±0.64)%。免疫荧光实验发现,在30 min,γH2AX荧光灶点在单纯辐照组和联合组中均十分明显,并且联合组的荧光强度更强;在6 h和24 h,γH2AX荧光灶点在X射线辐照组中逐渐减少,而在联合组中可以观察到γH2AX的荧光强度依然较强。结论:西奥罗尼通过诱导G_(2)/M期阻滞、促进凋亡、诱导DNA损伤及延迟DNA修复来增强人胶质瘤细胞的放射敏感性。

甲氟喹对胶质瘤细胞的放射增敏作用

目的:研究甲氟喹对胶质瘤细胞的放射增敏作用,并对其机制进行初步探索。方法:取指数生长期的胶质瘤U251细胞,采用CCK-8检测法研究甲氟喹作用后U251细胞的存活率;细胞克隆形成实验评估甲氟喹对U251细胞的放射增敏效果;流式细胞技术检测甲氟喹联合X射线作用后U251细胞的活性氧水平和细胞凋亡率,探索联合作用下U251细胞的死亡机制。结果:甲氟喹对胶质瘤细胞具有良好的放射增敏效果,其对U251细胞的最大放射增敏比为1.64。X射线联合甲氟喹作用于U251细胞后,细胞的凋亡水平增加,活性氧水平增加,活性氧抑制剂谷胱甘肽能抑制X射线联合甲氟喹作用诱导的U251细胞凋亡。结论:甲氟喹对U251细胞有放射增敏作用,其作用机制可能为通过增加细胞活性氧水平、诱导细胞凋亡导致放射敏感性增加。

T-钙黏蛋白与恶性胶质瘤发生、发展及放疗敏感性的关系

目的探讨T-钙黏蛋白与恶性胶质瘤发生、发展及放疗敏感性的关系。方法(1)取37例恶性胶质瘤患者的癌组织和癌旁组织,以及正常胶质细胞株HEB和胶质瘤细胞系U251、A172,检测其T-钙黏蛋白mRNA和蛋白的表达情况。比较不同T-钙黏蛋白表达情况的患者的中位生存期。(2)将U251细胞、A172细胞分别分为空白对照组、阴性对照组、T-钙黏蛋白过表达组,空白对照组细胞不进行转染,将质粒pcDNA3.1、pcDNA3.1-T-cadherin分别转染至阴性对照组、T-钙黏蛋白过表达组细胞。检测转染后各组U251、A172细胞的增殖、凋亡、迁移能力,T-钙黏蛋白、波形蛋白、E-钙黏蛋白的表达水平。对转染后各组U251、A172细胞进行放射干预后,检测细胞存活率和相对克隆数。将各组转染后的U251细胞皮下注射至裸鼠右侧腋窝处,观察注射部位的成瘤情况。结果(1)恶性胶质瘤组织中T-钙黏蛋白的mRNA表达水平和阳性表达率均低于癌旁组织;T-钙黏蛋白表达阴性患者中位生存期短于T-钙黏蛋白表达阳性患者(均P<0.05)。与正常胶质细胞株HEB相比,胶质瘤细胞系U251和A172中T-钙黏蛋白的mRNA和蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。(2)与空白对照组、阴性对照组比较,T-钙黏蛋白过表达组U251与A172细胞的EdU阳性率均降低,细胞凋亡率升高,迁移细胞数减少,波形蛋白表达水平下调,而T-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白表达水平均上调,4 Gy、6 Gy的γ射线照射后细胞存活率降低,6 Gy的γ射线照射后细胞相对克隆数减少(均P<0.05)。与空白对照组、阴性对照组比较,T-钙黏蛋白过表达组裸鼠的肿瘤体积缩小(均P<0.05)。结论T-钙黏蛋白在恶性胶质瘤中呈现异常低表达状态。过表达T-钙黏蛋白能够明显抑制恶性胶质瘤的发展,并提高其放疗敏感性,有利于改善患者预后。

siRNA干扰Geminin基因对脑胶质瘤放疗敏感性的影响

目的观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组:si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后DNA含量分布,进而分析敲低Geminin对DNA再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法,用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和DNA相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织,且Geminin表达越高,脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表达降低(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组敲低Geminin可诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型、细胞凋亡比例显著增加(P<0.05),脑胶质瘤细胞对放疗敏感性增强(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin相关分子Cdt1蛋白表达水平降低,γ-H2AX的蛋白表达水平升高。结论敲低Geminin可以诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型,造成DNA复制压力,并引起自发性细胞周期阻滞及细胞凋亡增多,进而增强脑胶质瘤细胞放疗敏感性,Geminin有望成为脑胶质瘤治疗的新靶点。

丙戊酸钠增强大鼠胶质瘤C6细胞放射敏感性的体外实验

目的观察丙戊酸钠(VPA)对C6胶质瘤细胞系的体外放射增敏性,为治疗胶质瘤提供实验依据。方法体外常规培养C6胶质瘤细胞,采用不同浓度(0、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)的VPA,作用于C6胶质瘤细胞不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测C6胶质瘤细胞增殖抑制率,选择合适的作用浓度和作用时间;0.5 mmol/L VPA作用C6胶质瘤细胞后,分别给予不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)的X射线,克隆形成实验观察其对C6胶质瘤细胞的放射增敏作用;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度VPA对C6胶质瘤细胞凋亡率的影响;实验分为对照组、药物组、照射组及联合组,实时定量PCR法检测各组凋亡基因Bcl-2及Bax mRNA的表达。结果VPA对大鼠胶质瘤C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度、时间依赖性,不同浓度、时间之间比较,差异有统计学意义(P<0.05);VPA在0.5 mmol/L浓度时,对C6胶质瘤细胞毒性较低,且可增加X射线对C6胶质瘤细胞的杀伤作用,放射增敏比为1.30;VPA能够诱导C6胶质瘤细胞凋亡,并且凋亡率随浓度的增高而升高,各浓度之间比较差异有统计学意义(P<0.05);VPA对C6胶质瘤细胞的凋亡作用,在转录水平可下调Bcl-2表达,同时上调Bax的表达。结论 VPA对大鼠胶质瘤C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度、时间依赖性。低浓度的VPA对C6胶质瘤细胞毒性较低,但可增加X射线对C6胶质瘤细胞的杀伤作用,其放射增敏机制与直接抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、调节凋亡相关基因的表达有关。

榄香烯体外增强人脑胶质瘤U251细胞对γ射线敏感性的研究

目的探讨榄香烯体外增强人脑胶质瘤U251细胞对γ射线敏感性的机制研究。方法人脑胶质瘤U251细胞分为4组:空白组、加药组(榄香烯治疗)、放射组(单独γ射线照射)和联合组(榄香烯联合γ射线照射),应用克隆形成计数法,绘制细胞放射生存曲线,计算增敏比,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期,电镜观察不同方法处理的U251细胞超微结构的改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-myc和bcl-2基因的表达。结果榄香烯增强γ射线对U251细胞株抑制率,呈剂量的依赖性,榄香烯增强U251细胞对γ射线敏感的比值为1.38,FCM检测榄香烯增强γ射线对U251细胞的阻滞作用,导致G_2/M期细胞比例明显升高,联合组细胞电镜下见细胞核分裂;RT-PCR证实榄香烯增强γ射线对U251细胞c-myc和bcl-2基因表达的抑制作用。结论榄香烯对U251细胞有放射增敏作用,其作用机制可能与下调bcl-2和c-myc基因表达有关,诱导U251细胞凋亡和对细胞G_2/M期阻滞有关。

miR-21反义寡核苷酸对SHG-44放射增敏作用的体外研究

目的 探讨抑制miR-21表达对SHG-44人脑胶质瘤细胞系放射敏感性的影响及其机制.方法 脂质体介导采用瞬间转染法转染反义miR-21寡核苷酸（AS-miR-21）及阴性对照寡核苷酸于胶质瘤SHG-44细胞中.设空白对照组、阴性对照转染组及AS-miR-21转染组,分别给予6 MeVX射线单次照射0、1、2、4、6和8 Gy,采用成克隆实验计算放射增敏比,并绘制细胞存活曲线.流式细胞仪检测上述3组及联合单次6 Gy照射后细胞凋亡率、细胞周期变化.结果 转染AS-miR-21组的D0、Dq较空白对照组及阴性转染组降低,放射增敏比SERD0、SERDq分别为1.32和2.10.细胞周期分析示,转染组较空白对照及阴性对照组的G0/G1期比例增高,S期比例降低（t=8.18、-4.52,P＜0.05）.凋亡分析示,单纯照射组、AS-miR-21转染组及照射联合AS-miR-21转染组的早期凋亡率均高于对照组（t=20.14、11.11、50.07,P＜0.05）.结论 AS-miR-21可增加胶质瘤SHG-44细胞系放射敏感性,其机制可能与促进细胞凋亡及周期再分布有关.

渥曼青霉素对胶质瘤细胞U251的辐射增敏作用

目的利用渥曼青霉素（wortmannin,WM）抑制人恶性胶质瘤细胞U251磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）通路的活性,探讨对U251细胞辐射敏感性的影响及可能的作用机制.方法 采用10μmol/L WM预处理U251 2 h,并接受10 Gy X射线照射,检测PI3K/Akt信号通路的活性、集落形成率和凋亡的变化;通过Western blot方法检测凋亡相关蛋白活化型Caspase-3、Bax、Bcl-2及XIAP表达的变化.结果 10 μmol/L WM预处理2h,明显抑制了U251细胞phospho-Akt的表达（t=0.000 1,P＜0.01）.WM预处理联合X射线照射后,U251细胞的凋亡率由对照组和单纯照射组的（2.14±1.32）％和（11.5±2.9）％增加到（22.6±3.8）％,差异具有统计学意义（t=0.009 3、0.002 7,P＜0.01）;集落形成率由对照组和单纯照射组的（88.54±4.76）％和（56.31±4.05）％降低到（12.25±9.59）％（t=0.000 03、0.000 2,P＜0.01）;同时伴随着凋亡相关蛋白活化型Caspase-3表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值明显增高以及XIAP的显著降低.结论 WM通过抑制PI3 K/Akt信号通路活性,增加凋亡蛋白Caspase-3的活化和Bax/Bcl-2比值,下调凋亡抑制蛋白XIAP来增强恶性胶质瘤细胞的辐射敏感性.