河北省5株牛支原体的分离鉴定和药敏试验

为了确定肉牛场犊牛患呼吸道疾病死亡的致病原,本试验采集河北省秦皇岛地区5个肉牛养殖场病牛的肺脏组织进行病原的分离培养,采用染色镜检、培养特性观察、支原体特异性oppD/F基因鉴定、16S rRNA序列比对和同源性分析鉴定分离菌株,并通过药敏试验筛选敏感药物,检测中西药对分离菌株的抑菌效果。结果显示,分离菌株在PPLO肉汤固体基础培养基上为针尖大小白色菌落,瑞氏染色菌体呈球状;oppD/F基因和16S rRNA基因扩增均可得预期目的条带,16S rRNA基因序列与NCBI中牛支原体参考序列同源性达99%,在遗传进化树中处于同一分支,共从病牛肺脏分离鉴定出5株牛支原体,分别命名为ZYT-1~ZYT-5;药敏试验结果显示,5株牛支原体分离菌株对恩诺沙星、环丙沙星、土霉素和氟苯尼考极度敏感,对中药苏木、五味子、白头翁和乌梅极度敏感。结果表明,肉牛场患病犊牛的致病原为牛支原体,本试验结果可为当地牛支原体感染临床病例的治疗用药提供参考依据。

脑脊液不同涂片和染色方法在颅内感染诊断中的比较分析

目的:比较和分析脑脊液不同涂片和染色方法在颅内感染诊断中应用情况,为临床颅内感染的准确诊断提供参考。方法:选取2017年9月—2021年8月福建医科大学附属龙岩市第一医院临床送检的845份脑脊液标本作为研究资料,采用不同的涂片和染色方法进行实验,并与常规培养和鉴定的结果进行比较,分析不同涂片和染色方法在颅内感染诊断中的价值。结果:培养和鉴定结果显示,845份脑脊液标本中有99份的微生物培养结果为阳性,共分离出病原菌103株,其中革兰阳性菌79株、革兰阴性菌9株、真菌15株;增菌涂片下革兰染色和瑞氏染色的实验结果与培养鉴定结果的阳性符合率均高于95.00%,而离心涂片下革兰染色、墨汁染色、抗酸染色的实验结果与培养鉴定结果的阳性符合率均低于50.00%;与培养鉴定结果相比,增菌涂片的革兰染色结果与其一致性非常好(Kappa值均>0.90),而离心涂片的革兰染色结果的一致性就相对较差(Kappa值均<0.80)。结论:脑脊液增菌涂片的革兰染色和瑞氏染色有着较高的阳性符合率,可在一定条件下配合培养法帮助医生更好、更准确地诊断颅内感染,从而避免漏诊、误诊。

阴道分泌物瑞氏法与悬浮法检查结果比较

目的对比瑞氏染色法和悬浮法阴道分泌物(白带)常见疾病信息的检出率,以证明瑞氏染色法替代悬浮法的可行性。方法用悬浮法、瑞氏染色法对396份阴道分泌物标本同时进行镜检,检查清洁度、滴虫、真菌、线索细胞、淋球菌,对比分析两种方法的检测结果。结果悬浮法检出清洁度(Ⅲ～Ⅳ)、滴虫、真菌、线索细胞的阳性率分别为60.10%、5.56%、25.51%、21.97%,瑞氏染色法检出其阳性率分别为70.70%、5.81%、32.32%、29.04%,瑞氏法对清洁度、真菌、线索细胞的检出率明显高于悬浮法(P<0.05)。结论瑞氏法白带常规阳性检出率高且易于进行质量控制,建议采用该法以提高其临床诊治水平。

人附红细胞体感染实验诊断方法的建立

目的比较瑞氏-吉姆萨染色、吖啶橙荧光染色以及聚合酶链反应(PCR)对人附红细胞体的检出率,探索最可靠的检测人附红细胞体病的方法。方法选取体检健康人50名,同时从白血病及肾移植患者中分别选取50例,使用瑞氏-吉姆萨染色法以及吖啶橙荧光染色法检测附红体的感染率,同时选取1例2种方法检测结果均为强阳性的标本,根据GenBank中已收录的猪、牛、羊、猫、鼠等5种附红细胞体的16S rRNA基因序列设计一对特异性引物,初步建立人附红体病的分子诊断方法。结果体检健康人群中瑞氏-吉姆萨染色法以及吖啶橙荧光染色法检出率分别为32%和24%,白血病组的检出率分别为94%和62%,肾移植组的检出率分别为88%和68%,同时初步建立了人附红细胞体病的分子诊断方法,但需进一步研究将其完善。结论吖啶橙荧光染色法最适合临床作为人附红细胞体病的临床检测方法。

小鼠阴道涂片技术及其染色方法的研究

目的比较研究棉签法、生理盐水冲洗法进行阴道涂片,HE染色法、瑞氏染色法、巴氏染色法染色对C57BL/6小鼠阴道涂片细胞组织染色的效果,为小鼠动情周期的确定寻找便捷、有效的检验方法。方法对10只C57BL/6雌性小鼠分两笼饲养,每日10∶00用棉签法、生理盐水法进行阴道涂片,连续15 d,并使用HE染色法、瑞氏染色法、巴氏染色法,观察记录。结果连续实验生理盐水法优于棉签法,HE染色染料易于获得;瑞氏染色分型清楚,染色佳;巴氏染色形态清晰,分色明显,透明度好。结论大样本量旨在判断动情周期的发生与改变实验应采用瑞氏染色法,可辅以巴氏染色以增强实验动物数据资料的可靠性。

河南省猪附红细胞体病流行病学调查

采用新鲜血液压片相衬观察和末梢血液涂片瑞氏染色镜检法,调查了河南省5个县3000头猪附红细胞体病发病情况,结果表明,猪附红细胞体病的发病率为46.33%,死亡率为13.88%,隐性感染率为55.93%。

改良支气管肺泡灌洗液细胞分类计数制片及染色法

目的：改良支气管肺泡灌洗液细胞分类制片及染色方法，并对其临床实用性进行验证。 方法：随机抽取50例门诊及住院患者肺泡灌洗液标本，分别用改良的自动化瑞氏吉姆萨染色法及传统手工HE染色法染色，由两名具有专业技术能力的检验人员分别进行显微镜下细胞分类计数，评估两种制片方法检测结果的可比性。 结果：两种方法对肺泡灌洗液中吞噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞计数一致性较好，相关系数（r）均〉0.95。改良法染色的细胞形态完整，细胞核和细胞浆分辨清楚，可见颗粒、空泡等细微结构；而传统法染色后的细胞固缩明显，细胞体积变小，细胞核和细胞浆分辨清晰度下降，颗粒和空泡等细胞结构辨认不清。改良法比传统法省去了滤液离心富集细胞的过程（6 min），并且使用自动化瑞氏吉姆萨染色法（20 min）代替了手工HE染色法（30 min），每份标本至少节省了15－20 min的制片和染色时间。 结论：改良的自动化瑞氏吉姆萨染色法优于手工HE染色法，更适用于支气管肺泡灌洗液细胞分类计数，尤其是批量检测。

Zn^(2+)-硫氰酸铵-瑞士色素体系褪色光度法测定食盐中锌

吐温20存在下,在pH5.7 NaAc-HAc缓冲溶液中,Zn2+与硫氰酸铵和瑞士色素发生离子缔合反应,使瑞士色素褪色,据此建立了褪色光度法测定痕量锌的新方法。最大褪色波长为656 nm,体系的褪色程度与Zn2+浓度在0～0.24μg/mL范围内呈线性关系,表观摩尔吸光系数1.58×105L.mol-1.cm-1,检出限为2.56μg/L。方法用于测定锌强化营养盐和健康平衡盐中锌,相对标准偏差为0.64%～0.87%(n=5),回收率为99.0%～99.7%。

RH株弓形虫速殖子体外入侵大鼠肠上皮细胞与增殖的动态观察

目的动态观察弓形虫RH株速殖子(简称速殖子)体外入侵大鼠肠上皮细胞(IEC-6细胞)及其增殖过程。方法取24孔培养板,设实验组及对照组各3孔,每孔放置经预处理的盖玻片。将常规传代培养的IEC-6细胞接种于各培养孔,于37℃5%CO2培养箱培养24h,吸弃培养液,实验组每孔加入1ml速殖子悬液(含1×106个速殖子),对照组每孔加入1ml无抗生素培养液,共培养。用倒置显微镜连续观察速殖子粘附、入侵IEC-6细胞及其增殖过程,并分别于共培养5～30min、1～48h后取出盖玻片,经吉氏-瑞氏染色后光镜观察其入侵和增殖情况,计算入侵率。结果共培养5min,速殖子即可入侵IEC-6细胞,随着共培养时间的延长入侵的速殖子逐渐增多,1h为1～5个,入侵率为(55.0±6.6)%。2h入侵率高达(81.8±10.2)%,有假包囊形成,速殖子可入侵细胞核并在核内增殖。4h入侵率降为(80.8±9.2)%,假包囊破裂释出成簇排列的速殖子。6h入侵率为(75.1±8.2)%,成簇排列的速殖子显著增多。12h成簇排列的速殖子减少,多数速殖子游离细胞外,完整的IEC-6细胞明显减少。24h只见部分IEC-6细胞和假包囊存在,有大量游离的速殖子。48h见大量游离速殖子,未见贴壁细胞。结论体外培养的弓形虫速殖子可迅速入侵IEC-6细胞,并可在细胞质及细胞核内增殖。增殖周期为6～12h。

两种检测方法对地塞米松诱导小鼠淋巴细胞凋亡的观察

目的探讨地塞米松体外诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡的实验方法,为进一步研究淋巴细胞凋亡对机体免疫调节作用机理及其临床应用提供实验依据。方法取昆明小鼠,分离其脾脏淋巴细胞制成单细胞悬液,实验组加入地塞米松(DEX)使终浓度为10-5mol/L,培养24 h后,采用瑞氏染色法光镜下观察凋亡细胞形态,用凝胶电泳法观察其DNA ladder;同时设立不加DEX的对照组及新鲜淋巴细胞对照组。结果光镜观察,淋巴细胞在DEX作用下,可见典型的凋亡形态特征变化,主要表现为细胞核边聚、浓缩,以“齿轮状”细胞改变多见;DNA凝胶电泳图谱呈现典型的凋亡DNA ladder,两种方法结果相符。而未加DEX对照组凋亡细胞明显偏少,新鲜淋巴细胞对照组未见凋亡改变。结论体外条件下用DEX可高效诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡,用瑞氏染色法及DNA凝胶电泳法能准确、快速鉴定凋亡淋巴细胞。

精液中白细胞两种鉴别方法的比较与评价

用瑞氏－姬姆萨染色法和免疫细胞化学法对１２６名不育男性进行了精液白细胞检测，白细胞检出率分别为６６．６７％和６９．０５％，两法符合率为９２．１％，两法同时开展可以进一步提高精液中白细胞检测水平。

瑞氏-姬姆萨与巴氏染色法对精子形态染色效果比较

目的比较瑞氏-姬姆萨染色法和巴氏染色法对精子形态染色的效果,寻找可替代巴氏染色法的简单、有效的精子形态染色方法。方法随机选取21份精液标本,每份标本同时采用瑞氏-姬姆萨染色法和巴氏染色法对精液涂片进行染色,分析两种染色方法的结果。结果两种染色方法对精子形态的评估结果无显著性差异(P>0.05);且对正常形态精子和异常形态精子的评估分别具有正相关性,r值为0.984、0.986(P均<0.01)。结论瑞氏-姬姆萨染色法是一种简单有效的精子形态染色方法,可替代巴氏染色法。

黑褐新糠虾血细胞形态及其与日本新糠虾对溶藻弧菌敏感性的比较

实验采用Giemsa与Wright’s两种染色方法对黑褐新糠虾血细胞进行染色,根据血细胞大小,所含颗粒与否,颗粒多少和核质比将其分型,并对各型血细胞所占比例进行统计。结果表明,通过比较Giemsa染色与Wright’s染色两种方法的染色时间和效果,Wright’s染色更加适合糠虾血细胞。通过染色,将黑褐新糠虾血细胞分为3种类型,它们分别为透明细胞、半颗粒细胞和颗粒细胞。它们的胞体大小依次增大,核质比依次降低。对此3种类型血细胞比例分别统计后发现,颗粒细胞所占比例最多约(48.38%±0.05%),其次是半颗粒细胞约为(35.22%±0.04%),最少的为透明细胞约为(16.40%±0.01%)。对不同浓度溶藻弧菌的感染试验发现,日本新糠虾在较短的时间内出现死亡,即48 h,而黑褐新糠虾72 h出现死亡,各浓度组中日本新糠虾死亡率均高于黑褐新糠虾。黑褐新糠虾相对日本新糠虾来说,对溶藻弧菌具有较低的敏感性,可能与其血细胞中颗粒和半颗粒比例较高有关。

高碘酸钾氧化瑞士色素催化动力学光度法测定微量钛(Ⅳ)

基于硫酸介质中，Ti（Ⅳ）对KIO4氧化瑞士色素（曙红亚甲基蓝）反应的催化作用建立了测定微量钛的动力学光度法新体系。考察了酸度、反应物浓度、反应时间、反应温度、共存离子等因素对反应的影响，确定了测定的适宜条件。测得非催化反应和催化反应的活化能分别为70．65kJ／moL和31．59kJ／moL，方法的线性范围为0．08～1．0μg／mLTi（Ⅳ），检出限为0．056μg／mL。将该方法用于硅铁中微量钛的测定，回收率在98．2％～104．7％之间。

5DF血球分析仪检测白细胞分类计数与瑞氏染色镜检结果对比研究

目的 探讨5DF血球分析仪白细胞分类计数与传统的瑞氏染色镜检计数结果之间的差异。方法 用5分类血球分析仪和瑞氏染色法同时对10 0份血样进行分类计数,并用统计学分析研究。结果 中性粒细胞、嗜酸、嗜碱性细胞和淋巴细胞分类计数两法无明显差异(P均>0 .0 5 ) ,但单核细胞分类计数仪器法比镜检法结果偏高(P <0 .0 0 1)。结论 对于一般血液常规检查可选用仪器法筛查,而血液系统疾病或某种原因引起的细胞结构改变应选用镜检法。

Sm(Ⅲ)—KBrO_3—瑞士色素体系阻抑动力学光度法测定微量钐(Ⅲ)

研究发现在稀HCl介质中，微量钐（Ⅲ）对溴酸钾氧化瑞士色素褪色反应有很好的阻抑作用。据此建立了阻抑动力学光度法测定微量钐（Ⅲ）的新方法。确定了反应的最佳条件，并讨论了动力学参数。方法线性范围为0．0～0．32mg／L，检出限为6．47×10^-6g／L。

诊断桑树黄化型萎缩病的新方法

本文探讨利用瑞氏染色法和旦尼氏染色法诊断桑树黄化型萎缩病的可能性。试验结果表明,用此方法,在病株枝条或主根的横切面上,韧皮部的病原寄生部位被染成兰色或青色,呈阳性反应,健株组织切片的韧皮部则不着色,呈阴性反应。可作为桑黄化型萎缩病病株的实验诊断手段。

21例CNM脑脊液新生隐球菌的实验检测分析

目的检测新生隐球菌性脑膜炎(CNM)患者脑脊液(CSF)中的新生隐球菌,探讨几个方法的形态特征。方法对21例CNM患者CSF应用细胞计数器直接观察、瑞氏染色、印度墨汁涂片、革兰染色及培养后等实验室方法检测,并比较其阳性率和形态特征。结果隐球菌检测阳性率分别为真菌培养90.5%,印度墨汁染色81.0%,瑞氏染色和细胞学计数各为61.9%,革兰染色42.9%;墨汁涂片检测可显示荚膜和出芽;瑞氏染色可发现其周围毛刺;革兰染色仅现菌体深染。结论在基层医院细胞镜检计数、瑞氏染色、革兰染色及墨汁涂片法与真菌培养的正确、灵活结合可提高CSF中隐球菌的阳性检出率。

瑞氏色素褪色分光光度法测定啤酒酵母中铬含量

取啤酒酵母样品0.200 0g,用硝酸及过氧化氢微波消解,所得透明溶液蒸发至近干,冷却,加水溶解盐类。在pH 12的条件下滴加高锰酸钾溶液将铬(Ⅲ)氧化至六价,过量高锰酸钾滴加乙醇使还原褪色,用稀硝酸调节酸度到近中性。过滤,滤液定容至50mL。取此溶液2.0mL,置于25mL容量瓶中,随后依次加入50g·L^(-1)硫脲溶液2 mL,5 mol·L^(-1)磷酸溶液1.0 mL,0.2mol·L^(-1)碘化钾溶液4.0mL,10g·L^(-1)聚乙烯醇溶液3.5mL和0.5g·L^(-1)瑞氏色素溶液4.0mL,加水定容并摇匀。同时按相同操作制备试剂空白,但不加样品溶液。避光反应20min,试样溶液中的铬(Ⅵ)在此体系中反应后导致瑞氏色素褪色。于波长662nm处分别测得试样和空白溶液的吸光度A和A0,并计算ΔA(A0-A)。结果表明:ΔA与铬(Ⅵ)的质量浓度在0.40mg·L^(-1)以内呈线性关系,检出限(3s/k)为0.005 5mg·L^(-1)。实样的分析结果与原子吸收光谱法所测结果一致。测定值的相对标准偏差(n=5)在1.4%~2.3%之间,加标回收率在99.1%~102%之间。

慢性病贫血骨髓细胞学及病理学改变的观察研究

目的研究慢性病贫血（ACD）和缺铁性贫血（IDA）骨髓涂片及骨髓活检的特点及临床意义。方法患者行两步法骨髓穿刺术，获取骨髓涂片和骨髓活组织标本。骨髓涂片常规做瑞氏染色和铁染色，骨髓活检切片做苏木精-姬姆萨-酸性品红（HGF）染色和Gomori网状纤维染色。结果骨髓涂片中：ACD骨髓增生程度高于IDA，ACD患者的粒红比高于IDA患者，ACD患者的铁染色中外铁增高，多为2＋～3＋。骨髓活检中：ACD患者中约有1／3的患者可见到反应性浆细胞增多，有将近一半的ACD患者可见到网状纤维染色增高。结论骨髓活检塑料包埋切片在ACD诊断及鉴别诊断中有重要的参考意义，骨髓涂片和骨髓活检切片的联合应用可以提高ACD实验诊断的准确率。