四神丸、二神丸及五味子散对结肠炎小鼠肠道菌群失衡的调控作用

目的探讨四神丸、二神丸及五味子散对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道菌群的调控作用。方法BALB/c小鼠随机分成正常组、复发型结肠炎模型组、复发型结肠炎四神丸组、复发型结肠炎二神丸组、复发型结肠炎五味子散组和美沙拉嗪对照组,采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立慢性复发型溃疡性结肠炎小鼠模型,经给药治疗10 d后,通过体质量变化增长率、体质量、结肠重量、结肠重量指数、结肠长度、单位结肠质量指数及结肠镜下损伤评分评价其疗效,采用MiSeq高通量测序检测盲肠内容物肠道菌群表达水平,同时采用蛋白免疫印迹法检测小鼠结肠黏膜中模式识别受体4(toll-like receptor 4,TLR4)和模式识别受体2(toll-like receptor 2,TLR2)的表达。结果与模型组比较,四神丸、二神丸及五味子散组小鼠体质量增长率和结肠长度有不同程度地增加,结肠质量、结肠重量指数、单位结肠质量指数和结肠镜下病理损伤评分明显降低;同时,肠道菌群结构分析发现,与模型组比较,给药组物种均匀度、丰富度升高,多样性增加,且给药组物种及优势菌群聚类较为集中,同时给药组TLR2、TLR4表达水平下降(P<0.05或P<0.01),且关联性分析表明,四神丸组样本与结肠长度变化的方向一致呈正相关,与TLR4、TLR2病理损伤评分变化的方向相反呈负相关。相关性Heatmap显示病理损伤评分与毛螺旋菌科(uncultured bacterium Lachnospiraceae)_NK4A136_group呈负相关,与毛螺旋菌科(unclassified Lachnospiraceae)_UCG-006、拟杆菌属(Bacteroides_acidifaciens)呈正相关;TLR4与瘤胃球菌(unclassified Ruminococcaceae)_UCG-014呈正相关。进化分析揭示了缓慢葡萄球菌(Staphylococcus_lentus)和毛螺旋菌科(unclassified_Lactobacillus),拟杆菌属酸化菌(Bacteroides_acidifaciens)和拟杆菌属肠杆菌(Bacteroides_caecimuris)的亲缘关系最为密切,而模型组在Bacteroides_acidifaciens表达水平上调,治疗组水平下降。结论四神丸可能通过调控肠道菌群平衡而达到减轻DSS诱导型结肠炎的目的,二神丸、五味子散在改善腹泻症状、恢复结肠形态、调控肠道菌群平衡治疗UC中具有协同治疗作用。

四神丸及拆方对大鼠实验性溃疡性结肠炎的影响

目的:观察四神丸、二神丸及五味子散对2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitro-Benzenesulfonicacid,TNBS)诱导的溃疡性结肠炎大鼠(Ulcerative colitis,UC)的治疗作用,并从自噬的角度探讨其中机制及配伍意义。方法:采用TNBS灌肠法复制UC大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、美沙拉嗪0.36 g/kg组、四神丸3.4 g/kg组、二神丸3.2 g/kg组、五味子散3.2 g/kg组,每组10只;另设正常对照组10只。每日灌胃给予相应药物或蒸馏水,连续7 d。每日对大鼠的一般情况进行疾病活跃指数评分(Disease Activity Index,DAI);HE染色观察结肠组织病理变化;ELISA法检测结肠组织中白细胞介素(Interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)-α含量;荧光Tunel法检测结肠下层黏膜组织中细胞凋亡情况;电镜检测结肠下层组织细胞中自噬小体;Western Blot法检测结肠程序性死亡受体-1(Beclin)-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠DAI评分、结肠组织中IL-1β和TNF-α含量均显著升高(P<0.01),结肠黏膜下层组织增生明显,细胞内未见典型自噬结构,结肠组织黏膜下层细胞凋亡率无明显变化,结肠LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,四神丸3.4 g/kg组、二神丸3.2 g/kg组及五味子散3.2 g/kg组大鼠的一般情况明显改善,大鼠DAI评分显著降低(P<0.01),结肠黏膜下层组织增生减少,自噬小体数量增加;四神丸3.4 g/kg组及二神丸3.2 g/kg组大鼠结肠组织中IL-1β和TNF-α含量显著降低,结肠组织黏膜下层细胞凋亡显著增加(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与二神丸3.2 g/kg组和五味子散3.2 g/kg组比较,四神丸3.4 g/kg组UC大鼠的一般情况、组织病理和细胞超微结构病理变化改善更为显著,黏膜下层组织细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Beclin-1的蛋白表达明显上调(P<0.05);与五味子散3.2 g/kg组相比,四神丸3.4 g/kg组大鼠结肠组织中IL-1β和TNF-α含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:四神丸及其拆方能够通过促进自噬,降低炎症因子水平,促进结肠黏膜下层凋亡,缓解UC症状,且四神丸的作用优于二神丸和五味子散。

玉屏风散合人参五味子汤与常规西医治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病的效果

目的 探究玉屏风散合人参五味子汤与常规西医治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病的效果。方法 选取2020年3月至2022年8月郑州大学第五附属医院收治的稳定期慢性阻塞性肺疾病患者92例,随机数表法分为观察组、对照组,各46例。对照组行常规西医治疗,观察组在常规西医基础上加行玉屏风散合人参五味子汤治疗,两组均持续治疗12周。比较两组中医证候评分、呼吸力学状态[总呼吸道黏性阻力(R5)、共振频率(Fres)、肺顺应性(CL)、总顺应性(CT)]。结果 (1)治疗过程观察组脱落1例、对照组脱落2例,最终观察组45例、对照组44例纳入本研究。(2)治疗6周、12周,两组患者R5、Fres呈降低趋势(P<0.05),Cl、Ct提高(P<0.05);且观察组患者治疗6周、12周的R5、Fres低于对照组,Cl、Ct高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 常规西医基础上加行玉屏风散合人参五味子汤治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病可明显改善患者中医证候及肺功能,调节呼吸力学状态,提高临床疗效。

四神丸及其拆方对结肠炎小鼠Treg细胞及PD-1/PD-L1表达的影响

目的探讨四神丸、二神丸及五味子散对结肠炎小鼠Treg细胞及PD-1/PD-L1表达的影响。方法将60只雄性BALB/c小鼠随机平均分为正常组、模型组、四神丸组、二神丸组、五味子散组、美沙拉嗪组,除正常组以外,其他组均采用葡聚糖硫酸钠复制慢性复发性溃疡性小鼠结肠炎模型。造模成功后,模型组和正常对照组小鼠均以饮用水灌胃,四神丸组小鼠给予2.5 g/kg四神丸溶液灌胃,二神丸组小鼠给予10 g/kg二神丸溶液灌胃,五味子散组小鼠给予6 g/kg五味子散溶液灌胃,美沙拉嗪组小鼠给予300 mg/kg美沙拉嗪混悬液灌胃,连续给药10天。观察实验小鼠体质量、结肠长度、结肠重量、结肠重量指数、病理损伤评分评价其疗效,并采用流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血中Treg及其亚群CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)(Treg)、CD4^(+)CD25^(+)PD-1^(+)(PD-1^(+)Treg)和CD4^(+)CD25^(+)PD-L1^(+)(PD-L1^(+)Treg)细胞水平;结果与模型组相比,四神丸、二神丸及五味子散治疗组小鼠结肠长度增加,结肠体质量、结肠重量指数和结肠镜下病理损伤评分均显著降低(P<0.05或P<0.01),同时各治疗组PD-1^(+)Treg和PD-L1^(+)Treg细胞水平明显下调,Treg细胞水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论四神丸、二神丸、五味子散可通过升高Treg细胞水平,抑制PD-1/PD-L1表达而治疗实验性结肠炎。