长链非编码RNA X非活性特异性转录物(XIST)在心房颤动患者中的表达与临床意义

目的:研究长链非编码RNA X非活性特异性转录物(XIST)在心房颤动(AF)患者中的表达特征与临床意义。方法:选取2021年6月至2022年5月在山东第一医科大学第一附属医院心内科治疗的75例AF患者,并选取同期75例体检窦性心律者作为健康对照者。采集清晨空腹静脉血并分离血清,通过实时荧光定量PCR检测XIST表达水平。采用t和F检验分析XIST表达与年龄、性别、慢性病(糖尿病、高血压及冠心病)患病情况、AF类型(阵发性、持续性及永久性)、AF评分(CHA2DS2-VASc评分)及心功能分级(I、II、III及IV)之间的关系。采用Spearman检验分析XIST表达与左心室射血分数(LVEF)和左心房内径(LAD)的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析XIST表达检测AF的诊断价值。结果:AF患者血清中XIST表达水平低于健康对照者(P < 0.05)。持续性和永久性AF患者血清中XIST表达水平低于阵发性AF患者(P < 0.05)。CHA2DS2-VASc评分 ≥ 2的AF患者血清中XIST表达水平低于CHA2DS2-VASc评分 < 2的AF患者(P < 0.05)。心功能III~IV级AF患者血清中XIST表达水平低于心功能I~II级AF患者(P < 0.05)。XIST表达与LVEF呈正相关(r = 0.48, P < 0.05),而与LAD负相关(r = −0.73, P < 0.05)。XIST表达诊断AF、阵发性AF、持续性AF及永久性AF的曲线下面积分别为0.66、0.69、0.77及0.82 (P < 0.05)。结论:AF患者血清中XIST表达水平下调,与AF类型、CHA2DS2-VASc评分、心功能分级、LVEF及LAD相关。XIST表达对协助AF诊断具有一定的作用。

血清miR-98-5p、LncRNA XIST在急性呼吸窘迫综合征患儿中与疾病严重程度、预后的关系

目的:检测急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清中微小RNA(miR)-98-5p、长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异性转录因子(XIST)表达情况,并探究二者与疾病严重程度、预后的关系。方法:收集86例ARDS患儿为研究对象(研究组),同期健康体检儿童90名设为对照(对照组),参考柏林(2012年)ARDS病情严重程度诊断标准中动脉血氧分压/吸入氧浓度将ARDS患儿分为轻度组、中度组、重度组;另根据ARDS患儿28 d生存状况分为存活组和死亡组。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测血清miR-98-5p、LncRNA XIST水平,绘制受试者工作特性(ROC)曲线分析血清中miR-98-5p、LncRNA XIST水平对ARDS患儿预后不良的预测价值;Kaplan-Meier生存曲线分析血清miR-98-5p、LncRNA XIST水平与ARDS患儿预后的关系;Pearson分析ARDS患儿血清中miR-98-5p与LncRNA XIST的相关性。结果:与对照组相比,研究组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.01),LncRNA XIST水平升高(P<0.01)。与轻度组相比,中度组、重度组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.05),LncRNA XIST水平升高(P<0.05);与中度组相比,重度组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.05),LncRNA XIST水平升高(P<0.05)。与存活组相比,死亡组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.01),LncRNA XIST水平升高(P<0.01)。ROC曲线显示,血清中miR-98-5p、LncRNA XIST水平预测ARDS患儿预后不良的ROC曲线下面积分别为0.771、0.764,截断值分别为0.54、1.97,其敏感性分别为76.1%、86.9%,特异性分别为73.7%、52.6%;血清中miR-98-5p联合LncRNA XIST预测ARDS患儿预后不良的ROC曲线下面积为0.888,其敏感性为77.6%、特异性为94.7%。miR-98-5p高表达者存活率35.14%高于低表达者12.24%(P<0.05),LncRNA XIST高表达存活率12.73%低于低表达者38.71%(P<0.01)。Pearson分析发现ARDS患儿血清中miR-98-5p与LncRNA XIST呈负相关关系(r=-0.411,P<0.05)。Starbase3.0预测发现LncRNA XIST与miR-98-5p存在结合位点。结论:ARDS患儿血清中miR-98-5p水平降低、LncRNA XIST水平升高,二者均与疾病严重程度、预后关系密切,且二者呈显著负相关,有望用于评估ARDS疾病严重程度、预后。

血清lncRNAXIST和SIRT1水平与DR的关系及其诊断价值

目的:检测2型糖尿病(T2DM)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)X非活性特异性转录本(XIST)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达水平,并探讨其与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性及其诊断价值。方法:前瞻性研究。选取2022-01/2023-02在我院收治T2DM患者214例作为研究对象。根据是否发生视网膜病变,分为非DR组126例126眼,DR组88例88眼。另选取同期体检健康者130例为对照组。检测三组血清lncRNA XIST、SIRT1水平并进行比较。采用Pearson法分析lncRNA XIST和SIRT1表达与DR的关系,受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA XIST、SIRT1单独及联合对DR的预测价值,多因素Logistic回归分析影响T2DM患者发生DR的因素。结果:与对照组比较,非DR组和DR组血清lncRNA XIST、SIRT1水平依次降低(均P<0.05);DR患者血清lncRNA XIST和SIRT1水平呈正相关(r=0.639,P<0.05);ROC分析显示,血清lncRNA XIST、SIRT1联合预测DR的曲线下面积(AUC)为0.940,高于血清lncRNA XIST、SIRT1单独检测的AUC(0.855、0.875)。Logistic回归分析显示,lncRNA XIST(OR=0.752)、SIRT1(OR=0.694)是DR发生的影响因素(均P<0.01)。结论:DR患者血清lncRNA XIST、SIRT1水平均降低,lncRNA XIST联合SIRT1对DR发生有较好的评估效能。

急性脑损伤大鼠脑组织核转录因子-κB活性及肿瘤坏死因子-α表达的变化

本研究旨在观察大鼠急性脑损伤后脑组织核转录因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的变化,探讨NF-κB活化在脑损伤后继发性脑水肿中的作用;并给应用NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)治疗提供佐证.

子宫内膜癌组织中lncRNA XIST、miR-132-3p的表达及与病理参数和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中长链非编码RNA X非活性特异性转录本(lncRNA XIST)、微RNA-132-3p(miR-132-3p)的表达及与病理参数和预后的关系。方法选取2016年2月至2019年12月江苏省南通市第六人民医院及江苏省南通市肿瘤医院收治的100例EC患者,采用q PCR检测癌组织与癌旁正常组织中lncRNA XIST、miR-132-3p表达。Star Base数据库预测lncRNA XIST与miR-132-3p的关系,Pearson相关性分析lncRNA XIST与miR-132-3p的相关性。随访3年,根据EC组织中lncRNA XIST、miR-132-3p的平均表达量将患者分为高表达组和低表达组,采用K-M法绘制不同lncRNA XIST、miR-132-3p表达患者的生存曲线。结果癌组织中lncRNA XIST表达高于癌旁正常组织,miR-132-3p表达低于癌旁正常组织(P<0.05)。lncRNA XIST与miR-132-3p存在互补序列,lncRNA XIST与miR-132-3p表达呈负相关(r=-0.694,P<0.01)。不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、脉管侵犯和淋巴结转移EC组织中lncRNA XIST、miR-132-3p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA XIST高表达组3年累积生存率低于lncRNA XIST低表达组,miR-132-3p高表达组3年累积生存率高于miR-132-3p低表达组(P<0.05)。结论EC组织中lncRNA XIST高表达和miR-132-3p低表达,两者与分化程度、FIGO分期、脉管侵犯、淋巴结转移及预后有关。

血清lncRNA XIST与老年膝关节骨性关节炎病情严重程度及炎性因子水平的相关性

目的分析血清长链非编码RNA(lncRNA)X非活性特异性转录本(XIST)水平与老年膝关节骨性关节炎(KOA)患者病情严重程度及炎性因子水平的相关性。方法选择2019年3月至2021年4月确诊的96例KOA患者为研究对象(研究组),同期健康体检者100例作为对照(对照组),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测血清中XIST水平,酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL-6)水平。根据X线片评估,参考Kellgren-Lawrence(K-L)分级标准对所有受试者病情严重程度进行分级;Spearman分析KOA患者病情严重程度与血清中XIST、IL-1β、TNF-α、IL-6水平关系;Pearson分析KOA患者血清中XIST与IL-1β、TNF-α、IL-6水平关系。结果与对照组比较,研究组血清中XIST、IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)。K-L分级判定结果:对照组均为0级,研究组Ⅰ级19例、Ⅱ级24例、Ⅲ级36例、Ⅳ级17例。Spearman分析发现KOA患者血清中XIST、IL-1β、TNF-α、IL-6水平与病情严重程度呈正相关(r值分别为0.784、0.791、0.657、0.703,P<0.05);Pearson分析发现KOA患者血清中XIST水平与IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(r值分别为0.635、0.525、0.414,P<0.05)。结论老年KOA患者血清中XIST水平升高,且其与病情严重程度、炎性因子水平关系密切,可能对于指导临床治疗老年KOA患者具有一定意义。

肿瘤特异性启动子驱动的RNA干扰在肿瘤基因靶向治疗中的研究

理想的肿瘤基因治疗是靶向、高效和长期稳定表达。肿瘤特异性启动子（tumor—specific promoter，TSP）是一类在肿瘤细胞中有特异性转录活性，而在正常细胞中无转录活性的启动子。由于其在肿瘤细胞中高表达，因此可驱动目的基因在靶器官组织中的特异性表达，实现肿瘤基因治疗的靶向性。

非小细胞肺癌患者区域淋巴结LUNX基因表达及其临床意义

目的:探讨人类肺组织特异性X蛋白(lung-specific X protein,LUNX)的基因诊断在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)微转移中的临床意义。方法:随机收集43例临床非小细胞肺癌患者作为实验组,同时随机收集15例良性肺部病变患者作为对照组。通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测人类LUNX的靶基因的mRNA在实验组和对照组患者淋巴结中的表达,并与患者相对应的临床病理资料进行相关性分析。结果:LUNX mRNA在两组患者的肺组织及肿块中均为阳性表达;实验组43例患者的87枚淋巴结中有33枚(37.93%)有LUNX mRNA表达,对照组15例肺部良性病变患者的26枚淋巴结中有2枚(7.69%)表达LUNX mRNA,两组比较差异有统计学意义(P(0.05)。LUNX mRNA淋巴结表达阳性与肺癌患者病理类型、细胞分化程度、临床分期有密切关系(r=0.660,0.500,0.460;P=0.011,0.017,0.021);而与患者性别、年龄、吸烟史,以及血清肺癌4项肿瘤标志物(CEA,CA125,NSE和CYFRA211)无明显关系(r=0.230,0.235,0.180,0.354;P=0.739,0.714,0.773,0.125)。结论:与传统的病理切片检查判断NSCLC淋巴结微转移相比,RT-PCR检测肺癌患者淋巴结LUNX mRNA的表达有较高的敏感性。LUNX mRNA的表达是检测肺癌微转移的一个有价值的指标,可为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。

转录因子CBF4诱导型启动子的克隆及功能分析

根据已有文献及公开的拟南芥基因组序列,利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsisthaliana)基因组DNA中扩增得到了转录因子CBF4上游的DNA片断,对其进行序列分析表明与GenBank序列高度同源,同时对其进行初步的功能分析。采用生物信息学方法对这一序列分析的结果显示这一片段具有启动子的特殊结构域;与GUS基因融合构建双元表达载体,转化烟草的组织特异性表达检测可见明显的GUS活性,初步表明所获片断为CBF4基因的诱导型启动子。

非小细胞肺癌患者骨髓CK19和LUNX mRNA的实时荧光定量检测和意义

目的:检测非小细胞肺癌患者CK19mRNA和LUNXmRNA的表达情况,探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。方法:选择初治的非小细胞肺癌(NSCLC)患者62例,以肺部良性疾病10例作为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和普通RT-PCR技术,检测肺癌、良性病变肺组织和骨髓的CK19mRNA和LUNXmRNA的表达。结果:肺癌和良性病变肺组织RT-PCR检测结果显示CK19mRNA和LUNXmRNA表达阳性率为100%;62例NSCLC患者骨髓标本FQ-RT-PCR检测结果显示,NSCLC患者中骨髓CK19mRNA表达阳性率45.2%(28/62),明显高于肺良性病变组10%(1/10)(P=0.037),NSCLC组骨髓LUNXmRNA表达阳性率38.7%(24/62)明显高于肺良性病变组0%(0/10)(P=0.017);骨髓CK19mRNA表达阳性率随病理分期升高,接近统计学意义(P=0.06),而与病理类型、肿瘤分化程度无关;骨髓LUNXmRNA表达阳性率随分期升高且有统计学意义(P=0.02),而与病理类型、肿瘤分化程度无关;骨髓CK19mRNA和LUNXmRNA表达明显相关(P<0.001)。结论:CK19mRNA和LUNXmRNA可作为检测非小细胞肺癌患者微转移特异、敏感的分子标志物,可能有助于早期诊断肺癌转移,从而指导临床分期和治疗。

人端粒酶反转录酶和脆性组氨酸三联体基因在口腔鳞癌中的表达及意义

端粒酶被认为是迄今为止最具有人体肿瘤特异性和敏感性的分子标志物,人端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTRT）是端粒酶活性的限速酶,只在端粒酶阳性的肿瘤细胞和永生化细胞中表达,与端粒酶活性平行相关[1]。脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad,FHIT）是1996年发现的一种抑癌基因,

LUNX与VEGFA基因联合检测对Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结微转移的临床意义

目的探讨人类肺组织特异性X蛋白(LUNX)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因联合检测对I期非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结微转移的临床意义。方法选择入院手术的39例I期NSCLC患者(淋巴结78枚)为实验组,同期入院的10例肺良性肿瘤患者(淋巴结19枚)为对照组,采用RT-PCR检测两组患者淋巴结LUNX、VEGFA m RNA表达,并分析其表达与NSCLC患者临床特征的相关性。结果实验组淋巴结LUNX、VEGFA m RNA阳性表达率为23.08%、19.23%,分别高于对照组的5.26%、0.00%(均P<0.05)。与常规病理检测比较,RT-PCR检测LUNX、VEGFA m RNA表达诊断NSCLC淋巴结微转移阳性率均较高(均P<0.05)。I期NSCLC患者淋巴结LUNX、VEGFA m RNA表达水平与肺癌病理类型、细胞分化程度、TNM分期均呈正相关(r=0.661、0.552和0.527,均P<0.05),与患者性别、年龄、吸烟史等未见相关(r=0.212、0.236和0.183,均P>0.05)。结论 LUNX、VEGF基因联合检测可辅助常规病理检测判断I期NSCLC淋巴结微转移,为临床诊治提供一定的帮助。

胸水LUNX mRNA检测对肺癌胸膜转移的诊断价值

目的：探讨胸腔积液（胸水）LUNX mRNA检测对肺癌胸膜转移的诊断价值。方法：用荧光定量RT-PCR法检测肺癌组44例、肺外肿瘤13例、肺部良性疾病46例及肺外良性疾病11例胸水标本LUNX mRNA表达;用放射免疫分析法检测胸水中癌胚抗原（CEA）、糖类抗原（CA125）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）,并进行胸水细胞学检测。结果：肺癌组、肺部良性疾病组胸水LUNX mRNA阳性率及中位拷贝数分别为88.6%、23.58copies/ml和5.26%、0copies/ml;肺外良、恶性疾病组胸水LUNX mRNA阳性率及拷贝数均为0;LUNX mRNA检测的敏感性（88.6%）高于CEA、CA125及CYFRA21-1（40.9%、59.1%、61.3%）（P〈0.05~P〈0.005）;LUNX mRNA阳性率为88.6%,高于细胞学检查的阳性率（65.9%）（P〈0.005）。结论：LUNX mRNA是诊断肺癌胸膜转移特异性较高的分子标志物,对临床胸水性质的鉴别诊断能提供较好的参考价值。

肺癌外周血中EGFR mRNA、SP-D mRNA、LUNX mRNA表达的临床意义

目的:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肺癌患者肿瘤组织和外周血中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达,探讨其作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法:应用RT-PCR技术检测40例非小细胞肺癌组织和15例肺良性病变组织中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达;检测40例肺癌患者外周血中靶基因的表达,并以15例良性肺疾病患者和10名健康人外周血作为对照。结果:40例肺癌患者病理组织中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达率为77.5%(31/40)、100%(40/40)、100%(40/40),外周血中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA表达阳性率分别为55.0%(22/40)、52.5%(21/40)和57.5%(23/40);对照组中15例肺良性病变患者病理组织中EGFRmRNA表达率为13.3%(2/15),无SP-DmRNA和LUNXmRNA表达,15例肺良性病变患者和10名健康人的外周血中无EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA表达。结论:EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA作为检测肺癌组织及肺癌外周血微转移的分子标志物具有良好的敏感度和特异性;三者表达与肺癌TNM分期、组织学类型和癌细胞分化程度关系密切。

Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结中LUNX mRNA的表达与微转移相关性研究

目的探讨人肺组织特异性X蛋白(LUNX)用于诊断Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)微转移的可行性及其临床意义。方法选取39例Ⅰ期NSCLC手术患者的肿瘤组织、肺门及纵隔淋巴结78枚作为实验组,另选取10例肺良性疾病的淋巴结19枚作为对照组,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测LUNX mRNA,分析其表达与病理分期等相关性。结果两组淋巴结中LUNX mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05);LUNX mRNA淋巴结表达阳性与肺癌患者病理类型、细胞分化程度及临床分期密切相关(P<0.05)。结论 RT-PCR检测肺癌患者淋巴结LUNX mRNA的表达有较高的敏感性;LUNX mRNA可用作检测早期NSCLC淋巴结微转移的重要标志物,可为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。

LncRNA XIST通过调控miR-140-3p/PD-L1轴促进弥漫大B细胞淋巴瘤细胞的增殖与迁移

目的探讨LncRNA X失活特异性转录本(XIST)通过miR-140-3p/程序性死亡配体-1(PD-L1)轴对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、迁移的影响。方法以2015年至2017年期间我科室收治的40例DLBCL患者的淋巴结活检组织标本,以及人DLBCL细胞系OCI-LY19、SU-DHL-4、U2932为研究对象,qRT-PCR检测XIST表达,分析XIST表达与DLBCL患者临床病理特征的关系;利用LipofectamineTM2000转染试剂对U2932细胞进行转染,分组为:空白组、miR-NC组、miR-140-3p mim⁃ics组、OE-NC组、OE-XIST组、OE-PD-L1组、OE-XIST+miR-NC组、OE-XIST+miR-140-3p mimics组、OE-XIST+si-NC组、OEXIST+si-PD-L1组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-140-3p及XIST表达水平;MTT法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验检测各组细胞迁移情况;双荧光素酶报告基因检测实验分别验证XIST与miR-140-3p、miR-140-3p与PD-L1的靶向关系;West⁃ern blot检测各组细胞中PD-L1蛋白表达。结果XIST在DLBCL组织和细胞OCI-LY19、SU-DHL-4、U2932中高表达,且U2932细胞中XIST的表达水平最高,因此后续实验以U2932细胞为研究对象;XIST的表达与DLBCL患者的Hans分型有关,而与DLBCL患者的性别、年龄、Ann Arbor分期、国际预后指数(IPI)评分无关;XIST靶向负调控miR-140-3p的表达,miR-140-3p靶向负调控PD-L1的表达,XIST正向调控PD-L1的表达;与空白组、OE-NC组比较,OE-PD-L1组细胞中PD-L1蛋白、OD490nm值(24、48、72 h)、迁移细胞数目显著升高(P<0.05);与OE-XIST组和OE-XIST+miR-NC组比较,OE-XIST+miR-140-3p mimics组中miR-140-3p表达水平显著升高,PD-L1蛋白表达水平、细胞增殖能力及迁移细胞数目显著降低(P<0.05);与OE-XIST组和OE-XIST+si-NC组比较,OE-XIST+si-PD-L1组中miR-140-3p表达水平无显著变化,而PD-L1蛋白表达水平、细胞增殖能力及迁移细胞数目显著降低(P<0.05)。结论LncRNA XIST通过靶向调控miR-140-3p/PD-L1轴促进DLBCL细胞增殖与迁移。

丙型肝炎病毒特异性锤头样核酶体外转录及切割活性的初步研究

目的 研究针对丙型肝炎病毒 (HCV)特异性锤头样核酶 (Rz)的体外转录及切割活性。方法 设计 3种锤头样核酶 :Rz1、Rz2 分别作用于HCVRNA 5′ 非编码区 (5′ NCR)上核酸序列 136～16 0、313～ 337,Rz3 作用于核心 (C)区上核酸序列 373～ 388。为区别于反义核酸的封闭作用 ,设计在Rz3 的催化环上存在点变异 (G取代A)的变异核酶Rzm用作对照。体外转录出靶HCVRNA和核酶RNA ,在一定条件下 ,将3 2 P标记的靶HCVRNA与核酶RNA按不同浓度比例进行切割反应 ,电泳后放射自显影 ,通过同位素扫描成像分析仪分析来评价核酶切割效率。结果 除Rzm外 ,在生理温度下 ,3种核酶均有活性 ,并随核酶浓度增加而提高 ;核酶切割靶位点距HCV起始密码子近切割效率高。结论 设计并观察到体外具有HCV特异性切割活性的锤头样核酶 。

人内皮抑素endostatin基因的融合表达纯化及活性测定

目的:获得有活性的人内皮抑素(endostatin)融合蛋白. 方法:从人胎肝组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出endostatin基因,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,纯化,MTT法测定endostatin蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞的抑制活性. 结果:RT-PCR获得endostatin基因,扩增产物在10 g/L 琼脂糖凝胶上显示为1条扩增条带,约573 bp,与预计大小一致.将PCR产物连入PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆经KpnⅠ,NotⅠ酶切鉴定、测序验证.构建pTRX-endo表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3)中的表达,经SDS-PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,大小与预期相符合.重组蛋白经纯化,MTT 法测定重组人内皮抑素蛋白具有生物学活性.人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)受到明显抑制,具有剂量依赖抑制关系,ED50=550μg/L. 结论:人内皮抑素基因在原核细胞表达载体pTRX中获得成功表达,表达蛋白能够抑制人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)的增殖.

长片段非编码RNA XIST可改变人鼻咽癌HNE1细胞对顺铂的耐药性

目的明确长片段非编码RNA(lncRNA)X失活特异性转录本(XIST)对人鼻咽癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能的机制。方法通过荧光定量PCR检测人鼻咽癌顺铂耐药HNE1细胞株(HNE1/DDP)中XIST的表达特征。采用MTT试验观察XIST上调和下调对HNE1/DDP细胞DDP耐药性的影响,并通过EdU试验和流式细胞技术观察其对HNE1/DDP细胞增殖和凋亡的影响。采用蛋白质印迹法检测XIST上调和下调对促凋亡因子程序性细胞死亡4(PDCD4)和Fas配体(Fas-L)蛋白表达的影响。结果 XIST在HNE1/DDP细胞的表达量显著高于HNE1细胞(0.57±0.06 vs 0.1±0.02,P<0.05)。下调XIST的表达显著降低HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性(P<0.05),而上调XIST增加对DDP的耐药性(P<0.05)。下调XIST的表达显著降低HNE1/DDP细胞增殖(6.17±1.93 vs 16.59 4.86, P<0.05)并诱导细胞凋亡[(18.04±4.72)%vs(4.22±1.65)%, P<0.05],而上调XIST增加细胞增殖(25.40±7.21 vs 13.16±3.95, P<0.05)并抑制细胞凋亡[(2.82±0.88)%vs(6.46±1.75)%, P<0.05]。下调XIST的表达显著增加HNE1/DDP细胞中PDCD4(4.10±0.42 vs 1.0±0.12, P<0.05和Fas-L(3.07 0.29 vs 1.0±0.14, P<0.05)蛋白的表达,而上调XIST降低PDCD4(0.36±0.11 vs 1.0±0.18, P<0.05)和Fas-L(0.17±0.09 vs 1.0±0.21, P<0.05)蛋白的表达。结论 XIST在HNE1/DDP细胞中表达升高,下调和上调XIST的表达可分别降低和增加HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与PDCD4和Fas-L蛋白表达改变相关。