长链非编码RNA X染色体失活特异转录物和微小RNA-146-5p在甲状腺癌中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录物(XIST)、微小RNA-146-5p(miR-146-5p)的表达及其诊断价值。方法选取甲状腺癌患者92例为研究对象,均行手术切除术,术中收集甲状腺癌组织和癌旁正常组织。分析LncRNA XIST、miR-146-5p水平与患者临床病理特征之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估LncRNA XIST、miR-146-5p单独及联合对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达水平为(0.65±0.17),低于癌旁组织的(1.02±0.18),miR-146-5p表达水平为(2.56±0.87),高于癌旁组织的(1.07±0.25),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期、发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者肿瘤组织中LncRNA XIST表达水平低于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,miR-146-5p表达水平高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,LncRNA XIST、miR-146-5p二者联合诊断甲状腺癌的曲线下面积(AUC)大于LncRNA XIST、miR-146-5p单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达下调,miR-146-5p表达上调,二者与临床分期、颈部淋巴结转移有关,并对甲状腺癌有一定的诊断价值。

RNA与X染色体失活的后成调节

生物体内，由于性别的差异，两性细胞中的Ｘ染色体数目不同。为了平衡具有不同Ｘ染色体数目的细胞中Ｘ连锁基因的表达量，生物体在进化过程中引入了剂量补偿机制（ｄｏｓａｇｅｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ）。在线虫中，两性体的染色体浓缩和分离与一组蛋白复合体有关，这组...

Xist lncRNA介导X染色体失活及应用研究进展

在哺乳动物胚胎发育过程中,雌性胚胎细胞中一条X染色体转录沉默,导致两性间的剂量补偿称为X染色体失活(X chromosome inactivation,XCI)。X染色体失活中心(X chromosome inactivation center,XIC)是XCI的主要调控区域,X-非活性特异性转录物(X-inactive specific transcript,Xist)位于该区域中且是XCI的关键部分。Xist长链非编码RNA(long chain non-coding RNA,lncRNA)是一种非活性的特异性转录物,能够招募如RNA互作结合蛋白(RNA interaction binding protein,RBP)、染色质修饰因子等一系列辅助因子,促使染色体和细胞核空间结构、染色质组成及X连锁基因转录水平发生改变,从而将有活性的染色体转化为无活性的染色体。对小鼠、人及其他物种研究显示,XCI普遍存在于哺乳动物胚胎发育中,是胚胎存活的基础,然而不同物种胚胎中却存在一些特异性差异。此外,癌症、肿瘤等一些人类疾病也与XCI有关。目前关于XCI机制研究比较零散,作者就Xist lncRNA介导XCI的主要分子机理、调控机制及在不同物种中的研究进行概述。

甲基化特异性PCR检测FMR1和XIST基因甲基化实验方法的建立

建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因(fragile X mental retardation,FMR1)、X染色体失活基因(Xchromosome inactivation,XIST)甲基化的方法.用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰.以修饰后的DNA为模板,用两套不同的引物对:1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因(CGG)n重复序列区、FMR1和XIST基因的启动子区.PCR产物进一步克隆、测序.以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板进行PCR扩增后的产物与预期基因目的基因片段大小相符合,无非特异性扩增产物.测序结果表明,FMR1、XIST基因中的非甲基化的C碱基转变为U碱基,而CpG岛被甲基化的C碱基不改变.成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的方法,为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法.

血清miR-98-5p、LncRNA XIST在急性呼吸窘迫综合征患儿中与疾病严重程度、预后的关系

目的:检测急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清中微小RNA(miR)-98-5p、长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异性转录因子(XIST)表达情况,并探究二者与疾病严重程度、预后的关系。方法:收集86例ARDS患儿为研究对象(研究组),同期健康体检儿童90名设为对照(对照组),参考柏林(2012年)ARDS病情严重程度诊断标准中动脉血氧分压/吸入氧浓度将ARDS患儿分为轻度组、中度组、重度组;另根据ARDS患儿28 d生存状况分为存活组和死亡组。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测血清miR-98-5p、LncRNA XIST水平,绘制受试者工作特性(ROC)曲线分析血清中miR-98-5p、LncRNA XIST水平对ARDS患儿预后不良的预测价值;Kaplan-Meier生存曲线分析血清miR-98-5p、LncRNA XIST水平与ARDS患儿预后的关系;Pearson分析ARDS患儿血清中miR-98-5p与LncRNA XIST的相关性。结果:与对照组相比,研究组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.01),LncRNA XIST水平升高(P<0.01)。与轻度组相比,中度组、重度组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.05),LncRNA XIST水平升高(P<0.05);与中度组相比,重度组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.05),LncRNA XIST水平升高(P<0.05)。与存活组相比,死亡组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.01),LncRNA XIST水平升高(P<0.01)。ROC曲线显示,血清中miR-98-5p、LncRNA XIST水平预测ARDS患儿预后不良的ROC曲线下面积分别为0.771、0.764,截断值分别为0.54、1.97,其敏感性分别为76.1%、86.9%,特异性分别为73.7%、52.6%;血清中miR-98-5p联合LncRNA XIST预测ARDS患儿预后不良的ROC曲线下面积为0.888,其敏感性为77.6%、特异性为94.7%。miR-98-5p高表达者存活率35.14%高于低表达者12.24%(P<0.05),LncRNA XIST高表达存活率12.73%低于低表达者38.71%(P<0.01)。Pearson分析发现ARDS患儿血清中miR-98-5p与LncRNA XIST呈负相关关系(r=-0.411,P<0.05)。Starbase3.0预测发现LncRNA XIST与miR-98-5p存在结合位点。结论:ARDS患儿血清中miR-98-5p水平降低、LncRNA XIST水平升高,二者均与疾病严重程度、预后关系密切,且二者呈显著负相关,有望用于评估ARDS疾病严重程度、预后。

子宫肌瘤患者血清lncRNA MIAT和lncRNA XIST的表达及临床意义

目的 检测子宫肌瘤患者血清长链非编码RNA(lncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)、lncRNA X染色体失活特异转录本(XIST)的水平,并探究二者与子宫肌瘤的关系以及对子宫肌瘤的诊断价值。方法 选取2018年5月至2022年5月在张家口市妇幼保健院就诊的120例子宫肌瘤患者作为子宫肌瘤组,选择同时期在本院进行体检的120例健康体检者作为对照组。比较两组研究对象的基线资料;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测两组研究对象血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平;Pear?son相关性分析子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT与lncRNA XIST表达水平的相关性;多因素logistic回归分析子宫肌瘤患病的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST对子宫肌瘤的诊断价值。结果 两组研究对象肌瘤最大径、肌瘤数目、有无乳腺增生、流产次数、有无妇科疾病比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,子宫肌瘤组血清中ln?cRNA MIAT、lncRNA XIST水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);肌瘤最大径≥5 cm、肌瘤数目≥2个、有乳腺增生、流产次数≥2次、有妇科疾病的子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平明显高于肌瘤最大径<5 cm、肌瘤数目<2个、无乳腺增生、流产次数<2次、无妇科疾病的子宫肌瘤患者,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平呈正相关(r=0.468,P<0.001);多因素logistic回归分析结果显示,lncRNA MIAT≥1.45(OR=1.678,95%CI:1.342~2.098)、lncRNA XIST≥1.35(OR=1.315,95%CI:1.033~1.673)是子宫肌瘤发生的危险因素(P<0.05);血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST诊断子宫肌瘤的曲线下面积(AUC)分别为0.817、0.776,特异度分别为91.7%、86.7%,灵敏度分别为62.5%、71.7%,截断值分别为1.45、1.35,两者联合诊断子宫肌瘤的AUC为0.846,特异度为97.5%,灵敏度为61.2%。结论 子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平升高,二者与子宫肌瘤发生密切相关,二者联合对子宫肌瘤具有较高的辅助诊断价值。

LncRNA XIST和miR-101-3p在SLE患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值

目的分析长链非编码RNA(Lnc RNA)X染色体失活特异转录本(XIST)和微小RNA-101-3p(mi R-101-3p)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值。方法选取2019年4月至2021年10月在新乡市中心医院治疗的180例SLE患者作为观察组,选择同期180例健康体检者作为对照组。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将观察组分为稳定期组80例和活动期组100例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法对患者外周血单核细胞中Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的相对表达水平进行检测。分析Lnc RNA XIST与mi R-101-3p的相关性以及二者与SLEDAI评分的相关性;对影响SLE的因素进行logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的表达对SLE的诊断价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组患者较稳定期组外周血单核细胞中Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST与mi R-101-3p水平呈负相关(r=-0.410,P<0.05);Lnc RNA XIST水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.425,P<0.05),mi R-101-3p水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.454,P<0.05);logistic回归分析显示,Lnc RNA XIST是影响SLE的危险因素(P<0.05),mi R-101-3p是影响SLE的保护因素(P<0.05);Lnc RNA XIST、mi R-101-3p联合诊断SLE的ROC曲线下面积为0.960,均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Ln-c RNA XIST)=3.268,P=0.001;Z_(二者联合-mi R-101-3p)=2.584,P=0.005)。结论SLE患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,与SLE疾病活动性有关,对SLE具有一定的诊断价值。

长链非编码RNA X型染色体失活特异转录物在新疆哈萨克族2糖尿病患者外周血单个核细胞中的表达及与胰岛β细胞功能的关系

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录物(LncRNA XIST)在T2DM患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及与胰岛β细胞功能的关系。方法收集新疆哈萨克族健康人群与T2DM患者外周静脉血行高通量测序筛选出差异性表达的LncRNA,选取新疆哈萨克族T2DM患者(T2DM组,n=30)及体检健康人群(NC组,n=30),测量身高、体重、WC、臀围、SBP、DBP,检测FPG、HbA_(1)c、FIns、TG、TC、HDL-C、LDL-C、血尿酸、BUN、血肌酐,计算BMI、WHR、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数及胰岛素敏感指数;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测受试者PBMC中LncRNA XIST表达水平。结果qRT-PCR检测结果显示,LncRNA XIST在T2DM组PBMC中的表达水平是NC组的3.75倍(P<0.05)。Pearson相关分析显示,新疆哈萨克族T2DM患者Lnc XIST基因表达水平与HOMA-IR呈正相关(P<0.05),与FIns呈负相关(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,Lnc XIST的ROC曲线下面积为0.692(95%CI0.558~0.826,P<0.05)。结论新疆哈萨克族T2DM患者Lnc XIST基因表达水平与胰岛β细胞功能和IR有关;PBMC中LncRNA XIST表达升高可能参与新疆哈萨克族T2DM。

非小细胞肺癌长链非编码RNA X染色体失活特异转录本研究进展

肺癌又称原发性支气管癌,是起源于支气管黏膜或腺体的最常见的肺部原发性恶性肿瘤。依据组织病理类型,肺癌可分为小细胞癌(SCLC)和非小细胞癌(NSCLC)。NSCLC约占肺癌的85%,其发病机制目前尚不清楚。本研究就长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)参与NSCLC进展可能的机制进行综述,以期对深入研究NSCLC发生发展的机制提供新的思路。2016-01-01-2020-12-31检索PubMed、万方和中国知网数据库相关文献,纳入标准:lncRNA XIST参与NSCLC进展相关文献。排除标准:综述类文献;不同期刊重复发表文献。最终纳入38篇文献进行分析。lncRNA XIST是早期发现的lncRNAs之一,可调控机体多种生理病理学过程。目前,越来越多的研究结果表明,lncRNA XIST与NSCLC细胞的增殖、凋亡、上皮间质转化、表观遗传和耐药密切相关。lncRNA XIST诱导产生的miR-140依赖性的p53凋亡抑制蛋白(iASPP)可促进肿瘤的生长和耐药;而下调lncRNA XIST可促进活性氧(ROS)产生和核苷酸结合寡聚结构域含亮氨酸重复序列和含Pyrin结构域3(NLRP3)炎性小体激活,进而引起细胞焦亡;此外,lncRNA XIST可以增加RING1表达并增强Wnt/β-catenin信号通路表达促进NSCLC细胞分裂、转移和侵袭;lncRNA XIST还可通过表观遗传机制抑制Kruppel样因子2(KLF2)表达促进癌细胞增殖、迁移和侵袭;有趣的是,下调lncRNA XIST后可抑制多耐药基因(MDR1)和多耐药相关蛋白(MRP1)表达进而影响细胞耐药。因此,探索lncRNA XIST对肺癌发生发展的作用机制对NSCLC进入分子靶向治疗的新时代具有重要意义。

长链非编码RNA XIST在系统性红斑狼疮患者外周血CD4+T细胞表达降低并与疾病活动度负相关

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X连锁X染色体特异性失活转录本(XIST)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+细胞亚群中的表达,并分析其临床意义。方法募集50例SLE患者和30例健康人,比较SLE组和健康对照组CD4+T细胞中XIST表达情况。根据系统性红斑狼疮疾病活动度指数(SLEDAI)评分情况将50例SLE患者分为稳定期SLE组(SLEDAI评分<5分,n=19)和活动期SLE组(SLEDAI评分≥5分,n=31)。比较稳定期SLE组和活动期SLE组CD4+T细胞中XIST表达情况。分析活动期SLE患者CD4+T细胞中XIST表达水平与SLEDAI的相关性。根据是否合并狼疮肾炎,将31例活动期SLE患者分为无合并狼疮肾炎组(n=17)和合并狼疮肾炎组(n=14),比较两组CD4+T细胞中XIST表达情况。绘制CD4+T细胞中XIST诊断SLE和合并狼疮肾炎的受试者工作特征(ROC)曲线。结果与健康对照组相比,SLE组CD4+T细胞XIST表达显著降低。与稳定期SLE组相比,活动期SLE组CD4+T细胞中XIST表达显著降低。相关性分析显示,活动期SLE患者CD4+T细胞中XIST表达水平与SLEDAI评分呈负相关。活动期SLE患者中,与无合并狼疮肾炎组相比,合并狼疮肾炎组CD4+T细胞中XIST表达显著降低。ROC曲线结果显示,CD4+T细胞中XIST在诊断SLE及是否合并狼疮肾炎中具有良好效能。结论SLE患者CD4+T细胞中XIST表达显著降低,其表达水平与疾病活动度密切相关,而且在诊断SLE及SLE合并狼疮肾炎方面具有良好效能。

lncRNA XIST调控miR-92a/Smad7对急性脑梗死大鼠神经功能的影响

目的探讨长链非编码RNA染色体X失活特异转录物(lncRNA XIST)对微小核糖核酸(miR)-92a/信号转导分子(Smad)7轴的调控作用及对急性脑梗死(ACI)大鼠神经功能损伤的影响。方法90只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、ad-XIST组(尾静脉注射含lncRNA XIST过表达腺病毒的载体溶液)、ad-NC组(尾静脉注射不含lncRNA XIST过表达腺病毒的空载体溶液)、si-miR-92a组(尾静脉注射含miR-92a低表达序列的腺病毒载体)、si-NC组(尾静脉注射不含miR-92a低表达序列的空载体腺病毒溶液),每组15只。Longa法测定大鼠神经功能变化;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定脑梗死面积;尼氏及TUNEL法测定海马神经元形态变化及凋亡状况;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定海马组织lncRNA XIST、miR-92a mRNA表达;免疫组化法测定Smad7阳性表达水平。取小鼠原代海马神经元细胞,用连二亚硫酸钠诱导建立海马神经元缺血模型,随机分为对照组、模型组、si-XIST组、si-NC组、si-miR-92a组、si-NC-a组、si-XIST+si-miR-92a组,用噻唑蓝(MTT)法测定海马神经元增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-qPCR法检测各组细胞lncRNAXIST、miR-92a表达;Western印迹法检测Smad7、核转录因子(NF)-κB、磷酸化(p)-NF-κB、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果上调lncRNA XIST或沉默miR-92a,均可明显缓解ACI大鼠神经功能缺损、明显降低脑梗死面积、明显缓解海马神经元凋亡及坏死、明显上调海马组织神经元细胞胞质中Smad7阳性表达水平(P<0.05)。用连二亚硫酸钠+低糖培养可促进体外培养的海马神经元细胞凋亡并抑制其增殖(P<0.05),成功复制缺氧缺糖凋亡模型。下调lncRNA XIST可进一步促进海马神经元细胞凋亡,并促进miR-92a和促凋亡相关蛋白表达(P<0.05)。沉默miR-92a可逆转lncRNA XIST下调引起的海马神经元凋亡(P<0.05)。结论lncRNA XIST与miR-92a之间存在靶向负调控作用,上调lncRNA XIST,可靶向抑制miR-92a转录活化,进而上调Smad7表达,抑制NF-κB介导的凋亡途径活化,缓解ACI大鼠神经功能缺损及海马神经元凋亡。

LncRNA XIST调节miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞增殖、迁移及成骨分化的影响

目的探讨长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)调控miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞(hOB)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法将hOB细胞分为ctrl组、pcDNA组、pcDNA-XIST组、pcDNA-XIST+miR-NC组、pcDNA-XIST+miR-545-3p mimic组;qRT-PCR检测细胞中XIST、miR-545-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞中SMAD5、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)蛋白及细胞核中p-SMAD5蛋白表达;茜素红S染色检测矿化结节形成;双荧光素酶报告基因实验分别验证XIST和miR-545-3p、miR-545-3p和SMAD5的关系。结果与ctrl组、pcDNA组比较,pcDNA-XIST组hOB细胞中XIST表达、OD_(450)值(48、72 h)、划痕愈合率、SMAD5、ALP、Runx2、OCN蛋白及核p-SMAD5蛋白表达升高,miR-545-3p表达降低,矿化结节形成增多(P<0.05);上调miR-545-3p减弱了过表达XIST对hOB细胞增殖、迁移及成骨分化的促进作用;XIST靶向负调控miR-545-3p表达,miR-545-3p靶向调控SMAD5表达。结论过表达XIST可能通过海绵化miR-545-3p来上调SMAD5表达,进而促进hOB细胞增殖、迁移及成骨分化。

结肠癌组织中lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2的表达变化及临床意义

目的观察结肠癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异性转录本基因(XIST)、微小RNA(miR)-32-5p、基因增强子的人类同源基因(EZH2)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测86例结肠癌组织和癌旁组织中的lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2,分析lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2表达与患者临床病理特征的关系,采用Pearson线性相关分析三者之间的相关性。结果与癌旁组织相比,结肠癌组织中lncRNA XIST、EZH2表达高,而miR-32-5p表达低(P均<0.05)。结肠癌组织中lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2表达与肿瘤分期有关(P均<0.05)。结肠癌组织中lncRNA XIST与miR-32-5p的表达呈负相关(r=-0.612,P<0.01),miR-32-5p与EZH2的表达呈负相关(r=-0.608,P<0.01)。结论结肠癌组织中lncRNA XIST、EZH2表达升高,而miR-32-5p表达降低,均与肿瘤分期有关,有可能成为新的结肠癌肿瘤标志物。

宫颈癌组织长链非编码RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表达变化及其意义

目的观察宫颈癌组织长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录子(XIST)、小分子RNA miR-101-3p表达变化,并探讨其临床意义。方法选取91例宫颈癌患者的宫颈癌组织标本为观察组,癌旁正常组织(距离宫颈癌组织>5cm且经病例检查证实为正常组织)标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组标本中的XIST、miR-101-3p表达,并分析其与宫颈癌临床病理参数的关系。结果观察组、对照组XIST表达量分别为8.97±3.56、7.01±3.82,miR-101-3p表达量分别为8.24±4.22、10.15±3.97。观察组XIST表达量高于对照组(P<0.05),miR-101-3p表达量低于对照组(P<0.05)。Pearson积矩相关分析结果显示宫颈癌组织miR-101-3p、XIST表达量呈负相关性(r=-0.716,P<0.05)。肿瘤最大径≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-101-3p表达量分别低于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的宫颈癌组织(P均<0.05),XIST表达量分别高于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移宫颈癌组织(P均<0.05)。结论宫颈癌组织XIST表达升高、miR-101-3p表达降低。检测宫颈组织XIST、miR-101-3p有助于宫颈癌的病情判断。

沉默XIST对结直肠癌细胞阿霉素耐药性的抑制作用及其机制

目的:探讨X染色体失活特异转录物(XIST)在结直肠癌(CRC)细胞对阿霉素(又称多柔比星,DOX)耐药中的作用及其可能的分子机制。方法:通过DOX浓度递增处理CRC细胞LoVo和HCT116,获得DOX耐药细胞LoVo/DOX和HCT116/DOX。采用RT-qPCR检测XIST和微小RNA-124(miR-124)在DOX耐药CRC细胞中的表达;转染XIST小干扰RNA(si-XIST)后,通过Western blot检测LoVo/DOX细胞和HCT116/DOX细胞中P-糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)的蛋白水平。通过萤光素酶报告基因实验来证明XIST与miR-124的相互作用。转染miR-124、si-XIST或si-XIST+anti-miR-124后,通过Western blot检测LoVo/DOX细胞和HCT116/DOX细胞中P-gp和GST-π的蛋白水平。结果:在DOX耐药CRC细胞中,XIST表达上调(P<0.05),miR-124表达下调(P<0.05)。XIST沉默显著降低DOX耐药CRC细胞中的P-gp和GST-π蛋白水平(P<0.05)。萤光素酶报告基因实验结果显示,XIST存在miR-124结合区域。转染miR-124显著降低DOX耐药CRC细胞中P-gp及GST-π蛋白水平(P<0.05);而转染anti-miR-124则可逆转由XIST沉默导致的DOX耐药CRC细胞的P-gp及GST-π的降低(P<0.05)。结论:在DOX耐药CRC细胞中,沉默XIST可能通过调节miR-124来抑制DOX的耐药性。

急性冠脉综合征患者血清LncRNA XIST和miR-330-3p水平表达与心脏自主神经功能的相关性研究

目的检测急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清长链非编码RNA X染色体失活特异转录物(LncRNA X inactivate-specific transcript,LncRNA XIST)和微小RNA(miR)-330-3p水平,分析二者与心脏自主神经功能的关系。方法选取2020年2月~2021年6月在华北石油管理局总医院诊断为ACS的患者156例,包括不稳定型心绞痛(unstable angina,UA)80例(UA组)和急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)76例(AMI组);另选取同期体检健康者100例作为对照组。实时荧光定量PCR法检测受试者血清LncRNA XIST和miR-330-3p水平;24 h动态心电图检测受试者心率变异性(heart rate variability,HRV)时域指标[包括:24 h内正常R-R间期标准差(SDNN)、每5 min R-R间期平均值的标准差(SDANN)、每5 min R-R间期标准差的平均值(SDNN index)、相邻R-R间期之差的均方根(RMSSD)及相邻R-R间期相差>50 ms心搏数占总心搏数的百分比(PNN50)]以及Pearson法分析ACS患者血清LncRNA XIST和miR-330-3p水平与HRV时域指标的相关性。结果与对照组比较,UA组和AMI组血清LncRNA XIST(1.37±0.26,1.69±0.31 vs 1.09±0.22)水平升高(F=113.587,P=0.000),miR-330-3p(0.82±0.15,0.53±0.12 vs 1.03±0.18)及SDANN(115.96±19.57 ms,98.96±16.57 ms vs 133.43±21.01 ms),SDNN(113.84±15.26 ms,101.84±11.22 ms vs 136.41±31.53 ms),SDNN index(54.68±6.72 ms,46.73±5.14 ms vs 64.68±10.64 ms),RMSSD(27.48±5.62 ms,21.37±3.64 ms vs 36.48±8.62 ms)和PNN50(7.58%±2.83%,4.18%±1.13%vs 10.72%±3.21%)水平均降低(F=54.923~225.201,均P=0.000),差异均有统计学意义。与UA组比较,AMI组血清LncRNA XIST水平升高(t=10.792,P<0.05),miR-330-3p及SDANN,SDNN,SDNN index,RMSSD和PNN50水平降低,差异有统计学意义(t=4.743~16.538,均P<0.05);ACS患者血清LncRNA XIST与SDNN index,RMSSD和PNN50呈负相关(r=-0.465,-0.532,-0.542,均P<0.05);miR-330-3p与SDNN index,RMSSD和PNN50呈正相关(r=0.471,0.562,0.561,均P<0.05)。结论ACS患者血清LncRNA XIST水平升高,miR-330-3p水平降低,与心脏自主神经功能有关,可作为防治ACS的重要靶点。

多功能转录因子CTCF研究进展

CTCF是一种多功能的真核转录因子,它可以抑制c-myc基因的表达,增强app基因的启动子活性,调控H19/Igf2的印记,作为鸡β-球蛋白等多个基因结构域的绝缘子成分,以及作为X染色体失活的候选蛋白等。CTCF与BORIS的交互表达和雄性生殖细胞的系统发生有关。CTCF的缺失和突变可能导致肿瘤的发生。

lncRNA XIST和miR-124在支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中表达关系研究

目的检测支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中长链非编码RNA X染色体失活特异性转录本(lncRNA XIST)、微小RNA-124(miR-124)表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2020年1月至2021年3月因支气管哮喘于河南大学第一附属医院门诊及病房接受治疗168例患儿,其中急性发作期82例(急性发作组)、缓解期86例(缓解组);同期选取84例健康体检儿童作为对照组。实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中lncRNA XIST、miR-124水平,肺功能仪检测肺功能指标第一秒用力呼气量(FEV1),酶联免疫吸附法检测炎症因子白细胞介素(IL)-17、IL-1β、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Pearson法分析支气管哮喘患儿lncRNA XIST、miR-124与肺功能指标、炎症因子水平相关性。结果与对照组比较,缓解组、急性发作组lncRNA XIST及IL-17、IL-1β、TNF-α水平升高,miR-124、FEV1、IL-10水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与缓解组比较,急性发作组lncRNA XIST及IL-17、IL-1β、TNF-α水平升高,miR-124、FEV1、IL-10水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。支气管哮喘患儿外周血单个核细胞lncRNA XIST与miR-124水平呈负相关(r=-0.668,P<0.001)。支气管哮喘患儿lncRNA XIST与IL-17、IL-1β、TNF-α呈正相关(P<0.05),与FEV1、IL-10呈负相关(P<0.05);miR-124与FEV1、IL-10呈正相关(P<0.05),与IL-17、IL-1β、TNF-α呈负相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患儿外周血单个核细胞lncRNA XIST高表达,miR-124低表达,二者可能参与支气管哮喘疾病的发生发展。

lncRNA XIST靶向miR-15b-5p调控细胞凋亡及自噬参与帕金森病发病机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)对帕金森病(PD)的潜在分子机制。方法用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导建立PD模型。用爬杆和转棒法检测小鼠行为变化。四甲基偶氮唑盐法和流式细胞术检测人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)活力和凋亡。双荧光素酶报告基因法、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot、免疫组化探讨lncRNA XIST在PD中的分子机制。结果PD体内外模型XIST表达上调,miR-15b-5p表达下调。沉默XIST(si-XIST)可缩短小鼠准备向下爬行的时间,延长停留时间。此外,si-XIST也可增加酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元数。miR-15b-5p是XIST的靶基因。结论si-XIST可通过调控miR-15b-5p抑制PD的自噬和凋亡。

LncRNA XIST通过调控miR-140-3p/PD-L1轴促进弥漫大B细胞淋巴瘤细胞的增殖与迁移

目的探讨LncRNA X失活特异性转录本(XIST)通过miR-140-3p/程序性死亡配体-1(PD-L1)轴对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、迁移的影响。方法以2015年至2017年期间我科室收治的40例DLBCL患者的淋巴结活检组织标本,以及人DLBCL细胞系OCI-LY19、SU-DHL-4、U2932为研究对象,qRT-PCR检测XIST表达,分析XIST表达与DLBCL患者临床病理特征的关系;利用LipofectamineTM2000转染试剂对U2932细胞进行转染,分组为:空白组、miR-NC组、miR-140-3p mim⁃ics组、OE-NC组、OE-XIST组、OE-PD-L1组、OE-XIST+miR-NC组、OE-XIST+miR-140-3p mimics组、OE-XIST+si-NC组、OEXIST+si-PD-L1组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-140-3p及XIST表达水平;MTT法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验检测各组细胞迁移情况;双荧光素酶报告基因检测实验分别验证XIST与miR-140-3p、miR-140-3p与PD-L1的靶向关系;West⁃ern blot检测各组细胞中PD-L1蛋白表达。结果XIST在DLBCL组织和细胞OCI-LY19、SU-DHL-4、U2932中高表达,且U2932细胞中XIST的表达水平最高,因此后续实验以U2932细胞为研究对象;XIST的表达与DLBCL患者的Hans分型有关,而与DLBCL患者的性别、年龄、Ann Arbor分期、国际预后指数(IPI)评分无关;XIST靶向负调控miR-140-3p的表达,miR-140-3p靶向负调控PD-L1的表达,XIST正向调控PD-L1的表达;与空白组、OE-NC组比较,OE-PD-L1组细胞中PD-L1蛋白、OD490nm值(24、48、72 h)、迁移细胞数目显著升高(P<0.05);与OE-XIST组和OE-XIST+miR-NC组比较,OE-XIST+miR-140-3p mimics组中miR-140-3p表达水平显著升高,PD-L1蛋白表达水平、细胞增殖能力及迁移细胞数目显著降低(P<0.05);与OE-XIST组和OE-XIST+si-NC组比较,OE-XIST+si-PD-L1组中miR-140-3p表达水平无显著变化,而PD-L1蛋白表达水平、细胞增殖能力及迁移细胞数目显著降低(P<0.05)。结论LncRNA XIST通过靶向调控miR-140-3p/PD-L1轴促进DLBCL细胞增殖与迁移。