前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基...前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基因质粒pNF-κB-Luc和HBXIP真核表达载体pcDNA3-hbxip导入人肝癌H7402细胞系中,进行荧光素酶活性分析.结果显示:H7402细胞过表达HBXIP后NF-κB的转录活性明显增强;此外,基因转染后经免疫印迹检测显示,与NF-κB二聚体结合的抑制亚基IκBα的磷酸化水平明显增加;同时,提取H7402细胞的核蛋白,然后应用免疫印迹检测细胞核中p65/NF-κB的水平.结果显示,H7402细胞中HBXIP过表达后细胞核中p65/NF-κB的水平明显增加.当应用RNA干扰技术抑制了细胞内源性的HBXIP基因表达后,则出现与上述结果相反的效果.上述结果提示,HBXIP可增加核内p65/NF-κB蛋白水平,进而发挥NF-κB促转录调控的作用.因此,HBXIP可通过调控NF-κB信号途径而促进细胞增殖.展开更多
乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)可以调节乳腺癌中糖代谢重编程.为了研究HBXIP在生理条件下对糖代谢的调节作用及机制,本研究利用Cre/lox P重组酶系统成功构建了肝脏组织中HBXIP特异敲除小鼠.当小鼠接...乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)可以调节乳腺癌中糖代谢重编程.为了研究HBXIP在生理条件下对糖代谢的调节作用及机制,本研究利用Cre/lox P重组酶系统成功构建了肝脏组织中HBXIP特异敲除小鼠.当小鼠接受刺激后,与正常组小鼠相比,肝脏HBXIP敲除小鼠表现基础糖代谢功能异常,如葡萄糖、丙酮酸;相对于对照小鼠,肝脏HBXIP敲除小鼠对糖异生和胰岛素耐受性减弱. RT-PCR、Western blot实验和免疫组化实验结果表明,HBXIP敲除小鼠肝脏组织中糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)表达显著增加. QRT-PCR分析30例临床肝组织中HBXIP m RNA和PEPCK m RNA表达水平发现,HBXIP与PEPCK表达水平呈负相关.荧光素酶报告基因实验和Ch IP实验结果表明HBXIP可以在基因转录水平调节PEPCK表达.以上结果表明,HBXIP通过调节糖异生关键酶PEPCK的表达参与调控小鼠肝脏糖异生.展开更多
乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.HBx具有促进肝癌迁移的作用,但其作用的分子机制不清.本研究对HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了探讨.伤口愈合和Boyden’s chamber结果表明...乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.HBx具有促进肝癌迁移的作用,但其作用的分子机制不清.本研究对HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了探讨.伤口愈合和Boyden’s chamber结果表明,HBx可明显促进肝癌Hep G2细胞迁移.在稳定转染HBx的Hep G2(Hep G2-X)细胞中转染HBx结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)的RNA干扰片段,可明显抑制HBx的促迁移作用.免疫组化和实时定量PCR结果表明,HBXIP在肝癌组织中显著高表达,并且与HBx表达成正相关.荧光素酶报告基因和免疫印迹结果表明,HBx显著增强HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平.应用HBx的RNA干扰处理Hep G2-X细胞,HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平明显下降.将HBXIP启动子区的c AMP效应元件结合因子(CREB)结合位点突变后,HBx上调HBXIP的作用消失.应用CREB的RNA干扰处理肝癌细胞,在启动子水平和蛋白质水平上,HBx对HBXIP的上调作用被显著抑制.染色质免疫共沉淀结果表明,HBx能够通过CREB结合到HBXIP的启动子上,进而发挥激活HBXIP的功能.本研究结果表明,HBx促进肝癌细胞迁移的作用是通过CREB上调HBXIP实现的.这一发现对进一步揭示HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制具有重要意义.展开更多
目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)对唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)增殖、迁移和侵袭的影响,及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将HBXIP质粒转染到ACC-M中,将细胞分为实验组(转染pEG...目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)对唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)增殖、迁移和侵袭的影响,及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将HBXIP质粒转染到ACC-M中,将细胞分为实验组(转染pEGFP-N1-HBXIP质粒)、对照组1(未转染组)和对照组2(vector组,pEGFP-N1)。采用RT-PCR检测HBXIP在ACC-M中的表达;采用MTT实验、Transwell小室实验和划痕实验检测HBXIP过表达对ACC-M的增殖、迁移和侵袭的影响;Western印迹法检测HBXIP过表达对Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K及S100A4蛋白表达量的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:MTT实验结果显示,实验组中存活的细胞数显著高于对照组(P<0.05);划痕实验结果显示,实验组细胞迁移率显著高于对照组(P<0.01);Transwell小室实验结果显示,实验组细胞侵袭个数显著高于对照组(P<0.01);Western印迹法结果显示,相对于对照组,实验组随着HBXIP过表达,p-Akt、p-PI3K及S100A4表达量相对增高。结论:HBXIP基因过表达ACC-M增殖、迁移和侵袭具有影响,可能通过促进Akt、PI3K磷酸化及S100A4蛋白表达量增加,促进ACC-M的增殖、迁移和侵袭。展开更多
[目的]通过检测黄连素对三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)表达的影响,探讨黄连素抗TNBC的机制。[方法]以MTT法检测不同浓度黄连素对MDA...[目的]通过检测黄连素对三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)表达的影响,探讨黄连素抗TNBC的机制。[方法]以MTT法检测不同浓度黄连素对MDA-MB-231细胞增殖的影响,筛选黄连素的处理浓度。将MDA-MB-231细胞分为对照组、40μmol·L^(-1)黄连素组、60μmol·L^(-1)黄连素组、免疫球蛋白重链结合蛋白诱导剂X(immunoglobulin heavy chain binding protein inducer X,BiX)组,以及BiX联合40μmol·L^(-1)黄连素组、BiX联合60μmol·L^(-1)黄连素组。相应药物处理24h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以Western blot检测细胞GRP78和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。[结果]40μmol·L^(-1)以上浓度的黄连素可剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖。与对照组比较,BiX组细胞凋亡率降低(P<0.05)、GRP78和Bcl-2表达增高(P<0.01,P<0.001)、Bax表达减低(P<0.05)。与BiX组比较,BiX联合40、60μmol·L^(-1)黄连素组细胞凋亡率增加(P<0.01),GRP78和Bcl-2表达减低(P<0.01,P<0.01),Bax表达增加(P<0.01)。[结论]黄连素可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能是通过下调GRP78的表达,从而降低Bcl-2表达,并促进Bax的表达。展开更多
文摘前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基因质粒pNF-κB-Luc和HBXIP真核表达载体pcDNA3-hbxip导入人肝癌H7402细胞系中,进行荧光素酶活性分析.结果显示:H7402细胞过表达HBXIP后NF-κB的转录活性明显增强;此外,基因转染后经免疫印迹检测显示,与NF-κB二聚体结合的抑制亚基IκBα的磷酸化水平明显增加;同时,提取H7402细胞的核蛋白,然后应用免疫印迹检测细胞核中p65/NF-κB的水平.结果显示,H7402细胞中HBXIP过表达后细胞核中p65/NF-κB的水平明显增加.当应用RNA干扰技术抑制了细胞内源性的HBXIP基因表达后,则出现与上述结果相反的效果.上述结果提示,HBXIP可增加核内p65/NF-κB蛋白水平,进而发挥NF-κB促转录调控的作用.因此,HBXIP可通过调控NF-κB信号途径而促进细胞增殖.
基金supported by grants from The National Natural Science Foundation of China(81802856)Natural Science Foundation of Shandong Province(ZR2017BH057)University Science and Technology Planned Projects of Shandong Province(J17KA230)~~
文摘乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)可以调节乳腺癌中糖代谢重编程.为了研究HBXIP在生理条件下对糖代谢的调节作用及机制,本研究利用Cre/lox P重组酶系统成功构建了肝脏组织中HBXIP特异敲除小鼠.当小鼠接受刺激后,与正常组小鼠相比,肝脏HBXIP敲除小鼠表现基础糖代谢功能异常,如葡萄糖、丙酮酸;相对于对照小鼠,肝脏HBXIP敲除小鼠对糖异生和胰岛素耐受性减弱. RT-PCR、Western blot实验和免疫组化实验结果表明,HBXIP敲除小鼠肝脏组织中糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)表达显著增加. QRT-PCR分析30例临床肝组织中HBXIP m RNA和PEPCK m RNA表达水平发现,HBXIP与PEPCK表达水平呈负相关.荧光素酶报告基因实验和Ch IP实验结果表明HBXIP可以在基因转录水平调节PEPCK表达.以上结果表明,HBXIP通过调节糖异生关键酶PEPCK的表达参与调控小鼠肝脏糖异生.
文摘乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.HBx具有促进肝癌迁移的作用,但其作用的分子机制不清.本研究对HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了探讨.伤口愈合和Boyden’s chamber结果表明,HBx可明显促进肝癌Hep G2细胞迁移.在稳定转染HBx的Hep G2(Hep G2-X)细胞中转染HBx结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)的RNA干扰片段,可明显抑制HBx的促迁移作用.免疫组化和实时定量PCR结果表明,HBXIP在肝癌组织中显著高表达,并且与HBx表达成正相关.荧光素酶报告基因和免疫印迹结果表明,HBx显著增强HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平.应用HBx的RNA干扰处理Hep G2-X细胞,HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平明显下降.将HBXIP启动子区的c AMP效应元件结合因子(CREB)结合位点突变后,HBx上调HBXIP的作用消失.应用CREB的RNA干扰处理肝癌细胞,在启动子水平和蛋白质水平上,HBx对HBXIP的上调作用被显著抑制.染色质免疫共沉淀结果表明,HBx能够通过CREB结合到HBXIP的启动子上,进而发挥激活HBXIP的功能.本研究结果表明,HBx促进肝癌细胞迁移的作用是通过CREB上调HBXIP实现的.这一发现对进一步揭示HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制具有重要意义.
文摘目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)对唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)增殖、迁移和侵袭的影响,及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将HBXIP质粒转染到ACC-M中,将细胞分为实验组(转染pEGFP-N1-HBXIP质粒)、对照组1(未转染组)和对照组2(vector组,pEGFP-N1)。采用RT-PCR检测HBXIP在ACC-M中的表达;采用MTT实验、Transwell小室实验和划痕实验检测HBXIP过表达对ACC-M的增殖、迁移和侵袭的影响;Western印迹法检测HBXIP过表达对Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K及S100A4蛋白表达量的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:MTT实验结果显示,实验组中存活的细胞数显著高于对照组(P<0.05);划痕实验结果显示,实验组细胞迁移率显著高于对照组(P<0.01);Transwell小室实验结果显示,实验组细胞侵袭个数显著高于对照组(P<0.01);Western印迹法结果显示,相对于对照组,实验组随着HBXIP过表达,p-Akt、p-PI3K及S100A4表达量相对增高。结论:HBXIP基因过表达ACC-M增殖、迁移和侵袭具有影响,可能通过促进Akt、PI3K磷酸化及S100A4蛋白表达量增加,促进ACC-M的增殖、迁移和侵袭。
文摘[目的]通过检测黄连素对三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)表达的影响,探讨黄连素抗TNBC的机制。[方法]以MTT法检测不同浓度黄连素对MDA-MB-231细胞增殖的影响,筛选黄连素的处理浓度。将MDA-MB-231细胞分为对照组、40μmol·L^(-1)黄连素组、60μmol·L^(-1)黄连素组、免疫球蛋白重链结合蛋白诱导剂X(immunoglobulin heavy chain binding protein inducer X,BiX)组,以及BiX联合40μmol·L^(-1)黄连素组、BiX联合60μmol·L^(-1)黄连素组。相应药物处理24h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以Western blot检测细胞GRP78和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。[结果]40μmol·L^(-1)以上浓度的黄连素可剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖。与对照组比较,BiX组细胞凋亡率降低(P<0.05)、GRP78和Bcl-2表达增高(P<0.01,P<0.001)、Bax表达减低(P<0.05)。与BiX组比较,BiX联合40、60μmol·L^(-1)黄连素组细胞凋亡率增加(P<0.01),GRP78和Bcl-2表达减低(P<0.01,P<0.01),Bax表达增加(P<0.01)。[结论]黄连素可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能是通过下调GRP78的表达,从而降低Bcl-2表达,并促进Bax的表达。
